大葉鉤藤有效成分的分離

張秋翠 郭勁松

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大葉鉤藤有效成分的分離

張秋翠 郭勁松

（中國中醫科學院廣安門醫院南區，北京 102618）

大葉鉤藤（ncaria macrophylla Wall）為茜草科（Rubiaceae）鉤藤屬植物，本課題目的在于對大葉鉤藤的70%乙醇提取物，依次分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取。氯仿部位分離得到了2個三萜類化合物，對它們的結構通過核磁共振和質譜等進行了鑒定。本課題對鉤藤屬大葉鉤藤的提取液，減壓濃縮至無醇味，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，取氯仿提取物進行化學成分的系統分離，從中得到化合物1和2，經NMR和MS等數據鑒定他們的結構。兩個單體化合物的化學結構被分別鑒定為熊果酸和齊墩果酸。為進一步研究大葉鉤藤的藥理活性和藥材質量提供了物質基礎。

大葉鉤藤；氯仿；提取；化學結構

大葉鉤藤（Uncaria macrophylla Wall）為茜草科鉤藤屬植物，帶鉤的莖枝入藥。大葉鉤藤中含有生物堿、三萜類、黃酮類等化合物，具有諸多的藥理活性。現臨床多用于治療頭暈目眩、驚癇抽搐、全身麻木等心血管和神經系統疾病，且已成為治療高血壓常用藥物。

筆者查閱文獻后發現，大多文獻對鉤藤的鑒別方法僅有性狀鑒別和一般鑒別，沒有含量測定和薄層鑒定，而2010版《中國藥典》也僅有鉤藤藥材的性狀鑒別和生物堿的沉淀反應鑒定。對于不同種鉤藤藥材，也主要是基于藥材的性狀、顯微特征以及薄層色譜鑒別，但性狀和顯微特征鑒別困難，而且主觀性較強，需要具有長期實踐經驗的專業人員完成。可見對于鉤藤化學成分、質量標準的深入研究，完善鉤藤的質量控制方法十分必要。本課題目的在于對鉤藤的氯仿提取物進行了化學成分的系統分離，將分離得到的單體化合物進行理化性質測定并結合NMR及MS等波譜數據鑒定其化學成分，從而完善鉤藤的定量質量標準，并為其藥理活性研究提供化學活性物質基礎。

1 資料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 儀器 色譜柱（北京玻璃儀器廠），Bruker AV Ⅲ 600型核磁共振波譜儀，LTQ-Obitrap XL液相質譜儀，RE-52AA型旋轉蒸發儀及恒溫水浴鍋（上海亞榮生化儀器廠），ZFI型三用紫外分析儀。

1.1.2 材料 薄層色譜硅膠預制板（煙臺市化學工業研究所），柱層層析硅膠（100～200目，青島海洋化工廠分廠），大葉鉤藤藥材（產地：廣西），乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇，均為分析純，純化水。

1.2 提取與分離 大葉鉤藤帶鉤莖枝藥材用70%乙醇加熱回流提取3次，每次3h，減壓回收溶劑的得浸膏。浸膏加少量水混懸后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。回收溶劑，得石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物。

將氯仿提取物用氯仿和適量甲醇溶解，加入1.5倍量的硅膠拌樣，減壓干燥，過100目篩得樣品[1]。

用氯仿和30倍量的硅膠濕法裝柱，靜置24h，加入樣品，以氯仿-甲醇（100:1～10:1）梯度洗脫，每500ml溶劑收集1次，減壓濃縮，進行TLC跟蹤檢查并合并相似組分。

將相似組分加入硅膠拌樣，硅膠反復柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫純化，得到化合物1和2。

提取分離流程圖如下。

2 結果

將分離得到的兩個化合物用核磁共振儀和質譜儀進行結構鑒定，結果如下：

化合物1 熊果酸（ursolic acid），ESI-MS m/z : 479[M + Na]+，分子質量為 456。

1HNMR（Pyridine-d5）δ：0.95（3H，d，J=6.6Hz，-CH3），1.00（3H，d，J=6.6Hz，-CH3），0.90（3H，s，-CH3），1.02（3H，s，-CH3），1.05（3H，s，-CH3），1.23（3H，s，-CH3），1.24（3H，s，-CH3），2.36（1H，d，J=11.4Hz，H-18），3.45（1H，dd，J=5.4，11.4Hz，H-3α），5.49（1H，t-like，H-12）。

