乳結散的急性及慢性毒理實驗研究※

徐 巍 韓媛媛 王金艷 于海榮

(河北省唐山市中醫醫院普外科，河北 唐山 063000)

乳結散的急性及慢性毒理實驗研究※

徐 巍 韓媛媛 王金艷1于海榮2

(河北省唐山市中醫醫院普外科，河北 唐山 063000)

動物，實驗;毒理學;毒性試驗;中藥，毒性

乳腺增生病是當代女性的常見疾病，其發病率逐年增高，且復發率高，臨床治療尚無規范的方案，中醫中藥治療有其獨到的療效。我們自1999年以來應用中藥乳結散治療乳腺增生病取得了良好的臨床療效［1］，為確保乳結散臨床應用的安全性，我們進行了乳結散的實驗研究，以期為臨床進一步推廣應用提供毒理學證據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 清潔級健康SD雌性大鼠40只，體質量(200±10)g，用作慢性毒理實驗;清潔級健康昆明雌性小白鼠30只，體質量(20±2)g，用作急性毒理實驗。均由河北醫科大學實驗動物中心提供，動物合格證編號:SCXK(冀)904038。在河北聯合大學動物實驗室喂養，喂以普通飼料(由河北聯合大學動物實驗室按標準配制)，普通飲水。室溫控制在(24±3)℃，濕度(50±10)%，自然光照。

1.1.2 實驗藥物 乳結散由河北省唐山市中醫醫院制劑室提供，藥物組成:柴胡15 g，丹參 15 g，香附 15 g，白術15 g，白芍藥 15 g，茯苓 15 g，當歸 12 g，海藻 12 g，夏枯草12 g，昆布 12 g，生牡蠣 12 g，川芎 9 g，青皮 9 g，穿山甲珠9 g，三棱9 g，莪術 9 g，瓜蔞 9 g，桃仁 6 g。濃縮醇提為10 g/袋，相當于生藥量210 g。

1.1.3 實驗儀器 高速臺式離心機GT16－3(原LG16－3)(北京時代北利離心機有限公司)，日本Carton光學顯微鏡(南京高輝機電貿易有限公司)，邁瑞BC－5500全自動血細胞分析儀(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司)，全自動生化分析儀(濟南漢方醫療器械有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 急性毒理實驗 根據《中藥、天然藥物研究注冊工作手冊》［2］，選用清潔級健康昆明雌性小白鼠30只，隨機分為2組，中藥組和空白對照組各15只。中藥組按正常成人口服10 g/d(相當于生藥210 g)折算成小白鼠的劑量，每日灌服中藥1次，給藥容積為1 mL/20 g體質量，小鼠用藥量相當于生藥量1.037 g。空白對照組予1 mL/20 g體質量0.9%氯化鈉注射液灌服。

1.2.2 慢性毒理實驗 清潔級健康SD雌性大鼠40只，隨機分為4組，正常對照組及乳結散小、中、大劑量組各10只。正常對照組予1 mL/20 g體質量0.9%氯化鈉注射液，乳結散小、中、大劑量組藥物劑量是成人正常用量的5、15、50 倍，即 0.17 g、0.51 g、1.70 g。均為灌胃給藥，每日1次，實驗周期為3個月。

1.3 觀察指標

1.3.1 急性毒理實驗 觀察并記錄給藥7 d內小白鼠的活動、攝食、排泄及死亡等情況，7 d后處死小白鼠，解剖觀察小白鼠各臟器有無異常變化，計算小白鼠的最大耐受倍數。最大耐受倍數=(小白鼠的耐受量×成人平均體質量)/(小白鼠平均體質量×成人每日用量)［3］。

1.3.2 慢性毒理實驗 ①一般性指標:觀察并記錄大鼠的外觀、毛色，社會行為(躁動、冷漠、探究活動)，刺激性(好斗)等和對周圍環境、食物、水的興趣等，體質量變化。記錄有無中途死亡。②給藥結束次日，頸動脈采血，分析各血液細胞學指標［白細胞計數(WBC)、紅細胞計數(RBC)、血紅蛋白(Hgb)、血小板計數(PLT)］及血液生化學指標［丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)、肌酸激酶(CK)］。③處死大鼠后測量心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦的臟器系數(臟器濕質量/體質量×100%)④病理學檢查:重要臟器進行病理切片，光學顯微鏡下40倍觀察。

