益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊應激和免疫的影響

李 敏 呂 凱 侯生珍 郭遠玉 劉陽梅

（1.青海貴南縣過馬營鎮(zhèn)獸醫(yī)站，青海 貴南 813101；2.青海大學農(nóng)牧學院，青海 西寧 810016）

青海牧區(qū)地處高寒地帶，獨特的氣候條件和極其嚴酷的自然環(huán)境，致使牧草生長期短，枯草期長達8個月之久，冬春枯草季節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)的匱乏嚴重制約著該地區(qū)畜牧業(yè)的發(fā)展，特別是藏母羊產(chǎn)羔期，正處于天然草場的枯草期。由于受自然環(huán)境和飼養(yǎng)條件等因素的制約，羔羊斷奶日齡延長到5～6月齡。實施藏羔羊早期斷奶，受母子隔離、食物、哺喂方式等方面的變更，容易引起藏系羔羊較強的應激反應，主要表現(xiàn)在食欲差、采食量下降、營養(yǎng)消化吸收不良，機體免疫力和抗病力下降等，部分羔羊變成僵羊，甚至死亡[1]。因此，為了挖掘藏羔羊生長潛力，滿足其營養(yǎng)需求，設計合理藏羔羊飼料配方，促進胃腸道功能的健康發(fā)育，有效地減輕斷奶應激反應,同時，人們對無公害食品、綠色食品和有機食品呼喚中，兼顧抗生素類飼料添加劑對動物和人類健康造成的危害[2-5]，應用其替代品——益康XP。益康XP中含有酶、維生素和其它營養(yǎng)物質(zhì)及一些重要的輔助因子，可以調(diào)節(jié)和維護瘤胃內(nèi)微生物生態(tài)環(huán)境，刺激體內(nèi)免疫系統(tǒng)發(fā)育，減小應激，并對提高畜產(chǎn)品的品質(zhì)有較好的作用，能提高動物生長性能及其生長率、采食量和飼料轉(zhuǎn)化效率。

1 材料與方法

1.1 試驗藏羔羊的選擇與分組設計

試驗選擇（55±2）日齡斷奶（體重 7.91±0.83 kg）藏羔羊42只，隨機分為3組（每組14只，公母各半），飼喂基礎日糧為粗蛋白和能量水平分別為18.02%和12.95 MJ/kg開口料。試驗Ⅰ組為基礎日糧，試驗Ⅱ組為基礎日糧+1%益康XP，試驗Ⅲ組為基礎日糧+0.03%莫能菌素。試驗期21 d，試驗設計見表1。

表1 試驗設計

1.2 試驗的時間與地點

試驗時間：飼養(yǎng)試驗進行于2012年3月18日～2012年4月8日。

試驗地點:海北州剛察縣那仁牛羊?qū)I(yè)育肥合作社。

1.3 藏羔羊開口料組成及配方

試驗根據(jù)羔羊體重和營養(yǎng)需要特點，參照中國肉用山羊飼養(yǎng)標準(2004)配制藏羔羊開口料，基礎日糧配方見表2。

表2 羔羊開口料組成及營養(yǎng)水平

1.4 藏羔羊飼養(yǎng)管理

羊舍為半開放式，避風、向陽、干燥、通風良好。試驗羔羊進圈舍前對圈舍進行消毒處理，以后每天進行清掃，隔天進行消毒；所有試驗羔羊按常規(guī)的免疫程序進行免疫注射，并使用伊維菌素進行內(nèi)寄生蟲防治，使用溴氰菊酯淋浴進行外寄生蟲防治。各組飼喂制度（每天飼喂羔羊 3 次 8：30、13：00 和 17：00）和方式相同，自由采食、飲水自由。

1.5 測定項目與分析方法

1.5.1 藏羔羊血樣的采集

血液采集當天(55、65、75 d)，早上飼喂前，由頸靜脈采血，將羔羊側(cè)臥保定，采血部位剪毛，用75%酒精消毒，用手指壓迫頸靜脈，待血管怒張后刺入一次性采血器采血約5 ml。血液采集后，管口向上，垂直放置,避免振蕩而造成的溶血。在室溫條件下放置30～60 min，待析出血清，3500 r/min離心 15 min，收集血清，于低溫-20℃冷凍，待測。

1.5.2 藏羔羊應激酶類活性的測定

血清皮質(zhì)醇（Cor）：生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA酶聯(lián)試劑盒)；

肌酸激酶（CK）：酶標儀法[肌酸激酶（CK）測試盒，批號 20120305]；

乳酸脫氫酶（LDH）：酶標儀法[乳酸脫氫酶（LDH）測試盒，批號20120305]；

天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）：賴氏法[天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）測試盒，批號 20120305]；

堿性磷酸酶(ALP)：酶標儀法[堿性磷酸酶（ALP）測試盒，批號20120305]。

指標按照試劑盒操作說明進行測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5.3 藏羔羊免疫指標的測定

