兩種酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的結(jié)果比較

胡 越，蔣瑞馨，邵家幼

(無錫市紅十字中心血站檢驗科，江蘇 無錫 214021)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是嚴重危害人類健康的傳染病，輸血是HBV 傳播的主要途徑之一，我國是HBV 感染的高流行區(qū)，約9.7%的人群為HBV 攜帶者[1]。為防止HBV 經(jīng)血液傳播，《獻血者健康檢查要求》(GB18467-2001)要求對獻血者篩查表面抗原HBsAg，但是據(jù)文獻報道，使用一步法檢測時，樣本中的抗原或抗體濃度過高會因鉤狀效應(yīng)造成假陰性漏檢，從而增加輸血傳播的風(fēng)險[2-3]。本研究通過比較ELISA 一步法和二步法檢測結(jié)果，探討ELISA 一步法中鉤狀效應(yīng)對檢測HBsAg 結(jié)果的影響，評價ELISA 二步法檢測HBsAg的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 標本來源 1200份無償獻血初檢標本來源于無錫中心血站2011年1月至5月無償獻血者。

1.2 試劑與儀器 乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗一步法和二步法診斷試劑盒均來自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司。酶免分析采用瑞士HAMILTON全自動酶免系統(tǒng)，TECAN全自動加樣系統(tǒng)。

1.3 方法

1.3.1 檢測步驟嚴格按說明書進行操作。

1.3.2 6份乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗一步法檢測結(jié)果陰性，懷疑存在鉤狀效應(yīng)的標本進行1:5、1:10、1:30、1:60倍稀釋后，再采用乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗一步法進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SSPS13.0 統(tǒng)計軟件進行處理，率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同方法檢測HbsAg 結(jié)果比較 1200份無償獻血初檢標本經(jīng)二步法檢測出35份陽性，一步法僅檢測出29份陽性。陽性率分別為2.92%和2.42%,兩種方法檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 6份疑有鉤狀效應(yīng)標本一步法檢測結(jié)果 將6份標本分別進行1:5、1:10、1:30、1:60倍稀釋，檢測結(jié)果見表1。

表1 6份疑有鉤狀效應(yīng)標本不同稀釋倍數(shù)下一步法檢測結(jié)果

表2 不同方法檢測6份疑有鉤狀效應(yīng)標本結(jié)果

2.3 6份疑有鉤狀效應(yīng)標本不同方法檢測結(jié)果見表2。

3 討論

本研究對乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗二步法檢測為陽性，而乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗一步法檢測為陰性，懷疑存在鉤狀效應(yīng)的6份標本進行1:5、1:10、1:30、1:60倍稀釋，再用乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗一步法檢測，結(jié)果全部轉(zhuǎn)為陽性。說明乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗一步法檢測這6份標本時存在鉤狀效應(yīng)，并且將這些標本進行適當倍數(shù)稀釋后可以消除鉤狀效應(yīng)，這與相關(guān)文獻報道一致[4-5]，而乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗二步法由于待測抗原和酶標抗體是分兩步加入的，因此不存在競爭抑制，即避免了鉤狀效應(yīng)。

本文結(jié)果表明，在篩查大量標本時，乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗二步法檢測結(jié)果比一步法檢測結(jié)果更可靠。一步法檢測HBsAg 時應(yīng)考慮到鉤狀效應(yīng)對試驗結(jié)果的影響，可以通過稀釋法或二步法完全或部分消除鉤狀效應(yīng)，保證檢測結(jié)果的敏感度。另外文獻報道ELISA 孵育過程中適當振蕩也可以消除鉤狀效應(yīng)[6]，這在今后的研究中有待加以補充完善。

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[3]陳仁杰,胡海燕,嚴銀燕.ELISA 一步法檢測梅毒抗體鉤狀效應(yīng)三例[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2008,26(2):215.

[4]單桂秋，李秋生，肖韶英，等.檢測乙型肝炎表面抗原的一步法試劑的鉤狀效應(yīng)分析[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2002,25(2):107-108.

[5]楊 劍.ELISA 一步法和二步法檢測乙肝HBsAg的結(jié)果比較[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2011,29(5):569.

[6]陳兆鵬，單永海，周紀芬.減少一步法ELISA 鉤狀效應(yīng)的方法探討[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志，1999,14(1):59-60.