1.4 統計學方法 應用 SPSS 11.5統計軟件包進行統計學分析，計量資料用均數±標準差()表示，采用t檢驗。

2 結果

2.1 急性毒理實驗 小白鼠在給藥7 d內無死亡，給藥后觀察小鼠外觀、毛色、光澤正常，社會行為、反應均正常，攝食、排泄正常。7 d后人工處死解剖，觀察其心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦、卵巢、子宮均未見異常。病理學檢查:蘇木精－伊紅(HE)染色，中藥組臟器表面光滑，組織結構排列有序，細胞大小、形態正常，胞漿、胞核染色清晰，與空白對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。計算結果顯示小白鼠對乳結散的最大耐受倍數為成人的250倍。

2.2 慢性毒理實驗

2.2.1 一般性指標 乳結散小、中、大劑量組和正常對照組大鼠的外觀、毛色，社會行為、刺激性等和對周圍環境、食物、水的興趣等比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。4組大鼠實驗后體質量均較本組實驗前增加(P＜0.05)，但4組實驗后體質量比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。

2.2.2 4組大鼠實驗后血液細胞學指標比較 見表1。

表1 4組大鼠實驗后血液細胞學指標比較±s

表1 4組大鼠實驗后血液細胞學指標比較±s

組 別 n WBC(×109/L) RBC(×1012/L) Hgb(g/L) PLT(×109/L)正常對照組 10 7.32 ±1.12 6.65 ±0.67 143.21 ±10.65 446.45 ±51.27乳結散小劑量組 10 7.54 ±1.45 6.89 ±0.59 149.54 ±11.27 412.57 ±63.12乳結散中劑量組 10 7.44 ±1.29 6.39 ±0.72 146.86 ±12.26 462.88 ±47.83乳結散大劑量組 10 7.92 ±1.18 6.19 ±0.83 143.35 ±10.17 471.89 ±39.21

由表1可見，4組大鼠實驗后血液細胞學指標比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。

2.2.3 4組大鼠實驗后血液生化學指標比較 見表2。

表2 4組大鼠實驗后血液生化學指標比較±s

表2 4組大鼠實驗后血液生化學指標比較±s

組 別 n ALT(U/L) AST(U/L) TP(g/L) Alb(g/L)BUN(mmol/L)Cr(μmol/L)LDL－C(U/L) CK(U/L)正常對照組 10 67.32 ±8.12 146.65 ±41.27 60.53 ±8.56 39.36 ±2.56 5.32 ±1.02 60.36 ±9.34 1546.43 ±421.32 2054.68 ±648.12乳結散小劑量組 10 61.18 ±9.45 163.45 ±47.52 64.31 ±6.45 40.53 ±1.54 6.11 ±1.34 64.75 ±11.62 1288.62 ±358.82 2446.51 ±721.32乳結散中劑量組 10 60.22 ±8.83 159.61 ±29.25 67.92 ±7.16 38.78 ±1.92 5.48 ±1.21 57.12 ±12.19 1473.71 ±371.68 2246.68 ±558.94乳結散大劑量組 10 65.58 ±5.68 171.14 ±56.78 67.82 ±3.98 38.28 ±2.16 6.46 ±1.52 59.79 ±10.27 1593.57 ±415.182347.95 ±681.57

