細葉野牡丹的組培快繁1)

楊利平 劉桂芳 劉雪凝

(長江師范學院，重慶，408100)

野牡丹屬(Melastoma)植物為野牡丹科(Melastomataceae)多年生常綠灌木或小灌木，集中分布在熱帶或亞熱帶，在我國有9種，主要產于華南和西南地區［1］。細葉野牡丹(Melastoma intermedium Dunn)莖半匍匐生長，植株低矮，莖葉緊密，花期較長［2］，不僅可作為高檔的地被材料，也是盆栽垂吊植物的優良新種質。我國野牡丹屬的大多數種類分布較廣，種群數量大，有些種類已經被廣東省的一些城市引種應用，其景觀地方特色明顯［3］。野牡丹屬植物的組培擴繁研究工作涵蓋了該屬的大部分種類［4－12］，為野牡丹的廣泛園林應用作了必要的基礎工作。由于細葉野牡丹在自然界的種群數量少［13］，要作為園林植物利用，首先要解決其擴繁技術。目前，細葉野牡丹繁殖研究僅限于枝條扦插［9］，必要的組培快繁工作還未見開展。本研究以細葉野牡丹枝條為材料，對其組培快繁中的一些基本問題進行試驗分析，為細葉野牡丹的進一步規模化工廠育苗提供依據。

1 材料與方法

細葉野牡丹采集于廣東省韶關市的芙蓉山。取當年生半木質化枝條，剪除葉片后剪成10 cm長的莖段，置于燒杯中，軟刷沾洗潔精清洗莖表，再流水沖洗30 min，75%酒精浸泡20 s，無菌水沖洗2次，0.2%升汞消毒12 min，無菌水洗5次，吸干表面水分。將枝條切成1.5 cm單芽莖段為外植體，接種到初代誘導培養。待芽誘導成功后，將芽轉到繼代培養基中繼代增殖培養;待芽的數量達到要求后，將芽轉入生根培養基中生根培養。分別統計起始萌動時間、誘導率、平均芽(枝)長、增殖倍數、芽生長狀況和生根率、根的生長狀況等。

培養條件以MS為基本培養基。誘導芽萌發及分化培養基為 MS+6－BA(0.5，1.0，1.5，2.0)mg·L－1+NAA(0.1，0.5，1.0)mg·L－1共 9 種培養基;芽的生長增殖培養基為 MS+6－BA(0.1，0.3，0.5，0.7，1.0)mg·L－1+NAA(0.01，0.05，0.1，0.15，0.2)mg·L－1共20種培養基;生根培養基為1/2MS+NAA(0.1，0.2，0.3，0.4，0.5)mg·L－1共 5 種培養基。所有培養基均含3%蔗糖和0.8%瓊脂，pH=5.6。培養溫度為(25±1)℃，光強為3 000 lx，光照時間14 h·d－1。

生根后移栽到泥瓦盆中栽培，基質為消毒的V(草炭)∶V(珍珠巖)∶V(腐葉土)=1∶1∶1混合基質。日常管理至開花。

2 結果與分析

2.1 初代誘導培養

外植體在誘導培養基上培養12 d后，有些腋芽開始萌動，40 d后節間部位可分化出1～3個不定芽，同時，有少量莖段基部切口部位形成黃綠色愈傷組織(圖1－A、B)。所選用的培養基對芽誘導率一般在50%以上，最高可達到80%。對誘導率和芽的生長狀況而言，培養基 MS+6－BA1.0 mg·L－1+NAA0.5 mg·L－1效果明顯好于其他的，培養基MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.1 mg·L－1的誘導效果最差(表1)。由于細葉野牡丹莖段生有細毛，易造成離體繁殖的污染。本試驗的外植體清洗和消毒方法可使初代培養的污染率控制在15%。

