ACL TOP血凝儀兩種方法相結合檢測纖維蛋白原的分析

彭賽亮，梁小亮，尹向飛

(廈門市第二醫院，福建 廈門 361021)

纖維蛋白原既是一種重要的凝血因子，參與機體正常凝血反應，也是一種急性時相反應蛋白，與心腦血管疾病、惡性腫瘤及腎臟疾病等關系密切，近年來對Fib的檢測越來越受到重視。Fib 檢測方法有很多種[1,4]，由于Fib的基因多態性使其具有高度異質性[2]，影響檢測的因素很多，所以各種檢測方法所得結果差異較大。目前常規檢測較多運用的是PT-der 法和Clauss 法，為探討ACL TOP 血凝儀上這兩種方法測定Fib 結果的差異，筆者對部分標本同時用兩法進行了檢測分析。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑 ACL TOP全自動血凝儀及配套進口試劑：Fib-C(LOT：N0185581)，PT Recombiplastin(LOT：N0215219，ISI：0.82)，正常值質控血漿(LOT：N0386069)，低值質控血漿(LOT：N0185576)。

1.2 兩種質控血漿分別用PT-der 法和Clauss 法檢測其Fib含量，每法重復檢測10次，分別計算其均值、標準差與變異系數。

1.3 實驗對象和方法 我院集美院區住院及門診患者，每天隨機選取10名患者，性別年齡不限，采集靜脈血2.7ml(內含109mmol/L 枸櫞酸鈉0.3ml)，3000rpm 離心15min，取乏血小板血漿，分別用PTder 法和Clauss 法檢測血漿中的Fib，在2h 內完成檢測，連續檢測9d。

2 結果

2.1 兩種方法檢測質控血漿Fib的比較

表1 結果表明，兩種方法的精密度(CV<10%)和準確度都很好，PT-der 法檢測結果明顯高于Clauss法(P<0.01)。

2.2 兩種方法檢測常規標本Fib的比較

表2 結果表明，兩種方法檢測Fib 相關性很好(r=0.92-0.98),PT-der 法所測Fib值明顯高于Clauss法(P<0.01)。將PT-der 法所測Fib值按回歸方程轉換后兩法的Fib值見表3，經轉換后兩種方法的Fib值無顯著性差異(P>0.05)。兩種方法所測Fib值分布見表4，提示經轉換后，兩種方法檢測的Fib值分布很接近。

表1 兩種方法檢測兩種質控血漿的Fib 結果

表2 兩種方法檢測90份常規標本Fib的結果()

3 討論

Fib 是一種相對分子量為340KD的糖蛋白，由Aα、Bβ、γ 三條肽鏈的對稱二聚體(Aα、Bβ、γ)所構成，三條多肽鏈通過29個二硫鍵相連接。根據纖維蛋白原分子中Aα 鏈的異質性,Fib 分為高相對分子量(HMr)、低相對分子量(LMr)和LMr′三種,在正常血漿中分別占總Fib的70%、26%和4%，HMr比LMr和LMr′更易凝集[4]。

表3 PT-der 法轉換后Fib值與Clauss 法的比較()

表4 兩種方法檢測90例患者Fib值的分布

檢測Fib的方法有物理化學方法、功能性方法和免疫學方法等幾類，其中，Clauss 法是WHO 推薦的參考方法[10]。ACL TOP全自動血凝儀的準確度、精密度及抗干擾能力均很好[3]，可以通過PTder 法和Clauss 法檢測血漿中的Fib，均有配套試劑，且Clauss 法已溯源到Fib 標準品(98/612)。PTder 法的原理是在檢測PT 時Fib 完全轉變為纖維蛋白，其濁度變化與Fib含量呈正比；Clauss 法的原理是在標本中加入過量凝血酶，使Fib 轉變成纖維蛋白而凝固，Fib的含量與出現凝固的時間呈負相關，能直接反應Fib的凝血功能。