由表2可見，4組大鼠實驗后血液生化學指標比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。

2.2.4 4組大鼠實驗后各重要臟器系數比較 見表3。

表3 4組大鼠實驗后各重要臟器系數比較%，±s

表3 4組大鼠實驗后各重要臟器系數比較%，±s

組 別 n 心臟 肝臟 脾臟 肺臟 腎臟 腦正常對照組 10 1.32 ±0.12 10.65 ±1.27 0.56 ±0.06 1.46 ±0.162.32 ±0.11 2.01 ±0.07乳結散小劑量組 10 1.18 ±0.45 10.45 ±1.24 0.61 ±0.05 1.53 ±0.11 2.11 ±0.09 2.12 ±0.03乳結散中劑量組 10 1.22 ±0.36 9.61 ±1.12 0.62 ±0.06 1.78 ±0.09 2.24 ±0.12 2.09 ±0.05乳結散大劑量組 10 1.17 ±0.31 10.11 ±1.09 0.67 ±0.08 1.56 ±0.122.46 ±0.12 2.05 ±0.06

由表3可見，4組大鼠實驗后各重要臟器系數比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。

2.2.5 4組大鼠實驗后病理學檢查 4組大鼠處死后重要臟器行病理切片染色檢查，HE染色。乳結散組大鼠臟器組織結構排列有序，細胞大小、形態正常，胞漿、胞核染色清晰，與正常對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

3 討論

疏肝健脾、活血散結中藥乳結散是我們臨床總結的方劑，此方集“疏肝解郁、散結祛瘀消癥、活血行氣止痛”為一體，行散結合共奏療效，臨床觀察對乳腺增生有良好的治療效果［4］，為了對該方劑的安全性進行驗證，我們進行了急性和慢性毒理學研究。急性毒理實驗研究證實了小白鼠對乳結散的最大耐受劑量是成人常用量的250倍，慢性毒理實驗研究證實了大鼠在接受正常成人乳結散用量5、15、50倍的給藥劑量下，各血液細胞學指標、血液生化學指標與正常對照組比較差異均無統計學意義，證實了乳結散藥物的安全性。從急性毒理實驗來看，2組小白鼠均無1例死亡和中毒，小白鼠的最大耐受量為成人劑量的250倍，一般認為小鼠最大耐受量相當于成人的臨床常用量的100倍以上即為安全［5］，本實驗表明乳結散對小白鼠無急性毒性作用。慢性毒理實驗研究表明，連續3個月的給藥，4組大鼠均健康成長，體質量增加，毛色光滑，飲食良好，活動自如，對外界環境反應良好。在對實驗大鼠的體質量的觀察中，4組大鼠實驗后體質量均較本組實驗前增加(P＜0.05)，但4組實驗后體質量比較差異無統計學意義(P＞0.05)，表明乳結散對大鼠的成長無明顯影響。4組大鼠實驗后血液細胞學指標和生化學指標比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，各臟器系數比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，表明乳結散對實驗大鼠成長期重要臟器無明顯影響。同時，病理學檢查未見乳結散組顯示出明顯的病理形態學改變，也證實了乳結散的安全性。本實驗結果表明，乳結散口服安全性大，無明顯的急、慢性毒副作用，可以在臨床進一步推廣使用。

［1］李霞.乳結散治療乳腺增生病65例［J］.河北中醫，2001，23(10):754.

［2］張淑秀，華玉琴.中藥、天然藥物研究注冊工作手冊［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:117.

［3］張喜平，程琪輝，張宇.黃芩苷膠囊小鼠急性毒性試驗［J］.醫學研究雜志，2006，35(9):16－19.

［4］徐巍，竇淑榮，陳永平，等.乳痛消乳結散治療乳腺增生106例［J］.陜西中醫，2006，27(4):438－439.

［5］錢海兵，吳毅偉，韓媛媛，等.滋腎填精益髓類中藥的毒理實驗研究［J］.陜西中醫，2010，31(7):918－920.

R－331;R－332;R259.95;R287

A

1002－2619(2012)11－1707－03

※項目來源:河北省中醫藥管理局2009年度中醫藥、中西醫結合科研計劃課題(編號:2009214)

1 唐山開灤總醫院趙各莊醫院內三科，河北 唐山 063000

2 河北省灤縣榛子鎮中心衛生院，河北 灤縣 063000

徐巍(1975—)，男，副主任醫師，碩士。從事普外科臨床工作。

2012－05－31)