13CNMR（Pyridine-d5）δ：39.5（C-1），28.5（C-2），78.5（C-3），39.8（C-4），56.2（C-5），19.2（C-6），34.0（C-7），40.4（C-8），48.4（C-9），37.7（C-10），25.3（C-11），126.0（C-12），139.7（C-13），42.9（C-14），29.1（C-15），24.3（C-16），48.4（C-17），53.9（C-18），39.9（C-19），39.8（C-20），31.5（C-21），37.8（C-22），29.2（C-23），17.0（C-24），16.1（C-25），17.9（C-26），24.0（C-27），180.2（C-28），17.8（C-29），21.8（C-30）。以上數據與文獻報道的齊墩果酸一致。

化學結構如下：

化合物2 齊墩果酸（oleanane acid），ESI-MS m/z : 479[M + Na]+，分子質量為 456。

1HNMR（CDCl3）δ：0.77（3H，s，-CH3），0.78（3H，s，-CH3），0.906（3H，s，-CH3），0.914（3H，s，-CH3），0.93（3H，s，-CH3），0.99（3H，s，-CH3），1.14（3H，s，-CH3），2.82（1H，dd，H-5），2.82（1H，dd，H-5），3.21（1H，dd，H-3），5.29（1H，t，H-12）。

13CNMR（CDCl3）δ：38.6（C-1），27.4（C-2），79.2（C-3），39.0（C-4），55.4（C-5），18.5（C-6），32.9（C-7），39.5（C-8），47.8（C-9），37.3（C-10），23.2（C-11），122.9（C-12），143.8（C-13），41.9（C-14），27.9（C-15），23.6（C-16），46.7（C-17），41.3（C-18），46.1（C-19），30.9（C-20），34.0（C-21），32.6（C-22），28.3（C-23），15.7（C-24），15.5（C-25），17.3（C-26），26.1（C-27），181.5（C-28），33.2（C-29），23.8（C-30）。以上數據與文獻報道的齊墩果酸一致。

化學結構如下：

3 討論

3.1 鉤藤中含有生物堿，游離生物堿易溶于有機溶劑。甲苯作為提取溶劑，其沸點高，濃縮困難，因此不被采用；乙醚沸點低，揮發性強，易燃易爆，不安全，最終也沒被采用。而氯仿提取鉤藤堿效果好，且價格適中，適合作為工業化提取的溶劑。

3.2 由于鉤藤堿對熱不穩定，而且在極性溶劑中又容易轉化成異鉤藤堿，因此實驗過程中應注意將溫度控制在60℃以下。

3.3 根據藥理研究發現，齊墩果酸為五環三萜類化合物，具有保肝、降轉氨酶、促進肝細胞再生、保護肝降酶、抗炎、強心利尿、抗腫瘤等功能，臨床上用于治療急性黃疸性肝炎，對慢性肝炎也有一定療效。熊果酸為三萜類化合物，具有鎮靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗潰瘍、降低高血糖等多種生物學效應。另外，大葉鉤藤中還含有生物堿，其中鉤藤堿和異鉤藤堿有較強的降壓作用，以及對心臟和中樞神經系統的影響等多種藥理活性。鉤藤總堿還有較強的逆轉腫瘤細胞多藥耐藥的作用。因此，有必要對大葉鉤藤進行開發性研究，使其發揮更大的作用，創造更大的價值。

[1] 楊君,宋純清,胡之璧.大葉鉤藤的化學成分研究[J].中國中藥雜志,2000, 25(8):484-485.

[2] 鞠建華,周亮,林耕.枇杷葉中三帖酸類成分及其抗炎、鎮咳活性研究[J].中國藥學雜志,2003,38(10):752-757.

2011-12-01

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.02.106

1672-2779（2012）-02-0150-02

（本文校對：王治華 ）