安南草多糖含量的測定※

徐明全

（廣東省生物制品與藥物研究所，廣州510440）

安南草多糖含量的測定※

徐明全

（廣東省生物制品與藥物研究所，廣州510440）

本文對菊科植物滿天飛Gynura crepidioides Benth.中的多糖含量，進行分離提取及定量測定，為控制安南草的質(zhì)量提供定量指標(biāo)。

：安南草；多糖；含量測定

安南草為菊科植物滿天飛Gynura crepidioides Benth.的全草[-2]。其性平，味微辛、苦，能消腫行氣、健脾胃、利尿，臨床上可用于治療消化不良、營養(yǎng)不良性水腫等癥[3-4]。據(jù)文獻報道，安南草含葉綠素、β-胡蘿卜素等物質(zhì)，但其它化學(xué)成分、有效成分未明[5]。作者對安南草中的化學(xué)成分進行了初步的研究，發(fā)現(xiàn)其中含有硝酸鹽類、多糖類化學(xué)成分，并對其中的多糖含量進行了測定，為利用安南草植物資源提供一定依據(jù)。

1 儀器、試劑與樣品

島津UV-2210紫外分光光度計（島津日本），CQ-200超聲波儀（上海音波聲電科儀公司）；無水葡萄糖（廣東汕頭西隴化工廠，符合部頒標(biāo)準(zhǔn)HG3-1094-77），其余試劑均為分析純；安南草樣品由和平縣野菜供應(yīng)處黃學(xué)容等提供，部分樣品作者自己采集（野生和種植均有），經(jīng)鑒定均為菊科植物滿天飛Gynura crepidioides Benth.，又名安南草。

2 方法與結(jié)果

2.1 安南草多糖的提取與精制稱取粉碎后的安南草粗粉50g，置圓底燒瓶中，加500ml的石油醚Ⅱ浸泡2h，再回流1h，過濾。濾渣揮干溶劑后，以85%乙醇400ml回流提取2次，每次1h，過濾。濾渣用蒸餾水500ml，回流提取2h，過濾，濾液濃縮至200ml，用Sevage法除去蛋白質(zhì)后，水溶液中加95%乙醇使其濃度達80%，靜置過夜。抽濾，濾渣用無水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌多次，得多糖粗品，于60℃干燥。將DEAE介質(zhì)預(yù)處理并裝柱（3.6×80cm），用3倍體積的雙蒸水平衡，上述粗品用少量水溶解后上柱，雙蒸水洗脫至不再有糖流出（苯酚-硫酸法檢測），收集含糖部分，濃縮后，加入乙醇至含醇量達80%，靜置24h。用乙醇、丙酮分別洗滌，60℃烘干，得安南草多糖。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

2.2.1 5%苯酚溶液的配制取苯酚100g，加入0.1g鋁片和0.05g NaHCO3，在180～182℃下常壓蒸餾，得白色針狀苯酚結(jié)晶。稱取上述苯酚結(jié)晶12.5g，置250ml容量瓶中，用水稀釋定容，搖勻，避光保存。

2.2.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的無水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品36mg，置100ml容量瓶中，用水稀釋定容，搖勻，得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密吸取上述儲備液1.5，2.5，3.5，4.5，5.0，6.5ml置100ml容量瓶中，加水至刻度。分別吸取上述稀釋液各2ml，置具塞試管中，精密加入5%苯酚試液，1ml混勻，沿管壁加入濃硫酸5ml。靜置5min，振搖，置水浴中加熱15min，立即轉(zhuǎn)入冰水浴中冷卻至室溫，以蒸餾水為空白，在490nm波長處測定吸光度。根據(jù)所測得的吸光度和相應(yīng)的濃度，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：A=-2.23x10-3+0.09056C（r=0.9996，n=6）。結(jié)果表明：在濃度為5.4-23.4ug/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗取樣品溶液按“2.2.3”項下方法操作，每隔20min時間測定其吸光度，結(jié)果表明在2h內(nèi)，吸光度幾乎沒變化。

2.2.5 換算因子的測定精密稱取上述干燥品40mg，加水配成1.623mg/ml的溶液。精密吸取上述溶液2.0ml，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項下操作并測定；另精密稱取葡萄糖對照品溶液測定，同時作空白對照，得換算因子f=2.85（n=4)。

2.2.6 回收率測定用已做含量測定的五批原藥材，分別按“2.2.4”項下依法提取，置100ml容量瓶中，分別精密加入不同量的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，加水定容。按“2.2.3”項下方法操作，經(jīng)計算得回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.2.7 樣品含量的測定精密稱取粉碎后的生藥材1.0g，先加80%乙醇150ml，水浴回流1h，趁熱過濾，殘渣用乙醇洗滌三次，再加水150ml提取，過濾，殘渣及燒瓶用熱水洗滌，洗滌液合并，放冷后轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中，用蒸餾水定容，作為樣品溶液。按標(biāo)準(zhǔn)曲線下的方法操作，測定樣品中的含量，按下式計算樣品中多糖的含量：多糖含量%=（A*B*f）÷W*100。

式中A為供試液中葡萄糖濃度（mg/ml），B為供試液的稀釋因子，f為換算因子，W為供試品重量（mg）。結(jié)果見表2：

表2 安南草多糖含量的測定結(jié)果

3 討論

苯酚-硫酸分光光度法測定多糖的含量，方法簡便可行，穩(wěn)定性好。從不同產(chǎn)地樣品測定結(jié)果可以看出，不同產(chǎn)地的安南草多糖含量有一定的差異，但變化不大，可能跟不同的采集季度以及處理炮制方法有關(guān)。目前，安南草的其它化學(xué)成分并不清楚，本研究結(jié)果對安南草品質(zhì)評價和進一步開發(fā)利用提供一個參考指標(biāo)。

[1]福建省醫(yī)藥研究所.福建藥物志(第一冊)[M].福州∶福建人民出版社, 1979∶473.

[2]吳修仁.廣東藥用植物簡編[M].廣州∶廣東省高等教育出版社,1989∶495.

[3]江西藥科學(xué)校革命委員會.草藥手冊[M].南昌∶江西藥科學(xué)校,1970∶1024.

[4]廣西壯族自治區(qū)革委會衛(wèi)生局.廣西本草選編(上冊)[M].南寧∶廣西人民出版社,1974∶954.

[5]全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(下冊)[M].北京∶人民衛(wèi)生出版社,1990∶640.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.14.104

：1672-2779（2012）-14-0151-02

：蘇玲

2012-05-17）

廣東省中醫(yī)藥管理局科研基金資助課題[No：101026]；廣東省中醫(yī)藥局建設(shè)中醫(yī)藥強省科研課題[No：2009279]