IgA、IgM、IgG：生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA酶聯(lián)試劑盒)。

指標按照試劑盒操作說明進行測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5.4 藏羔羊生長發(fā)育測定

早期斷奶藏羔羊55、65、75 d日采食量；

早期斷奶藏羔羊55、65、75 d體重,并計算日增重；

記錄腹瀉藏羔羊的只數(shù),記錄治療持續(xù)時間及恢復情況。

1.6 數(shù)據(jù)處理

對試驗數(shù)據(jù)采用Excel2003進行初步處理，然后用SAS 9.1軟件進行統(tǒng)計分析，并對試驗數(shù)據(jù)進行方差分析和DUNCAN法多重比較，結(jié)果均以平均數(shù)±標準差（）表示。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊應激的影響（見表 3）

表3 各組藏羔羊血清中應激酶類活性

由表3可見，在55、65、75 d時試驗Ⅲ組Cor與試驗Ⅰ組相比有所上升，試驗Ⅱ組與試驗Ⅰ組相比有所下降，各組差異不顯著（P>0.05）；從 55、65、75 d，試驗Ⅱ、Ⅲ組的CK、AST、LDH都有先上升后下降的趨勢，CK、AST、LDH 各試驗組沒有顯著性差異（P>0.05），但試驗Ⅱ組和Ⅲ組CK在75 d時小于試驗Ⅰ組，AST在

65 d時試驗Ⅱ組顯著低于試驗Ⅲ組、LDH在75 d時試驗Ⅲ組小于其它兩組，ALP各試驗組有先下降后上升的趨勢，75 d時試驗Ⅰ組和Ⅱ組大于試驗Ⅲ組（P>0.05）。

2.2 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊免疫的影響（見表 4）

表4 各組藏羔羊血清中免疫球蛋白含量

由表 4 可見,從 55、65、75 d 看各試驗組 IgG、IgA、IgM 差異不顯著（P>0.05），但試驗Ⅱ組 IgG、IgA、IgM高于試驗Ⅰ組和試驗Ⅲ組。

2.3 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊采食量的影響(見表5)

由表5可見，55～65日齡，試驗Ⅰ組藏羔羊采食量最高，高于試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組；65～75日齡，試驗Ⅱ組藏羔羊采食量最高，高于試驗Ⅰ組和試驗Ⅲ組。

2.4 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊體重及日增重的影響（見表6）

由表6可見，各試驗組在55日齡、65日齡和75日齡時體重沒有顯著性差異（P>0.05）。55～65日齡，試驗Ⅰ組藏羔羊日增重顯著高于試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組（P＜0.01）；而 65～75日齡，試驗Ⅱ組藏羔羊日增重顯著高于試驗Ⅰ組和試驗Ⅲ組（P＜0.01）。

表5 藏羔羊各階段的日采食量

2.5 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊腹瀉率的影響（見表7）

由表7可見，試驗Ⅱ組藏羔羊全程腹瀉率最低（14.29%），低于試驗Ⅰ組（28.57%）和試驗Ⅲ組，試驗Ⅲ組最高(38.64%)；各試驗組藏羔羊腹瀉發(fā)病率最高均出現(xiàn)在55～65日齡,各組腹瀉數(shù)（率）分別為2(14.29%)、2(14.29%)和 3（21.43%）；65～75 日齡，試驗Ⅱ組藏羔羊已沒有羔羊腹瀉，試驗Ⅰ組和試驗Ⅲ組藏羔羊仍然有腹瀉，腹瀉數(shù)（率）分別為 2（14.29%）和 2（14.29%）。但全程各試驗組均沒有藏羔羊的死亡。

表6 藏羔羊各階段的體重及日增重

表7 藏羔羊腹瀉情況

3 討論

3.1 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊應激的影響

酶類研究應用于獸醫(yī)臨床,對動物疫病的診斷和愈后判斷起了重要作用。研究表明血清中相關酶類測定也可作為判定應激狀態(tài)的指標[1]。Moss[6]認為檢驗血清中一些酶活性可作為應激指標。Becker[7]等指出皮質(zhì)醇在應激反應、物質(zhì)代謝及維護機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面起重要作用,各種應激源均可提高血清皮質(zhì)醇水平,通常把它作為應激反應判定的敏感指標之一。堿性磷酸酶(ALP)是廣泛分布于肝臟、骨骼、腸和腎等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶，與肝臟和骨骼的代謝密切相關。血清ALP活性的高低反映了動物的生長狀況，因其是具有遺傳標記的同工酶，其活性的高低可以反映生長速度和生長性能[8]。朱年華[9]、唐曉玲[10]研究表明堿性磷酸酶活性與豬的日增重呈顯著正相關，AST幾乎存在于所有組織中,但肝和肌肉中含量最高，肌肉、心肌和肝臟損傷，AST會升高[8]，當早期斷奶幼畜應激時,會造成ALP、AST在血清中的含量和活性升高；CK是一種器官特異性酶,以骨骼肌含量最多，LDH是糖酵解途行中的重要酶,早期斷奶幼畜應激腹瀉時,采食量降低,肌肉能量供應不足,易造成CK與LDH從肌細胞逸出,致使CK和LDH含量升高[9-10]；周向梅等[11]研究認為血清中AST、CK、LDH酶活性,可作為判斷應激狀態(tài)的指標,當畜禽受到應激時，血清中這三種酶的含量和活力會升高；Janezic和Presahn等[12-13]研究發(fā)現(xiàn)豬應激前后CK可上升1.5～13.0倍。試驗中，各試驗組早期斷奶藏羔羊Cor、CK、LDH、AST都有升高，說明早期斷奶的藏羔羊受到一定斷奶應激，但試驗Ⅱ組 Cor、CK、LDH 小于試驗Ⅰ組(P>0.05)，Cor、AST小于試驗Ⅲ組（P>0.05），說明早期斷奶藏羔羊日糧中加入益康XP可以減小應激。

