谷氨酰胺對大鼠急性全腦缺血再灌注損傷后小腸黏膜sIgA表達的影響

王慶治 張幫杰 王素娟 張麗萍 譚 軍（通訊作者）

新鄉醫學院第三附屬醫院 1）消化科 2）神經內科 新鄉 453000

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級SD大鼠，雄性，鼠齡3～4個月，體質量250～280g。

1.2 主要試劑 注射用 N（2）－L－丙氨酸－L－谷氨酰胺、奧扎格雷鈉、一抗、兔抗大鼠IgA。

1.3 分組 按隨機化原則將大鼠分為4組：假手術組24只，分為6h、12h和24h3個亞組，每亞組8只；鹽水對照組24只，分為缺血再灌注6h、12h和24h3個亞組，每亞組8只；奧扎格雷鈉組24只，分為缺血再灌注6h、12h和24h3個亞組，每亞組8只；谷氨酰胺組24只，分為缺血再灌注6 h、12h和24h3個亞組，每亞組8只。

假手術組：同樣麻醉，暴露兩側椎動脈翼小孔和頸總動脈，手術步驟同全腦缺血再灌注模型，只是不電凝椎動脈和夾閉雙側頸總動脈，腹腔注射2mL生理鹽水。鹽水對照組：全腦缺血再灌注模型成功后，立即腹腔注射2mL生理鹽水。奧扎格雷鈉組：全腦缺血再灌注模型成功后，奧扎格雷鈉按33.67mg／kg溶于2mL生理鹽水中腹腔注射。谷氨酰胺組：全腦缺血再灌注模型成功后，立即按33.67mg／kg腹腔注射奧扎格雷鈉和0.4g／kg腹腔注射20%L－丙氨酸－L－谷氨酰胺雙肽注射液（相當于谷氨酰胺0.27g／kg），分別溶于生理鹽水，共2mL。

各組觀察時間為再灌注后6h、12h、24h，然后處死大鼠，取腦和小腸，共96只。實驗過程中，死亡的大鼠和不符合實驗要求的大鼠棄用，不計入數據，隨時給予補充。

1.4 統計學分析 應用統計軟件SPSS 10.0對計量資料進行方差分析，等級資料采用秩和檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

出現靜息腦電波為判定大鼠全腦缺血的標準［1］（圖1、圖2），再灌注6h海馬區HE染色可見錐體細胞層數變少，部分錐體細胞水腫，細胞膜邊界模糊。再灌注12h，可見錐體細胞胞膜邊界更模糊，細胞核著色變淺。24h可見錐體細胞數更少，結構紊亂，胞核固縮為三角形，結構及核仁消失，錐體細胞壞死。以上入選各組，其他棄用。假手術組中，腦電圖正常（見圖1），腦 HE切片未見明顯神經元壞死（見圖3）。而鹽水對照組、奧扎格雷鈉組和谷氨酰胺組在夾閉雙側頸總動脈后均出現靜息腦電波（見圖2）。再灌注6h、12h和24h均出現程度不同的病理學改變（見圖4、5、6）。

圖1 夾閉前EEG

圖2 夾閉后EEG

sIgA表達水平見表1。在6h、12h和24h，與假手術組相比，鹽水對照組、奧扎格雷鈉組和谷氨酰胺組均有不同程度下降，差異有統計學意義（P＜0.05），以24h表達下降最嚴重，6h下降最少。與谷氨酰胺組相比，鹽水對照組和奧扎格雷鈉組表達下降明顯，差異有統計學意義（P＜0.05），而鹽水對照組和奧扎格雷鈉組相比差異無統計學意義（P＞0.05）。見圖7～10。

表1 各組sIgA表達情況

3 討論

急性腦血管?。ˋCVD）致多器官功能障礙綜合征（MODS）是腦源性多器官功能障礙綜合征中最常見的一類，發生率11%～21%，并發MODS的ACVD病死率高達41%～87.1%，而無MODS的 ACVD 病死率僅為8.7%～14.8%［2］，并發MODS是ACVD致死的主要原因之一。

