hTERT、Sp1、c-myc在良惡性胰島β細胞瘤中的表達差異

(廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530021)

胰島β細胞瘤的臨床特點是過量分泌的胰島素釋放入血，引起以低血糖為主的一系列癥狀。目前，國內外關于胰島β細胞瘤的報道多數是關于胰島β細胞瘤影像學的診斷和外科治療手段，而有關良、惡性胰島β細胞瘤的鑒別報道極少。惡性胰島β細胞瘤雖較為罕見，但復發率、病死率高［1］，因此早期區分良、惡性胰島β細胞瘤對于指導臨床診療和判斷預后有很大幫助。本文通過免疫組化SP法檢測人類端粒酶逆轉錄酶(hTERT)、刺激蛋白1(Spl)、原癌基因轉錄因子(c-myc)在良、惡性胰島β細胞瘤和正常胰島細胞組織中的表達情況，為鑒別良、惡性胰島β細胞瘤提供客觀、簡便的診斷方法，以便指導臨床治療及判斷預后。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集1990年4月～2010年4月手術切除、術后經病理證實的胰島β細胞瘤石蠟標本43例。良性27例，男10例、女17例，年齡16～66(44±11.8)歲;惡性16例，男6例、女10例，年齡21～72(47±12.6)歲。另取正常胰島細胞組織20例作為對照組。患者于術前行胰腺CT檢查、B超檢查、胰島素釋放指數測定，均符合診斷標準。

1.2 檢測方法 采用免疫組化SP染色法檢測組織中hTERT、SP1和 c-myc蛋白含量。組織標本經10%多聚甲醛固定，石蠟包埋，連續切4μm厚切片，按照SP檢測試劑盒說明書操作。PBS代替一抗作為陰性對照。以細胞核和(或)細胞質出現棕黃色為陽性細胞。高倍鏡下觀察切片，取5個視野，每個視野計數200個細胞，共計數1 000個細胞。陽性細胞 ＜5%為(－)，5% ～25%為(+)，26% ～50%為(++)，＞50%為(+++)。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件進行數據處理，hTERT、SP1和c-myc免疫組化的結果在不同臨床參數和病理亞組的統計分析分別用等級資料秩和檢驗和獨立樣本秩和檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關性分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胰島 β細胞瘤和正常胰島細胞組織中hTERT、Sp1、c-myc蛋白的表達 hTERT、Sp1、c-myc在惡性胰島β細胞瘤中的陽性表達率分別為81.2%(13/16)、75.0%(12/16)、87.5%(14/16)，在良性胰島β細胞瘤分別為25.9%(7/27)、29.6%(8/27)、14.8%(4/27)。正常胰島細胞組織中未見陽性表達。

2.2 hTERT、Sp1和c-myc蛋白表達與臨床病理參數的關系 hTERT、Sp1和c-myc蛋白表達與性別、腫瘤大小無關(P均＞0.05)，與病理類型相關，在惡性胰島β細胞瘤的表達高于良性胰島β細胞瘤(P＜0.05)。見表1。相關性分析顯示，hTERT與Sp1、c-myc 的表達呈正相關(r分別為 0.992、0.893，P 均 ＜0.01)。

表1 43例胰島β細胞瘤的hTERT、Sp1和c-myc蛋白的表達(例)

2.3 單用hTERT和三種抗原并聯對診斷胰島β細胞瘤的陽性率比較 43例胰島β細胞瘤中，三種抗原并聯診斷的陽性率為 55.8%(24/43)，單用hTERT抗原診斷的陽性率為 46.5%(20/43)。hTERT和三種抗原并聯診斷對43例胰島β細胞瘤作出分級診斷的結果不存在一致性(κ=0.00，P＞0.05)。見表 2。

表2 43例胰島β細胞瘤的hTERT和三種抗原并聯診斷的表達(例)

2.4 hTERT、Sp1和c-myc對診斷胰島β細胞瘤的預測值比較 見表3。hTERT、Sp1和c-myc三個指標并聯診斷比單個指標的檢測靈敏度更高，陽性預測值和準確診斷指數一致，而準確度和特異性無統計學差異。

表3 hTERT、Sp1、c-myc對胰島β細胞瘤診斷的預測值(%)

