富漿法制備濃縮血小板影響因素分析

張玉紅，李建斌，單 泓

(河南省紅十字血液中心成分室 河南鄭州 450012)

目前臨床應(yīng)用血小板主要有機(jī)采血小板，國內(nèi)多用CS 3 000plus血細(xì)胞分離機(jī)，單采血小板具有濃度高、純度高、臨床輸注療效好、白細(xì)胞污染少、不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)［1，4］，但也有采集時(shí)間長(50 ～70 min)、成本高、獻(xiàn)血者招募困難等缺點(diǎn)。而手工濃縮血小板具有資源豐富、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，在歐美國家，手工血小板的臨床使用占所有血小板種類的40% ～50%［2，5］。手工血小板的臨床應(yīng)用意義深遠(yuǎn)，河南省紅十字血液中心自2006年來積極開展全血手工分離制備濃縮血小板的工作，現(xiàn)具體報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 主要材料及儀器 大容量低溫離心機(jī)、熱合機(jī)、KX-21型血小板計(jì)數(shù)儀、恒溫血小板震蕩儀，分漿夾等。

1.2 血液采集 多聯(lián)袋采集新鮮全血。獻(xiàn)血前72 h內(nèi)未服用過阿斯匹林類藥物，外周血小板計(jì)數(shù)≥150×109/L，采血順暢，規(guī)格分別為200 ml和 400 ml，要求在采血后6 h內(nèi)，無乳糜、無凝塊、無溶血等。

1.3 血小板制備 富漿法制備濃縮血小板，將新鮮全血平衡后，置于大容量離心機(jī)，離心溫度設(shè)置在22℃，第1次離心采用轉(zhuǎn)速為2 000 r/min，時(shí)間為7 min，離心后，從離心機(jī)內(nèi)小心取出全血，避免震蕩，分別使用分漿夾式分離法和懸掛式虹吸分離法，制備富含血小板血漿和紅細(xì)胞。熱合分離紅細(xì)胞袋后，將留下的富含血小板血漿的兩聯(lián)袋平衡后再次離心，離心條件為22℃、2 800 r/min、12 min，制成血小板濃縮液和貧血小板血漿。分別取樣，檢測不同規(guī)格全血、不同離心條件及不同分離方法對血小板回收數(shù)量的影響。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)參數(shù)用表示，采用單組數(shù)據(jù)的t檢驗(yàn)，用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件錄入數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同規(guī)格全血制備濃縮血小板的質(zhì)控結(jié)果 200 ml全血制備血小板，平均每袋血小板計(jì)數(shù)低于國家標(biāo)準(zhǔn)(≥2.0 ×1010/袋)，利用 400 ml全血制備的濃縮血小板，平均每袋計(jì)數(shù)均達(dá)到了國家標(biāo)準(zhǔn)(≥4.0×1010/袋)。兩種規(guī)格(200 ml和400 ml)全血制備的濃縮血小板，其中紅細(xì)胞和白細(xì)胞殘余量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。具體質(zhì)控結(jié)果見表1。

表1 不同規(guī)格全血制備濃縮血小板質(zhì)量控制結(jié)果(±s)

表1 不同規(guī)格全血制備濃縮血小板質(zhì)量控制結(jié)果(±s)

血袋規(guī)格(ml)袋數(shù)(n)國家標(biāo)準(zhǔn)( ×1010/袋)質(zhì)控結(jié)果血小板計(jì)數(shù)( ×1010/袋)殘余白細(xì)胞(×108/袋)殘余紅細(xì)胞( ×108/袋)200 30 ≥4.0 6.07 ±0.86 3.94 ±0.73 2.14 ±0.35 2.0 1.36 ±0.48 2.02 ±0.27 1.26 ±0.32 400 30 ≥

2.2 不同離心條件制備濃縮血小板的質(zhì)控結(jié)果 離心條件為速度2 000 r/min、時(shí)間7 min、溫度22℃、降速7 r/min時(shí)所獲得的血小板數(shù)量相對較高，具體質(zhì)控結(jié)果如表2。

表2 不同離心條件制備濃縮血小板的質(zhì)控結(jié)果(±s)

表2 不同離心條件制備濃縮血小板的質(zhì)控結(jié)果(±s)

*P ＜0.01。

規(guī)格(ml)袋數(shù)n第1次離心條件轉(zhuǎn)速(r/min)時(shí)間(min)溫度(℃)次離心條件轉(zhuǎn)速(r/min)時(shí)間(min)溫度(℃)第2血小板含量( ×1010/袋)400 30 2000 7 22 2800 12 22 6.26 ±0.54 400 30 1630 7 22 2800 12 22 4.24 ±0.93