關于腸黏膜屏障改變的機制，目前大多是關注腸道本身的缺血再灌注以及營養不良，實驗主要集中于胰腺炎、休克、燒傷、嚴重感染、MODS等方面。缺血性腦卒中引起腸道黏膜屏障改變的研究較少，至于缺血性腦卒中治療中應用腸道黏膜保護劑則更是鮮有報道。本研究是在急性缺血性腦卒中治療中應用腸道黏膜保護劑（谷氨酰胺），觀察腸道黏膜屏障的變化，為預防和治療急性缺血性腦卒中導致MODS提供客觀依據。

現代研究表明胃腸是機體最大的免疫器官，腸壁內存在著大量淋巴組織，構成腸道免疫的第一道防線。隨著細菌的入侵，固有層淋巴細胞中的IgA漿細胞產生大量的sIgA，阻止腸道微生物及其毒素分子對胃腸黏膜攻擊。本研究顯示，與假手術組相比，鹽水對照組、奧扎格雷鈉組和谷氨酰胺組均有不同程度表達下降，差異明顯（P＜0.05），6h已經開始下降（P＜0.05），隨著時間的延長，持續下降，到24h仍在下降。說明急性全腦缺血再灌注損傷能下調大鼠小腸黏膜sI－gA表達，破壞腸免疫屏障。

奧扎格雷鈉作為特異性血栓素A2（TXA2）合成酶抑制劑，具有抑制血小板聚集，阻止血栓形成并可使已聚集的血小板解聚，減少半暗帶，還具有擴張血管、增加血流量、改善組織微循環和能量代謝的作用［3］，在一定程度上改善腦功能，防止腦梗死復發。國內外廣泛應用于急性缺血性腦血管病的治療［4－5］。本研究顯示，在小腸黏膜sIgA表達中，鹽水對照組和奧扎格雷鈉組之間差異無統計學意義（P＞0.05），說明奧扎格雷鈉不能減輕急性全腦缺血再灌注對小腸黏膜的損傷。

正常進食時，谷氨酰胺為腸道供能占總量的70%以上，而葡萄糖則不足20%。由此可見，谷氨酰胺是腸黏膜上皮細胞的主要能量來源，而非葡萄糖。但腸黏膜本身既不能產生亦無法儲存谷氨酰胺，但在嚴重的應激狀態下，機體組織細胞對其利用量增加，并超過生成量。因此，若不能經飲食補充足夠的谷氨酰胺，將產生谷氨酰胺的相對缺乏，從而影響腸黏膜屏障及機體的免疫功能等，對機體造成嚴重的損害［6］。本研究顯示，谷氨酰胺組在急性全腦缺血再灌注損傷后，在小腸黏膜sIgA表達從6h開始就與鹽水對照組和奧扎格雷鈉組有顯著差異（P＜0.05），隨著時間的延長，差異更加明顯。

本研究中，急性全腦缺血再灌注損傷造成小腸黏膜的損傷，尤其在腸免疫屏障，而常規應用治療腦梗死的奧扎格雷鈉后也無顯著改善。谷氨酰胺可在sIgA表達水平方面減輕大鼠全腦缺血再灌注對小腸黏膜的損傷。

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［2］王擁軍，盧德宏，崔麗英，等 .現代神經病學進展［M］.北京：科學技術文獻出版社，2001：182－198.

［3］張風芝，劉吉良 .奧扎格雷鈉防治進展性腦梗死的臨床研究［J］.中風與神經疾病雜志，2007，24（1）：97.

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［5］傅東明 .奧扎格雷鈉治療急性腦梗死的療效［J］.中國臨床藥學雜志，2000，9（5）：275－276.

［6］馬曉菁，馬兵，謝東珊，等 .谷氨酰胺對嚴重燒傷后腸黏膜和機體免疫功能保護作用的臨床觀察［J］.西安交通大學學報（醫學版），2009，30（3）：359－386.