3 討論

胰島β細胞瘤占胰島細胞腫瘤的70%～75%。瘤體一般較小，直徑＜2 cm者占85%左右。腫瘤大部分為良性，惡性者僅占10% ～16%［2］。從形態學上很難鑒別胰島β細胞瘤的良、惡性，主要根據腫瘤有無侵犯包膜及血管、有無遠處器官轉移［3］及局部淋巴結轉移。目前尚未發現能早期診斷惡性胰島β細胞瘤的腫瘤標志物。本研究采用免疫組化SP法檢測hTERT、Sp1、c-myc在良、惡性胰島β細胞瘤和正常胰島細胞組織中的表達情況，探討其對鑒別胰島β細胞瘤的價值，為判斷良惡性胰島β細胞瘤提供客觀的診斷方法。

端粒酶是一種自身攜帶模板的核糖核酸蛋白酶，它能夠利用自身RNA作為模板合成端粒DNA，加到染色體末端防止端粒縮短，使細胞具有繼續增殖的能力。端粒酶幾乎存在于所有永生細胞系、生殖細胞、干細胞和近90%的腫瘤中，在正常體細胞中很少表達［4］。hTERT是人類端粒酶蛋白的催化亞單位，是端粒酶的限速成分，在端粒酶活性調節中起重要作用。研究認為，端粒酶活性是鑒別正常組織和惡性腫瘤組織的重要標志物，同時也包括內分泌腫瘤［5～7］。端粒酶在神經母細胞瘤、胰腺癌、肺癌、子宮上皮內瘤變、宮頸癌、胃癌等組織中均呈高表達［8，9］，說明端粒酶表達陽性的患者其病變的進展可能性大，腫瘤的惡性程度高。Lam等［10］研究認為，端粒酶對區分良、惡性胰腺內分泌腫瘤有價值。本研究表明，hTERT在惡性胰島β細胞瘤中的表達高于良性，在正常胰島組織無表達。提示hTERT蛋白表達可用來鑒別良、惡性胰島β細胞瘤。

研究表明，hTERT的表達及調控與眾多因素有關，其主要調控方式在轉錄水平，研究該酶的轉錄調控方式對研究腫瘤的發生發展具有重要意義。Kyo等［11］研究序列的分析表明，hTERT包含 Sp1、c-myc等多個轉錄因子結合位點，Sp1、c-myc和hTERT是同一個通路上的三個基因。Sp1是序列特異性的DNA結合蛋白，可結合并正向調控某些富含GC序列的啟動子的細胞基因的轉錄過程，從而調控腫瘤細胞的生存、生長和血管生成。本研究表明，Sp1在惡性胰島β細胞瘤的表達明顯高于良性;相關性分析顯示，hTERT與Sp1的表達呈正相關。

c-myc是一種原癌基因，其過表達可導致癌的發生。c-myc對hTERT的激活是通過與ATG上游－34和－242個核苷酸之間的中心區域的兩個E-box相結合，這一激活途徑與細胞增殖及蛋白合成無關，所以hTERT是c-myc的直接轉錄靶基因。鐘鳴等［16］通過用原位雜交檢測癌基因轉錄因子c-myc和Sp1在人成釉細胞瘤(AB)中的表達及與hTERT的關系，結果顯示AB中hTERT明顯增加的活性可能與轉錄因子Sp1和c-myc有關，三者在AB中的表達趨勢與AB的臨床生物學特性相關。本研究結果顯示，c-myc在惡性胰島β細胞瘤的表達明顯高于良性。相關性分析顯示，hTERT與c-myc的表達呈正相關。良、惡性胰島β細胞瘤的hTERT和三種抗原并聯診斷的表達結果顯示，三者并聯診斷和單用hTERT的結果不一致，三種抗原并聯診斷比單用hTERT診斷陽性率更高。聯合檢測hTERT、Sp1和c-myc的準確度、靈敏度、陰性預測值、正確診斷指數優于單獨檢測hTERT。

綜上所述，hTERT在胰島β細胞瘤的表達與轉錄因子c-myc和Sp1的激活有關，Sp1和c-myc激活后，可以與hTERT核心啟動子區內的Sp1和c-myc的結合位點結合，從而激活hTERT轉錄，導致腫瘤發生。聯合檢測hTERT、c-myc和Sp1的表達有助于診斷胰島β細胞瘤，并評價預后。

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