RP-HPLC測定感冒消炎片中咖啡酸的含量

邢學鋒 許文學,2*

（1南方醫科大學中醫藥學院；廣州510515；2南方醫科大學附屬中西醫結合醫院，廣州510515）

RP-HPLC測定感冒消炎片中咖啡酸的含量

邢學鋒1許文學1,2*

（1南方醫科大學中醫藥學院；廣州510515；2南方醫科大學附屬中西醫結合醫院，廣州510515）

目的建立感冒消炎片的含量測定方法。方法色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動相為甲醇-磷酸0.1%（25∶75），檢測波長323nm，流速1ml?min-1。結果在此色譜條件下，咖啡酸在0.072～1.44μg范圍內呈良好的線性關系，標準曲線為Y=1287.436X-23.697，R2=0.9997。結論本方法可有效控制感冒消炎片的質量。

感冒消炎片；咖啡酸；高效液相色譜法

感冒消炎片由中藥蒲公英、臭靈丹、千里光三味組成，為臨床上較為常用的中藥[1]。國家衛生部藥典委員會部頒中藥成方制劑第十八冊中收載的感冒消炎片質量標準（WS3-B-3510-98）未對含量進行有關規定。本研究采用高效液相法對感冒消炎片中所含的咖啡酸的含量進行測定，從而使該品種的質量控制達到一個更為完善的水平。

1 儀器與材料

1.1 儀器HP1100高效液相色譜儀（美國惠普），KQ-500D醫用數控超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司），CP324S高精度電子天平（德國Sartorious）。

1.2 材料與試劑乙腈（色譜純）；磷酸為分析純；咖啡酸對照品（供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；感冒消炎片（市售）。

2 綠原酸含量測定方法研究

2.1 對照品溶液的制備精密稱取咖啡酸對照品約8mg（用五氧化二磷真空干燥24h，經歸一法測定含量為95.81%），置25ml容量瓶中，加甲醇適量，振蕩使溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液（含咖啡酸0.288mg?ml-1）。

2.2 供試品溶液的制備取本品10粒，研成細粉，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱重后超聲處理30min，取出，放冷，再稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液10 ml，取續濾液過0.45μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件與系統適用性試驗通過最大吸收波長和流動相的選擇，最終確定采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇∶0.1%磷酸（25∶75）為流動相，流速1.0ml?min-1，檢測波長為323nm。理論板數按咖啡酸峰計算應不低于3×103。

對照品、供試品及陰性對照品圖譜見圖1。

2.4 標準曲線與線性范圍精密吸取“2.1”項下對照品溶液0.25、1、2、3、4、5ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解后，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，依次吸取10μl進樣。每一濃度進樣2次，求峰面積平均值；以咖啡酸峰面積平均值為縱坐標，咖啡酸進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，見圖2。

標準曲線回歸方程如下式：

Y=1287.436*X-23.697 R2=0.9997結果表明，咖啡酸在0.072～1.44μg范圍內的線性關系良好。

圖1 對照品、供試品、陰性對照品HPLC圖譜

圖2 咖啡酸標準曲線

2.5 精密度試驗精密吸取咖啡酸對照品溶液，重復進樣6次，每次10μl，測定峰面積值，RSD=0.33%（n=6）。表明儀器精密度良好。

2.6 重現性試驗取同一批號感冒消炎片5份，分別按“2.4”項下方法測定樣品中咖啡酸，按對照品的回歸方程計算供試品中咖啡酸的含量，平均含量為0.148mg?g-1，RSD=1.48%，方法重現性良好。

2.7 穩定性試驗精密吸取同一份供試品溶液，間隔2h進樣1次，重復進樣6次，每次10μl，測定峰面積值，RSD=0.30%（n=6）。表明供試品溶液在10h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗稱取已知含量的感冒消炎片5份，精密稱定后，精密移入“2.1”項下新鮮配制的咖啡酸對照品溶液2.0ml（含咖啡酸0.576mg），依法處理、測定按對照品的回歸方程計算供試品中咖啡酸含量，平均加樣回收率為101.15%，RSD=2.45%。

3 供試品溶液咖啡酸含量的測定

取供試品溶液，進樣10μl，進樣2次，測定樣品中咖啡酸，求峰面積平均值，按對照品的回歸方程計算供試品中咖啡酸含量，感冒消炎片中咖啡酸含量為0.148mg?g-1。

4 討論

選用DAD檢測器，對咖啡酸對照品在200～400nm波長范圍內進行掃描，對照品溶液在323nm處有最大吸收，故選擇323nm作為測定波長[2-3]。

采用甲醇∶0.1%磷酸（20∶80），出峰時間為10.549min，但供試品溶液在10.231min有干擾峰存在，兩者相連不能分離；采用甲醇∶0.1%磷酸（25∶75），出峰時間為14.994min，且可實現完全分離。故選擇甲醇∶0.1%磷酸（25∶75）為流動相。

部頒中藥成方制劑第十八冊中收載的感冒消炎片質量標準（WS3-B-3510-98）未對含量進行有關規定。蒲公英所含的咖啡酸具有廣譜抗菌和消炎利膽作用，因此，本研究將咖啡酸作為感冒消炎片質量控制的指標是可行的，這為控制藥品質量和保障人民用藥安全提供了保障，為全面控制產品質量提供了方法。

[1]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京∶中國醫藥科技出版社,201∶331.

[2]張才煜,孫權,劉敬閣.不同地區蒲公英中咖啡酸的含量測定[J].中國中藥雜志,2006,31(9)∶776-777.

[3]吳波,張巍,張應成.高效液相色譜法測定蒲公英顆粒中咖啡酸含量[J].中國藥業,2006,15(7)∶41.

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中國中醫藥現代遠程教育雜志社

2011年11月18日

Determination of caffeic acid in Ganmaoxiaoyan tablet by RP-HPLC

Xing Xuefeng1Xu Wenxue
(1 College of Traditional Chinese Medicine,Southern Medical University,Guangzhou 510515; 2 Integrative Medicine Hospital,Southern Medical University,Guangzhou 510515)

∶ObjectiveAim To establish an HPLC method for the determination of caffeic acid in Ganmaoxiaoyan tablet.Methods A ODS-3 C18 column was used.The mobile phase was methol-phosphoric acid(25∶75)with the flow rate 1.0ml?min-1.The detection wavelength was set at 323 nm.Results The linear regression equation of caffeic acid was Y=1287.436 X-23.697，R2=(0.9997)within the range of0.072～1.44μg.Conclusion This method was successfully used for quantitation of Ganmaoxiaoyan tablet.

∶Ganmaoxiaoyan tablet;Caffeic acid;RP-HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.14.111

：1672-2779（2012）-14-0160-02

：韓世輝

2012-06-29）

*通訊作者