益氣活血解毒湯對心肌缺血大鼠TNF-α、IL-6及心肌組織的影響*

陳 浩胡業彬

（1.江蘇省無錫市中醫醫院，江蘇 無錫 214001，2.安徽中醫學院第一附屬醫院，安徽 合肥230031）

急性心肌缺血是由于心肌供血不足和 （或）心肌耗氧量增加，引起一系列心肌血氧供需平衡障礙，可導致心肌壞死。心肌缺血最常見的原因是由于冠狀動脈粥樣硬化導致冠狀動脈管腔狹窄或閉塞，以及在狹窄的基礎上發生冠狀動脈痙攣而出現急性或慢性心肌供血不足［1］。本課題組認為，本病乃本虛標實之證，氣虛為發病的始動因素，氣虛無力行血而致瘀血內阻，血瘀日久釀生毒邪，瘀毒阻絡為急性心肌缺血的基本病機。因此，本研究擬觀察中藥益氣活血解毒湯對實驗性心肌缺血大鼠心電圖、腫瘤壞死因子－α（TNF-α）、白細胞介素（IL-6）及心肌組織的影響，探討其抗心肌缺血的機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選用健康成年Wistar大鼠70只，雌雄各半，體質量200～220 g，由安徽省醫學科學研究所提供。合格證號：皖醫動準字081646號。顆粒飼料，購于安徽省醫學科學研究所。

1.2 儀器 80-2離心機：上海手術器械廠；511大鼠心電圖儀：上海光電醫學儀器公司；Olympusbx顯微鏡：日本Olympus公司生產；石蠟切片機：德國徠卡公司；GC-910放射免疫計數器：中國科技大學創新股份有限公司；KDC-2046低速冷凍離心機：中國科技大學創新股份有限公司；興建干燥儀：青島化工制造廠；SH-801放免計數儀：國營二六二廠。

1.3 試藥 TNF-α試劑盒：解放軍總醫院科技中心放免所，批號：20080611；IL-6試劑盒：解放軍總醫院科技中心放免所，批號：20080611；復方丹參滴丸：天津天士力制藥股份有限公司生產。硝酸異山梨酯片：5 mg/粒，由天津太平洋制藥有限公司生產；異丙腎上腺素注射液：1 mg/支，由上海禾豐制藥有限公司生產；水合氯醛：北京化學試劑公司生產。益氣活血解毒湯：由紅參5 g，丹參 10 g，水蛭 3 g，丹皮 10 g，連翹 10 g，黃芩 10 g等組成，為成人每日劑量，原生藥共計48 g。生藥飲片一次性購于安徽中醫學院第一附屬醫院。除水蛭、紅參外的藥物先浸泡30 min；水蛭研粉，打末后混于藥液中；紅參另煎成汁液后兌入。

1.4 分組與給藥 大鼠適應性喂養1周后，隨機分為7組，分別為益氣活血解毒湯高、中、低劑量組，空白對照組，模型組，復方丹參滴丸組，硝酸異山梨酯組，每組10只。益氣活血解毒湯高、中、低劑量組分別按成人等效劑量的14倍、7倍、3.5倍灌胃給藥（1 mL/100 g 體質量），生藥劑量分別為 11.2、5.6、2.8 g/kg。復方丹參滴丸組：復方丹參滴丸用蒸餾水溶解為0.35粒/100 mL，按1 mL/100 g體質量灌胃。硝酸異山梨酯組：硝酸異山梨酯片用蒸餾水溶解為0.35 mg/100 mL，按1 mL/100 g體質量灌胃。空白對照組和模型組予蒸餾水按1 mL/100 g體質量灌胃。每日1次，連續7 d。

1.5 模型制備 于給藥第6、7日，大鼠腹腔注射異丙腎上腺素（ISO）10 mg/kg，空白對照組腹腔注射0.9%氯化鈉注射液2 mL。

1.6 標本采集與檢測

1.6.1 心電圖 給藥第6日灌胃30 min后給予大鼠水合氯醛麻醉，四肢、胸前放置電極，記錄動物正常標準Ⅱ、V1導聯心電圖。 造模后即于 30 s、1 min、2 min、3 min、5 min、10 min、30 min記錄Ⅱ導聯、V1導聯心電圖。按文獻報道的方法［2］觀察各組上述時間點J點（QRS波群與T波交點）的下降和上升的絕對值（記為△J值=注射ISO后各時間點J點值-注射前J點值），以ΣΔJ總偏移值的平均值作為衡量心肌損傷程度的觀察指標。ECG紙速調整為50 mm/s。

1.6.2 血液指標 給藥第7日灌胃30 min后給予大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉，腹主動脈取血約5～6 mL，離心取血清按試劑盒規定檢測 TNF-α、IL-6。

1.6.3 心肌組織形態學 取血處死大鼠后，取出心臟，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分，取左室游離壁橫斷面心肌組織。按以下步驟操作：將左心室組織浸泡4%多聚甲醛充分固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，常規石蠟包埋，蠟塊從左心室心尖部作連續切片，厚度為5 μm；HE染色，光鏡下觀察細胞形態。

1.7 統計學處理 應用SPSS13.0軟件分析。計量資料以（±s）表示，采用單因素方差分析及LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠TNF-α、IL-6水平比較 見表1。模型組大鼠血清TNF-α、IL-6含量最高，與其余各組比較均有顯著差異（P＜0.05或0.01）。各用藥組比較雖然有輕微差異，但并無統計學意義（P＞0.05）。結果表明益氣活血解毒湯能降低急性心肌缺血大鼠的TNF-α、IL-6含量，改善急性心肌缺血大鼠的內環境紊亂。

