HPLC測定養血當歸片中芍藥苷的含量

肖 煥 馬再鴻

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HPLC測定養血當歸片中芍藥苷的含量

肖 煥1馬再鴻2

（1 廣州中醫藥大學第二附屬醫院藥學部，廣州 510120；2 中山大學孫逸仙紀念醫院藥學部，廣州 510120）

建立養血當歸片中芍藥苷的含量測定方法。采用HPLC法，以Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，0.1%磷酸溶液:乙腈（82:18）為流動相，檢測波長為230nm。在上述色譜條件下，芍藥苷線性范圍為0.583～58.3μg?mL-1，平均回收率101.45%，RSD 為2.52%。該方法可靠，簡單可行，為控制養血當歸片的內在質量提供了科學依據。

養血當歸片；芍藥苷；高效液相色譜法

養血當歸片為養血當歸糖漿改劑型而成，由當歸、白芍、川芎、黃芪等藥材提取，加工制得的口服制劑，具有補氣血、調經的功效。目前主要用于月經不調，行經腹痛，貧血虛弱，產后體虛，萎黃肌瘦，產后血虛等癥狀。白芍的有效成分為芍藥苷、白芍苷、氧化芍藥苷和苯甲酞芍藥苷等苷類化合物，簡稱白芍總苷。芍藥苷為白芍總苷的主要成分，具有鎮靜、解痙、抗炎、抗應激性潰瘍病、擴張冠脈血管、對抗急性心肌缺血以及抑制血小板凝聚等多方面的作用。在含量測定方面周堅等測定了養血當歸糖漿中總阿魏酸的含量[1]，為了更好控制該制劑單一藥材的質量，建立了臣藥芍藥苷含量測定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 高效液相色譜儀（美國WATERS，515泵，2487紫外檢測器，浙江大學N3000色譜工作站）；AUY120D分析天平（SHIMADZU）；芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110736-200501）；當歸、白芍、川芎、黃芪等藥材購于廣州市致信藥業有限公司；養血當歸片（自制）；所用試劑乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件與系統適應性試驗 色譜分析條件：色譜柱為Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm），Diamonsil C18預柱，流動相為0.1%磷酸溶液:乙腈（82:18）；檢測波長為230nm，溫度為室溫，進樣量為10μl，理論塔板數按芍藥苷色譜峰計算不低于3000。分別精密吸取芍藥苷對照品、供試品、陰性對照液（取處方中除去白芍以外的其它藥材，按樣品制備方法制成缺白芍陰性樣品，并按供試品溶液制法制成陰性對照溶液）各1010μl進樣，記錄色譜圖。結果芍藥苷對照品和供試品色譜圖中芍藥苷峰與雜質峰達基線分離，分離度不小于1.5，相對保留時間約為24.3min，而陰性對照色譜圖中相同位置無干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

1.2.2 線性關系的考察 精密稱取芍藥苷對照品5.83mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得58.3μg?mL-1的標準品儲備液。然后將儲備液進行分別稀釋至29.15、11.66、2.332、1.166、0.583μg?mL-1，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為系列對照品溶液。分別吸取上述 5份對照品溶液各10μl，按2.1項下色譜條件測定，以其濃度C（μg?mL-1）為橫坐標，峰面積積分值（A）為縱坐標繪制標準曲線，得到回歸方程為A=1100.9C -462.9，R=0.9995，線性范圍為0.583～58.3μg?mL-1。

1.2.3 供試品溶液的制法 根據參考文獻的方法[3-4]，取本品（批號30110301）10片，研細，精密稱取0.2g于具塞三角瓶中，加70%乙醇30ml，精密稱重，超聲15min，補足損失量，取上清液，用0.45μm微孔濾膜濾過后，作為供試品溶液。

1.2.4 精密度試驗及供試液穩定性試驗 精密吸收質量濃度11.66μg·mL-1的對照品溶液10μl，連續進樣6次，結果芍藥苷峰面積積分值平均值為12497.2，RSD為1.35%，表明儀器精密度良好；另取同一樣品供試液（批號30110301），每隔2h進樣一次，12h內各圖譜中芍藥苷峰面積積分值平均值為12831.3，RSD為1.16%，說明供試液在12h內穩定性良好。

