微粒子化學發光法檢測梅毒螺旋體特異性抗體的性能評價

李 囡，金燕萍，閻 超

（中日友好醫院 檢驗科，北京 100029）

目前，大多醫院將梅毒螺旋體抗體檢測作為術前常規檢查和產前篩查項目，這使得傳統的血清學手工實驗難以滿足日益增長的樣本量需要。目前已有多種全自動免疫分析儀具備大量檢測梅毒螺旋體抗體的能力，本文著重對Architect i2000SR全自動化學發光微粒子免疫分析儀檢測梅毒螺旋體特異性抗體的靈敏度、精密度、攜帶污染率等方面進行評價。

1 材料

1.1 標本來源

收集130例血清為2011年10月～2012年8月間我院門診和住院患者，均行TPPA和CMIA檢測。

1.2 儀器和試劑

梅毒螺旋體特異性抗體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）試劑盒 （由日本富士株氏會社提供）；Architect i2000SR型微粒子化學發光免疫分析儀（CMIA）及其配套Syphilis TP診斷試劑（由美國雅培提供）。

2 方法

（1）明膠顆粒凝集法檢測：嚴格按照TPPA試劑盒說明書對130例臨床血清進行梅毒螺旋體特異性抗體檢測。儀器法檢測：用i2000重復檢測130例臨床樣本，S/Co值≥1為陽性，＜1為陰性。（2）比較儀器法與TPPA的靈敏度：將弱陽性混合血清進行4個稀釋度的倍比稀釋，對每個稀釋度的血清分別用CMIA法和TPPA試劑盒測定10次，比較兩者的靈敏度。（3）精密度：將陽性混合血清制成3個稀釋水平的樣本，作為高值、中值、和低值血清。3個水平的樣本每天測定3次，（每次測定間隔不得少于2h），每次測定均做3份，連續測定3d。對所得數據計算批間、日間及總變異。（4）攜帶污染率：選取強陽性血清為高值標本，均分為3管，標注為H1、H2、H3，選取陰性血清為低值標本，均分為 3管，標注為 L1、L2、L3，將低高值血清相互交叉排放，連續測定6管，利用以下公式計算攜帶污染率，攜帶污染率＝（L1－L3）/（H3－L3）×100%。 （5）用 SPSS11.0 統計軟件進行分析。2種方法檢測結果的差異用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

（1）130例血清經CMIA法檢測陽性103例，陰性27例；TPPA法檢測陽性102例，陰性28例，兩者差異無統計學意義（P＞0.05）。不一致樣本3例（表1）。以TPPA法檢測結果為標準，CMIA的敏感度為99%（101/102），特異性為93%（26/28）。（2）CMIA法檢測弱陽性混合血清從1:4稀釋度開始為陰性（S/Co 0.85）；TPPA法從1:2稀釋度開始為陰性。CMIA法靈敏度高于TPPA法。（3）經重復性試驗，CMIA法在3個不同水平測定值的批間和批內變異系數均小于10%（表2）。（4）根據公式計算，攜帶污染率=（0.093-0.09）/（29.78-0.09）×100%=0.01%（表 3）。

表1 2種方法檢測結果比較

表2 CMIA的精密度檢測結果

表3 攜帶污染實驗結果

4 討論

目前，臨床實驗室診斷梅毒螺旋體感染的主要方法是血清學實驗，包括對梅毒螺旋體非特異性抗體和特異性抗體的檢測。常用的檢測非特異性抗體的實驗包括甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）、快速血漿反應素環狀卡片實驗（RPR），檢測特異性抗體的實驗包括明膠顆粒凝集實驗（TPPA）、血凝實驗 （TPHA）和酶聯免疫吸附實驗 （TPELISA）[1]。由于前2種方法檢測的不是梅毒螺旋體的特異性抗體，有較高的假陽性率和假陰性率，因此僅作為初篩實驗。凝集法作為臨床確證實驗又有手工操作較為繁瑣、肉眼判斷結果受人為因素干擾等缺陷[2～4]。TP-ELASA在大樣本量操作時又難于保證加樣及反應時間的一致。

雅培Architect i2000SR全自動化學發光微粒子免疫分析 （CMIA）是以梅毒螺旋體重組抗原TpN15、pN17和TpN47包被磁性微粒，待檢血清中如有相應的抗體，則可與磁微粒上的抗原結合，再加入吖啶酯標記的二抗以及激發液和預激發液。通過激發光的強度對血清中的特異性抗體進行相對定量。

以上實驗證實，CMIA法具有很好的重復性和極低的攜帶污染率。與目前梅毒螺旋體特異性抗體的臨床確證實驗比較，該法具有更高的靈敏度，結果判定更為客觀一致，適合大規模常規篩查。本文檢測的130例血清中，2種方法檢測一致的標本為127例，一致率為98%。不一致樣本中，有1例為CMIA法檢測陰性，TPPA檢測弱陽性。TPPA可能會在某些患有慢性疾病如SLE、糖尿病、肝硬化，及長期使用免疫抑制劑的患者中出現假陽性的結果[5]，由于該患者為我院皮膚科門診患者，未能進行跟蹤隨訪。另外2例血清CMIA法檢測陽性而TPPA陰性，這2例均來自本院住院患者，未被診斷為梅毒螺旋體感染。因此不排除CMIA法假陽性的可能[2]。這2份血清的S/Co值均在1～2之間，因此在臨床應用中，對于CMIA法檢測弱陽性的血清，進行TPPA的復檢是必要的。

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[5]張冀寧，張慶瑞，李蘊慧.5例老年男性內科病患者梅毒螺旋體血凝試驗假陽性臨床分析 [J]中華皮膚科雜志，2000，33（3）：197.