2.3 不同分離方法制備濃縮血小板的質(zhì)控結(jié)果 分漿夾式和懸掛式分離手工制備濃縮血小板，分漿夾式分離法獲得的血小板數(shù)量顯著高于懸掛式分離法(P＜0.05)，前者分離法制備的濃縮血小板中混入的紅細(xì)胞、白細(xì)胞明顯低于懸掛式分離。質(zhì)控結(jié)果見表3。

表3 懸掛式及分漿夾式分離方法制備手工血小板的質(zhì)控結(jié)果對比(±s)

表3 懸掛式及分漿夾式分離方法制備手工血小板的質(zhì)控結(jié)果對比(±s)

血小板計(jì)數(shù) 白細(xì)胞殘留量紅細(xì)胞殘留量分漿夾式組別 n 30 6.12 ±0.92 0.38 ±0.27 1.44 ±0.51懸掛式30 5.24 ±0.89 1.23 ±0.48 1.79 ±0.54

3 討論

富漿法制備濃縮血小板是把6 h內(nèi)采集的全血先輕離心制備富血小板血漿(RPR)，再將RPR重離心，移去上層血漿，下層沉淀即為濃縮血小板。該方法制備濃縮血小板，為20世紀(jì)80年代手工血小板分離制備的標(biāo)準(zhǔn)方法。利用富漿法手工制備濃縮血小板的收集率應(yīng)大于70%［3］。但在工作中，手工血小板的收集率及質(zhì)量可以受多種因素影響［6］，如制備血小板原料全血采集的時(shí)間、血袋內(nèi)壁的光滑度、全血采集時(shí)的一針率、全血運(yùn)輸及貯存條件、離心條件等。

在實(shí)踐中，不斷摸索總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)利用400 ml全血制備的濃縮血小板，平均每袋計(jì)數(shù)優(yōu)于200 ml全血，這可能因?yàn)楦粷{法制備濃縮血小板，第一次離心是輕離心，離心后，200 ml全血分離界面相對較小，從離心機(jī)內(nèi)取出到分離的過程中，界面容易破壞，導(dǎo)致分離出的富血小板血漿容量較少，同時(shí)富血小板血漿中有大量血小板粘附在血袋內(nèi)壁，結(jié)果導(dǎo)致血小板收集率較低。而400 ml全血制備血小板時(shí)，盡管有相同因素存在，但由于體積較大，分離界面清晰，分離出的富血小板血漿容量較多，因而血小板的收集率相對較高。利用400 ml全血制備的濃縮血小板數(shù)量均達(dá)到了國家標(biāo)準(zhǔn)。

手工濃縮血小板的質(zhì)量及收集率還與離心條件有關(guān)，離心力的大小、離心時(shí)間的長短、離心溫度以及剎車速度等均可能影響血小板的質(zhì)量及收集率。選擇合適的離心條件對制備濃縮血小板至關(guān)重要。如果離心轉(zhuǎn)速過大，離心時(shí)間過長，會(huì)導(dǎo)致血小板下沉，上層富含血小板血漿內(nèi)血小板含量就會(huì)減少;如果離心轉(zhuǎn)速過低，離心時(shí)間過短，紅細(xì)胞和白細(xì)胞不能很好地下沉，導(dǎo)致離心后分離界面不清，富血小板血漿含量較少，所制備出來的手工血小板收集率較低，且混入的白細(xì)胞和紅細(xì)胞量較多，難以達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)。我們經(jīng)過長時(shí)間的探索，發(fā)現(xiàn)離心條件為速度2 000 r/min、時(shí)間7 min、溫度22℃、降速7 r/min時(shí)所獲得的血小板質(zhì)量相對較好，血小板的收集率相對較高。

另外，分離方法的選擇也會(huì)對手工濃縮血小板的制備產(chǎn)生影響。目前，分離方法有分漿夾式分離法和懸掛式虹吸分離法。分漿夾式分離方法是把離心后的血液置于分漿夾內(nèi)，固定后，打開止血夾，依靠分漿夾的壓力把富血小板血漿擠入空袋內(nèi)，由于血液固定較好，分離界面不易破壞，并能較好控制流速，因而濃縮血小板收集率相對較高，紅細(xì)胞及白細(xì)胞的混入量相對較少;懸掛式虹吸分離法也是血液成分制備常用的方法，但在制備濃縮血小板時(shí)，由于第一次離心時(shí)離心力相對較輕，分離界面穩(wěn)定性較差，血液垂直懸掛時(shí)，分離界面易受外來阻力影響，分離界面易破壞，常常導(dǎo)致血小板收集量少，而紅細(xì)胞及白細(xì)胞混入量相對較多。因此，富漿法制備濃縮血小板時(shí)，建議用分漿夾分離法制備。

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［4］車火嬌，梁芬，李小梅.影響手工制備濃縮血小板數(shù)量因素的探討［J］.護(hù)理實(shí)踐與研究，2009，6(15):122 ～123.

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