3.2 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊免疫的影響

IgG是血清中一種主要的免疫球蛋白，其含量反映機體的免疫狀況，起著抗體的作用，主要在畜禽腸道中發(fā)揮功效。早期斷奶的畜禽消化與免疫功能尚未發(fā)育成熟，最易受日糧中抗原與微生物抗原的刺激產(chǎn)生應激。免疫球蛋白在畜禽腸道中可特異性地結(jié)合細菌抗原，弱化或破壞其毒性和刺激作用，從而防止畜禽腹瀉，改善生長狀況[14]；IgM在大多數(shù)家畜的血清中的含量僅次于IgG,也是固定補體和增強吞噬細胞吞噬作用最有效的Ig分子，也具有腸黏膜保護作用；IgA腸道免疫系統(tǒng)中起核心作用，腸道分泌物中含量最豐富的免疫球蛋白。IgA與細菌結(jié)合形成抗原抗體復合物，并刺激腸道黏液的分泌，加速黏液在黏膜表面的移動，從而有助于細菌和內(nèi)毒素隨糞便排出。防止病原微生物等的入侵，是構(gòu)成腸道黏膜免疫的重要物質(zhì)基礎[1，14]。試驗中，各試驗組 IgG、IgA、IgM 有所上升，各試驗組 IgG、IgA、IgM 差異不顯著（P＞0.05），但試驗Ⅱ組IgG、IgA、IgM高于試驗Ⅰ組和試驗Ⅲ組，說明早期斷奶藏羔羊日糧中加入益康XP可以提高免疫。

3.3 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊生長發(fā)育的影響

早期斷奶藏羔羊與藏母羊隔離、由母乳到固體飼料的改變，羔羊易表現(xiàn)食欲差采食量下降，營養(yǎng)消化吸收不良、生長緩慢受阻，加之胃腸道尚未發(fā)育完善，容易造成腹瀉[1]。陳國勝等[15]、張麗萍等[16]研究益康XP（酵母培養(yǎng)物）對早期斷奶仔豬生長性能的影響，研究表明益康XP，能顯著提高早期斷奶仔豬采食量，促進動物胃腸道有益微生物生長繁殖,提高動物對飼料的消化能力,增強動物的抗病力,提高生長速度和飼料轉(zhuǎn)化效率；Hughes等[17]在16頭早期斷奶犢牛的日糧中添加酵母培養(yǎng)物（2 g/kg日糧），試驗84 d，試驗組犢牛采食量和增重顯著高于對照組（P＜0.05）；Titi等[18]、寇慧娟等[19]研究酵母培養(yǎng)物對羔羊生產(chǎn)性能的影響，酵母培養(yǎng)物能顯著（P＜0.05）提高羔羊平均增加體質(zhì)量、平均日增重，極顯著(P＜0.01)提高干物質(zhì)采食量。益康XP(一種酵母培養(yǎng)物)中含有酶、維生素和其它營養(yǎng)物質(zhì)及一些重要的輔助因子，可以改善胃腸環(huán)境和菌種結(jié)構(gòu)，促進動物胃腸道有益微生物的生長繁殖,提高飼料的利用率。本試驗添加益康XP的試驗組，藏羔羊采食量有所提高，日增重高于其它試驗組，腹瀉率明顯小于其它試驗組，說明益康XP能提高家畜采食量和飼料轉(zhuǎn)化效率，提高其生產(chǎn)性能。

4 結(jié)論

通過對早期斷奶藏羔羊血清中酶類活性變化分析和免疫球蛋白含量分析表明,早期斷奶藏羔羊日糧中加入益康XP可以減小藏羔羊早期斷奶應激，提高其免疫力；羔羊的健康與體重、日增重密切相關，尤其是羔羊腹瀉，嚴重阻礙羔羊的生長，試驗添加益康XP減小了早期斷奶藏羔羊的腹瀉率，提高了藏羔羊的采食能力，提高藏羔羊的日增重，因此益康XP是抗生素的一種優(yōu)良的替代品。

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