表1 各組大鼠 TNF-α、IL-6 水平比較（ng/mL，±s）

表1 各組大鼠 TNF-α、IL-6 水平比較（ng/mL，±s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組 別 n TNF-α IL-6空白對照組 7 1.24±0.17** 143.18±24.36**模型組 8 2.08±0.42 215.06±40.69復方丹參滴丸組 8 1.52±0.23* 191.27±34.29*硝酸異山梨酯組 8 1.54±0.41* 193.46±27.7*益氣活血解毒湯低劑量組 8 1.49±0.28* 202.25±18.9*益氣活血解毒湯中劑量組 8 1.34±0.15** 169.27±42.2**益氣活血解毒湯高劑量組 8 1.29±0.11** 157.31±15.5**

2.2 各組大鼠造模前后ΣΔJ總偏移值的平均值變化 見表2。模型組J點總偏移值的平均值最大，提示心肌損傷最為嚴重。模型組與益氣活血解毒湯高劑量組、硝酸異山梨酯組比較有顯著性差異（P＜0.01）。與益氣活血解毒湯中劑量組、低劑量組、復方丹參滴丸組比較有差異（P＜0.05）。表明益氣活血解毒湯對ISO導致的心肌損傷具有一定的保護作用，以高劑量組效果最為顯著。

表2 各組大鼠造模前后ΣΔJ總偏移值的平均值比較（±s）

表2 各組大鼠造模前后ΣΔJ總偏移值的平均值比較（±s）

組 別 n ΣΔJ（mV）空白對照組 7 0.57±0.21模型組 8 1.56±0.59復方丹參滴丸組 8 0.76±0.41硝酸異山梨酯組 8 0.61±0.33**益氣活血解毒湯低劑量組 8 0.73±0.36*益氣活血解毒湯中劑量組 8 0.83±0.58*益氣活血解毒湯高劑量組 8 0.65±0.32**

2.3 對心肌缺血大鼠心肌病理損傷程度的影響 見圖1。空白對照組心肌細胞排列整齊，無明顯變性壞死，間質無炎細胞浸潤，無水腫；模型組主要表現為心肌廣泛水腫，間質增寬，小灶性心肌細胞變性壞死，壞死處心肌細胞肌漿溶解或空泡變，局部有炎細胞浸潤，部分區域心肌橫紋消失、扭曲、紊亂，心肌間質血管擴張充血，心肌細胞胞漿淡染；益氣活血解毒各給藥組均能減輕心肌病理損傷的作用，尤以高劑量組最佳。

圖1 各組心肌組織形態學（HE，×200）

3 討 論

急性心肌缺血及冠狀內皮損傷后，可引起局部的炎癥反應，使冠脈收縮和痙攣，進一步損傷血管和心肌。研究表明［3-5］，TNF-α、IL-6與急性心肌缺血關系密切，本研究表明益氣活血解毒湯可降低TNF-α、IL-6的水平，與模型組比較差異有統計學意義，證實益氣活血解毒湯可抑制炎癥反應對缺血心肌起保護作用。

ISO是β受體激動劑，ISO與β受體結合后，促進Gs蛋白釋放β亞單位激活乙酰膽堿誘導的離子通道，減少細胞質Ca2+濃度和Na+內流，并成線粒體鈣超載，從而引起心肌電生理變化，表現心電圖曲線中J點下移，T波下降［6］。已有研究表明注射ISO前后比較T波下降并無顯著差異。本實驗選用J點下移值作為陽性指標本試驗型組大鼠J點下移值，生化指標與正常組比較有著差異，反映了心肌缺血時主要指標的改變，說明用ISO注射法復制模型成功［7］。益氣活血解毒湯各劑量組均可抑制注射ISO后引起的J點下降或抬高，能減輕心肌病理損傷的作用，尤以高劑量組最佳；說明益氣活血解毒湯可顯著改善ISO引起的大鼠急性心肌缺血；其作用機制可能在于減輕細胞膜損傷程度，穩定細胞膜，使缺血損傷后心臟水腫降低有關。

急性心肌缺血歸屬于中醫學“胸痹”、“胸痹心痛”等范疇。本研究益氣、活血、解毒治法相結合，以紅參大補元氣，補益肺脾腎，益氣生血，氣血同調為君藥。丹參，活血化瘀，以通為補，通行血脈；紅參配丹參，補而不滯，氣行則血行，活血而不傷正，祛瘀而不留邪。水蛭為蟲藥，破血逐瘀通絡，入絡搜邪，解毒通痹，與丹參合而為臣。丹皮活血散瘀，涼血解毒，清血中之伏毒，除脈中之瘀滯；佐以連翹清熱解毒，黃芩清熱燥濕，瀉火解毒，諸藥配伍，補而不滯，通而不破，諸藥合用，共奏益氣活血、解毒通絡之功。本研究表明，益氣活血解毒湯能顯著對抗ISO所致大鼠急性心肌缺血、損傷作用，尤以高劑量組為佳，其作用機制可能與其抑制炎癥反應，降低TNF-α、IL-6的水平有關。

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［6］賈廣樂，董培智.對腎上腺素性心肌缺血模型大鼠相關指標的探討［J］.中國實驗動物學報，2005，13（2）：107.

［7］高鍵，王秋娟，唐玉.銀杏內酯對ISO致心肌損傷的影響［J］.中國新藥與臨床藥理，2004，15（3）：151.