CIK細胞治療晚期惡性腫瘤的臨床研究

任 慶，熊銳華，田秀榮，羅克品，周 欣

(中國人民解放軍第181醫院腫瘤治療中心，廣西 桂林541002)

惡性腫瘤患者就診時多數病情已達晚期，且體質虛弱，無法進行手術、放、化療等治療。細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）是近年來逐漸嶄露頭角的生物治療手段，對預防腫瘤復發、清除患者體內殘留的腫瘤細胞，改善晚期腫瘤患者的生活質量提供了新的治療途徑。我中心自2009年2月至2009年10月采用該方法治療無手術以及放、化療指征的晚期惡性腫瘤患者42例，取得了一定療效，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本中心2009年2月1日至2009年10月31日，共治療42例病理學或細胞學確診的惡性實體瘤，Ⅲ期20例，Ⅳ期22例，KPS評分50～60分，均存在可測量病灶，預計生存期≥3個月，治療前心、肝、腎功能及血常規大致正常；男性24例，女性18例，年齡35～80歲，中位年齡56.9歲；非小細胞肺癌10例，小細胞肺癌4例，乳腺癌8例，胃癌5例，結腸癌2例，肝癌6例，胰腺癌2例，卵巢癌2例，鼻咽癌3例；患者本人或法定代理人知情并簽署《知情同意書》，通過醫院倫理委員會同意后才能接受治療。所有病例均能記錄真實的聯絡方式，以便隨訪。

1.2 CIK細胞的制備

采用異體外周血淋巴細胞分離液50 mL，分離并收集患者外周血單個單核細胞，用PBS洗滌細胞3次，將細胞按2×106個/mL的密度懸浮于RPMI1640完全培養液中，加入干擾素-γ1000 μ/mL，置于37℃、CO2體積分數為5%的條件下培養24 h，再加入抗CD3單克隆抗體100 ng/mL，白細胞介素-21000 μ/mL繼續培養，每隔2～3 d分瓶1次，并補加完全培養液及IL-2。培養至10～14 d經檢測無污染后，收集CIK細胞（數量約為1×109個），離心并用0.9%NaCL溶液洗滌細胞3次，最后以0.9%NaCL溶液20 mL重懸細胞。

1.3 治療方法

患者給予CIK細胞靜脈輸注，每次輸注細胞數量近似于1×109個，總體100 mL，每天1次，連續10 d為1個療程，治療1個月為1個療程。每個患者進行3～4個療程治療。若患者在治療過程中病情進展則停止治療。在開始上述治療后，患者即正式進入隨訪期。

1.4 療效評價

（1）于治療前、治療結束后行CT檢查，并進行比較以評價療效，1個月后復查確認療效。此后每3個月復查1次。近期療效評價參照 “實體瘤療效評價標準（RECIST）”進行評價，分為完全緩解（CR），部分緩解（PR），疾病穩定（SD），疾病進展（PD），客觀緩解率（ORR）即CR+PR的例數占所有病例的百分率。（2）PFS：是指患者從首次用藥至疾病進展或任何原因死亡的時間。OS：是指患者首次用藥至任何原因死亡的時間。（3）采用流式細胞儀檢測患者治療前后CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+等細胞免疫指標，分析T淋巴細胞亞群變化情況。（4）生活質量評分主要記錄精神情緒、睡眠、食欲及體力狀況，以數字0～5分表示，0分為無干擾，2～4分為一般干擾，5分為嚴重干擾。根據受干擾的程度分別記錄。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 近期療效

42例患者均可評價療效。其中1例CR（鼻咽癌患者），6例PR（非小細胞肺癌1例，乳腺癌2例，胃癌1例，結腸癌1例，鼻咽癌1例），30例SD，5例PD（肝癌3例，小細胞肺癌1例，胰腺癌1例），ORR為16.7%。

2.2 治療前后外周血T淋巴細胞亞群變化

患者治療前外周血CD3+、CD4+、CD8+等免疫指標均明顯降低，顯示晚期惡性腫瘤患者存在著嚴重細胞免疫功能缺陷。經CIK治療后上述指標數值顯著提高（P＜0.05）。結果見表1。

2.3 生活質量對比

CIK治療后，25例（60%）患者精神狀態好轉，27例（64%）患者睡眠質量改善，20例（48%）患者食欲增加，26例（62%）患者體力狀況提高。

表1 患者治療前后外周血免疫指標變化

2.4 遠期療效

所有患者均以電話形式進行隨訪，隨訪時間從2009年3月1日至2011年10月31日，隨訪率100%，隨訪資料完整。本組患者中位PFS為8.1個月，中位OS12.8個月。見圖1。