本研究以質控血漿和臨床標本為對象分別用PT-der 法和Clauss 法檢測Fib值，發現兩種方法檢測質控血漿Fib 精密度(CV<10%)和準確度都很好，但PT-der 法檢測結果明顯高于Clauss 法(P<0.01)；分別用兩種方法檢測90例臨床標本的Fib，結果表明，兩種方法檢測Fib 相關性很好(r=0.92-0.98)，但PT-der 法檢測Fib 高、中、低值均明顯高于Clauss 法(P<0.01)，這與曾文坦等[7，8]報道相似。有文獻報道，當Fib 在正常值范圍兩種方法檢測無差異，但當Fib 過高或過低時或PT 異常時兩者所測值有差異[4-6]，黃作群等[9]報道PT-der 法檢測Fib低于Clauss 法,與本實驗結果有差異,這可能是因為纖維蛋白原的多樣性所致，與血漿中所含其它成分如肝素、FDP、纖溶酶激活等也有關系，并與所用儀器及試劑不同也有很大關系。本實驗中Clauss法所測Fib 結果約是PT-der 法的70%-75%，這與HMr 占血漿總Fib含量相當，是否PT-der 法檢測的是血漿總Fib含量，而Clauss 法所檢測的就是活性較強的HMr 部分？ 將PT-der 法所測Fib值進行回歸轉換，與Clauss 法相比較無差異(P>0.05)。參照文獻[3]所定參考范圍，轉換前，PT-der 法所測Fib值在低值、正常值和高值分布與Clauss 法差異很大，轉換后PT-der 法與Clauss 法非常接近。

在日常臨床檢驗工作中，標本的Fib 先用PTder 法檢測，當PT 結果正常且Fib 處于2.63～6.50g/L 之間時，Fib 結果利用回歸方程進行轉換后即可報告；凡是PT>13s、Fib值低于2.63 g/L 或 高于6.50 g/L(PT-der 法)的標本用Clauss 法重新檢測(可在ACL TOP 設置自動運行)，這樣就能有效地避免因為方法原因而導致的Fib 異常標本的漏檢及正常標本的誤報。既能滿足臨床需要，同時又能節省檢測成本和時間。同時堅持做好室內質控，定期檢測正常值質控血漿；試劑更換批號需重新定標并校正回歸方程；每天隨機取5～10份臨床標本用Clauss 法同時檢測Fib值，并結合儀器自動同時用兩法檢測的Fib 結果，每周統計分析其相關性。對于某些特殊疾病如血栓性疾病、腎病綜合征、腦梗死、心肌梗死、某些血液病及纖溶活性增高的疾病和服用某些藥物如溶栓藥物等需監測Fib 時標本必需同時用Clauss 法測定其Fib含量，以免由于方法差異而誤診。

綜上所述，在ACL TOP全自動血凝儀上用Clauss 法和PT-der 法檢測Fib 結果精確度和準確度均較好，PT-der 法結果比Clauss 法偏高，兩者相關性良好。將PT-der 法和Clauss 法相結合能達到有效而經濟地檢測標本Fib的效果。

[1]彭黎明,曾著黎.血漿纖維蛋白原測定方法[J].檢驗醫學，2004，19(2)163-166.

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[3]唐 寧，曹文靜，夏汛生,等.ACLTOP全自動血凝分析系統的性能評價[J].醫療設備信息，2007，22(2):48-51.

[4]程 烽,朱忠勇,王 丹,等.5種纖維蛋白原測定方法的比較[J].臨床檢驗雜志，2000,18(1)12-14.

[5]彭裕輝，方裕森，許鎰洧,等.Von Clauss 法與PT 衍生法測定纖維蛋白原在全自動血凝儀的應用比較[J].中國醫藥導報,2011,8(12):84-86.

[6]宋曉萍，龔旭疆，徐連強,等.PT-der 法與Clauss 法血漿纖維蛋白原方法的試驗分析[J].江西醫學檢驗,2002,20(4):245.

[7]曾文坦，周宇丹，肖永輝.PT 衍生的纖維蛋白濃度測定及臨床應用[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(3):265 -266

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[9]黃作群,覃桂芳,唐 萍.PT-der 法與von-clauss 法檢測纖維蛋白原結果比較[J].廣西醫學,2007,29(4):694-695.

[10]熊立凡.臨床檢驗基礎[M].第3 版,北京：人民衛生出版社，2006：93.