圖1 細葉野牡丹組培快繁

表1 激素質量濃度配比對細葉野牡丹誘導的影響

2.2 繼代增殖培養

嫩芽在繼代培養基上培養10 d左右，有約17%長出黃綠色的愈傷組織，25 d左右在愈傷組織的表面直接分化出叢芽，其余近83%直接在接種芽的基部形成叢生芽。叢芽分割成單芽在培養基上繼代培養快速增殖，在大多數芽的基部重新形成叢生芽，只有少量經過愈傷組織途徑再分化出大量的叢芽(圖1－C)。待不定芽長到6～8 cm時，將其葉片去除，根據節間長短切割成1 cm左右的單芽或2芽莖段，不斷在增殖培養基上繼代培養，每30 d繼代1次，6個月時統計，平均每月可增殖3.2倍。在所有培養基中MS附加0.5 6－BA mg·L－1與低質量濃度的NAA配比的芽增殖效果較好，其中 MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.05 mg·L－1和 MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.1 mg·L－1的平均每月芽增殖倍數為 3.6。該激素配比下生長的芽顏色正常，但芽狀體態顯得不如 MS 附加0.7 6－BA mg·L－1的粗壯(表2)。隨著繼代培養時間延長至45～55 d不轉瓶，在叢生芽的基部可直接長出根系，但根系較短，且細弱。

2.3 生根培養

將芽切成4～5 cm長，轉入到生根培養基上培養，1周后可見到基部根的形成，1個月后生根率100%。其中，主根1～3條，而須根則較豐富(圖1－D)。低質量濃度的NAA對誘導根系生長效果最好，根長、粗壯且側根豐富(表3)。

2.4 出瓶培養

溫室煉苗3 d，將試管苗從培養瓶中取出，用自來水沖洗干凈后，將幼苗移栽到滅菌的V(草炭)∶V(珍珠巖)∶V(腐葉土)=1∶1∶1的栽培基質中，并在溫室中生長，注意遮陰，3個月后統計成活率，87%以上的移栽植株能夠成活(圖1－E)。第二年5—6月份開出紫紅色花朵，單朵花開放時間為1 d，從花蕾現色到花朵脫落的可觀賞期約為7 d(圖1－F)。

表2 激素質量濃度配比對細葉野牡丹繼代增殖的影響

表3 激素質量濃度配比對細葉野牡丹生根的影響

3 結論與討論

本研究在總結前人工作基礎上，設計出以6－BA和NAA為生長調節劑的誘導培養基和繼代培養基激素配比。在MS培養基上，細葉野牡丹莖段腋芽可以直接誘導萌發，其中 MS+6－BA1.0 mg·L－1+NAA0.5 mg·L－1的誘導率達到80%。經過MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.05 mg·L－1和 MS+6－BA0.5 mg·L－1+NAA0.1 mg·L－1繼代培養，平均每月芽增殖倍數最高。在生根培養1個月后，全部生根，其中1/2MS+NAA0.1 mg·L－1根系生長狀態最好。細葉野牡丹組培生根中發現了有趣的現象，幾乎所有細根呈現等距均勻排列高密度區，根尖橙紅色(圖1－D)。這一現象在野牡丹屬組培研究中未見報道，可能與該種細根中內含物種類與分布有關。

在一定時間內擴繁出健康正常芽的數量是衡量組培快繁體系的重要指標。繼代培養半年后統計，細葉野牡丹平均每月芽增殖可達到3.2倍，略高于印度野牡丹(Melastoma malabathricum)［8］、紫毛野牡丹(Melastoma penicillatum)［11］和展毛野牡丹(Melastoma normale)［12］?？梢?，細葉野牡丹的高效組培體系已經基本成功建立。

細葉野牡丹生根率與展毛野牡丹一樣，均可達100%，稍高于伍成厚等［8］、彭東輝等［11］對印度野牡丹和紫毛野牡丹的研究結果。組培苗產業化的主要指標之一是移栽成活率，本研究的細葉野牡丹生根率為87%，與印度野牡丹基本一致［8］，高于紫毛野牡丹［11］。

盆栽垂吊花卉是室內盆花中的重要組成部分，但其中的木本植物還不多見。細葉野牡丹枝條輕盈、花朵直徑較大、花色鮮艷、異型雄蕊奇特，是開發垂吊花卉的新種質。同時，細葉野牡丹半匍匐生長的特點，也可作為優良的地被植物。通?；ɑ軘U繁通過有性(種子繁殖)或無性方式來實現。自然環境中細葉野牡丹個體數量少，不易得到，其種子萌發率也不高［13］，同時，種子萌發到植株開花至少需要將近4 a的時間［5］。雖然扦插繁殖已經獲得成功，但繁殖系數較低［9］。相比之下，細葉野牡丹組培有快繁容易、繁殖系數高及生育期縮短的明顯優勢，因此，組培快繁為細葉野牡丹的產業化生產提供可行的基礎。

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