1.2.5 重復性試驗 分別稱取本品同一批號樣品6份，依法制備6份供試品溶液，進行6次測定，結果芍藥苷峰面積積分值平均值為12618.1，RSD為2.39%，說明該方法重復性較好。

1.2.6 回收率試驗 采用加樣回收試驗法，在已知含量芍藥苷的樣品中，定量加入高、中、低劑量的芍藥苷對照品溶液，依供試品溶液制法操作，進樣測定，計算芍藥苷回收率和RSD，結果見表1。

表1 芍藥苷的回收率試驗結果

結果表明本方法平均回收率101.45%，且RSD＜2%，說明本方法準確性良好。

1.2.7 養血當歸片中芍藥苷的含量測定 分別取3批樣品，按照上述2.3供試品溶液制備方法制備樣品溶液，每批平行做3個樣，與質量濃度11.66μg?mL-1的對照品溶液隨行進樣，各10μl，測定。

2 結果

以峰面積積分值比計算芍藥苷的含量，3批樣品測定結果見表 2。

表2 不同批次養血當歸片中芍藥苷的含量

根據3批中試結果，可暫定本品每片芍藥苷的含量不低于0.30mg。

3 討論

在試驗過程中，參考文獻采用甲醇:水（25:75）、乙腈:水（26:74）等多種流動相，色譜峰分離效果均不太理想。參考《中國藥典》適當調整，以0.1%磷酸溶液:乙腈（82:18）為流動相時，分離效果較好，無其它干擾的雜質峰，峰形較好，可以用于本制劑中芍藥苷的含量測定。

在供試品制備時，單純采用甲醇制備樣品時，有雜質干擾，參考文獻以70%乙醇作為提取溶媒[2-5]，基本消除其他組份的干擾。同時在超聲時間和乙醇用量上均進行了優選，最終確定以70%乙醇30ml，超聲提取15min為提取條件，不僅雜質無干擾，且測得含量高，穩定可靠，操作方法簡單有效。

[1] 周堅,王宓.養血當歸糖漿質量標準的研究[J].南京中醫藥大學學報, 2003,23(1):61-62.

[2] 周祖坤,孫代華,凌颯.高效液相色譜法測定當歸芍藥顆粒劑中芍藥苷的含量[J].藥物分析雜志,2006,26(7):1001-1003.

[3] 李衫,王亞楠,劉小宇,等.白芍總昔提取和純化工藝的研究[J].食品科學,2007,28(5):173-175.

[4] 鄧一鳴,孫曉霞,薛立安.赤芍中芍藥苷的提純工藝研究[J].南京中醫藥大學學報,2004,20(6):363-365.

[5] 周洪偉,許文博,王玉蓉,等.赤芍總苷提取與大孔樹脂純化工藝研究[J].中醫藥學報,2011,39(1):48-50.

Determination of Paeoniflor in Yangxue Danggui Tablets by HPLC

XiaoHuan, MaZaihong

（1.Department of Pharmacy, the Second Affiliated Hospital, Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510120, China; 2.Department of Pharmacy, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510120, China）

To set up a method for content determination of Paeoniflor in Yangxue Danggui Tablets.The HPLC analysis was performed on a Diamonsil C18 (250mm×4.6mm, 5μm) column, mobile phase was 0.1% phosphoric acid:acetonitrile (82:18), detecting wavelength was at 230nm.The standard curve was linear within a range of 0.583-58.3μg?mL-1.The average recovery and RSD were 101.45% and2.52%, respectively.This method is accurate, reliable, and can provide a scientic index for controlling the qualities of Yangxue Danggui Tablets.

Yangxue Danggui Tablets; Paeoniflor; HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.02.108

1672-2779（2012）-02-0154-02

2011-12-18

（本文校對：韓世輝 ）