2.5 不良反應觀察

絕大部分患者輸注CIK過程中無明顯不良反應，僅5例出現一過性發熱，體溫最高為38.8℃，經處理后很快緩解，未影響治療。

3 討論

圖1 Kaplan-Meier患者總生存期生存曲線（隨訪時間單位：月）

晚期惡性腫瘤患者由于機體一般狀態差，KPS評分低，無法耐受手術、放療、化療等治療手段，而單純的姑息治療效果又不理想，因此尋找更有效、安全的治療手段成為目前研究關注的焦點。在眾多的治療手段中，生物治療憑借其獨特的作用逐漸發展成為腫瘤綜合治療的第四大模式，作為手術、放療、化療的有益補充。在這其中以CIK細胞治療最具代表性，臨床應用也最廣泛。

CIK全稱為細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokine-induced killer cell），其本質是人外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子共同培養一段時間后獲得的一群異質細胞[1]，具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和非主要組織相容性復合體（MHC）限制性殺瘤的優點。

鑒于上述特點，也為了尋求新的抗腫瘤治療手段，近年來國內外的許多研究機構開展了CIK細胞基礎與臨床應用的探索、研究。比如基礎研究方面，Hongeng等[2]用CIK細胞對多種腫瘤細胞株進行體外殺傷實驗，結果表明CIK細胞對這些腫瘤細胞株的溶瘤活性顯著高于外周血淋巴細胞。另外其他的實驗也提示CIK細胞本身能活化腫瘤細胞凋亡基因，使得FLIP、DAD1和survivin基因表達上調，從而誘導腫瘤細胞凋亡[3]。受到基礎研究結果的鼓舞，臨床上對CIK細胞的使用也逐漸進入實質性階段，從血液系統腫瘤到實體瘤，從輔助治療到姑息性治療，應用范圍越來越廣，其增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣等優點也得到較充分的體現。例如Chen等[4]學者用CIK細胞治療63例晚期惡性腫瘤患者，結果總體疾病控制率（disease control rate，DCR）為44.46%，與化療療效相近，且患者生活質量得到明顯改善，療效顯著。其他的一些機構同樣也有類似的報道[5-6]。在本研究中，42例患者ORR為16.7%，接近于化療療效，與國內外文獻報道水平相似，體現了CIK細胞具有一定的臨床應用價值。

我們的實驗結果還表明，通過CIK回輸治療晚期惡性腫瘤患者，與單純、常規姑息性治療相比，在遠期療效的觀察指標比較中也表現出一定的優勢，其原因可能與患者機體免疫功能提高有密切關系。Hernberg等[7]發現惡性腫瘤患者外周血CD4+/CD8+比值升高是一項獨立的預后因素，CD4+絕對數目增加，比值升幅越大，誘導患者產生特異性抗腫瘤免疫反應越強烈，預后也越好。我們這一臨床研究恰恰與此吻合，經CIK治療后患者外周血CD3+、CD4+、CD56+等數量以及CD4+/CD8+比值均明顯升高，提示機體免疫功能顯著增強。同時生存分析數據也顯示患者的PFS和OS分別為8.1個月與12.8個月，與國內外文獻報道的水平相當。

在本研究中，60%以上的患者經CIK細胞治療1個療程后出現食欲增強、睡眠質量改善、體力增加、精神狀態好轉的征象。值得一提的是我們納入的研究對象多為中、老年患者，體質普遍較虛弱，通過CIK治療不僅延長了生存期，改善了生活質量，還避免了因放、化療的嚴重不良反應所導致的痛苦，Liu等[8]專家的臨床研究結果也證實相同的觀點。CIK治療的主要反應是發熱，多數出現在治療后4～6 h，但人數較少，僅5例，體溫最高為38.8℃，經消炎痛栓處理后退熱，不影響治療。

綜上所述，CIK細胞是一種安全可靠、無明顯不良反應的腫瘤治療方法，具有一定的應用前景和推廣價值。但怎樣與其他治療手段結合以提高療效，如何更深入挖掘CIK細胞的抗腫瘤作用機制，提高殺瘤活性等，仍需作進一步深入的研究。

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[2]Hongeng S,Petvises S,Worapongpaiboon S,et al.Generation of CD3+CD56+cytokine-induced killer cells and their in vitro cytotoxicity against pediatric cancer cells[J].Int J Hematol,2003,77(2):175-179.

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[8]Liu Y, Bao EN, Yang B,et al. Clinical study of autologous cytokine induced killer cell infusion treating for elderly patients with myelodysplastic syndrome[J].Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi,2011,19(3):787-792.