HPLC法同時測定布洛芬口服液體制劑中布洛芬、苯甲酸鈉的含量

李海燕，劉治安，莫炫永，尹慶和，廖戈瑩（.中山大學附屬東華醫院藥學部，廣東 東莞 530；.東莞市國藥質量檢測中心，廣東 東莞 5300）

布洛芬口服液體制劑是臨床常用的解熱鎮痛藥，適用于急性上呼吸道感染等引起的小兒發熱，也可用于緩解兒童輕至中度疼痛，如頭痛、關節痛、偏頭痛、牙痛、肌肉痛、神經痛、痛經等癥。其處方中還含有防腐劑苯甲酸鈉，它在食品和藥品中可作為防腐劑，但過量攝入會對人體產生一定的毒性，尤其對于兒童更需要注意。不同劑型的布洛芬口服液體制劑所含的苯甲酸鈉不同。高效液相色譜（HPLC）法是測定苯甲酸鈉的常見方法[1-3]。目前，HPLC法同時測定布洛芬口服液體制劑中布洛芬、苯甲酸鈉含量的方法尚未見報道。筆者在查閱文獻的基礎上建立了HPLC法同時測定布洛芬口服液體制劑中布洛芬、苯甲酸鈉含量的方法，方法操作簡單，結果可靠，重復性好，可為布洛芬口服液體制劑的質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型RRLC高分離度快速HPLC儀，包括G1314B VWD SL紫外檢測器、G1312B Bin Pump SL型二元泵、G1316B TCC SL型柱溫箱、G1329B ALS SL型標準自動進樣器（美國安捷倫科技有限公司）；KQ5200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

布洛芬對照品（使用前不需干燥處理，中國食品藥品檢定研究院，批號:100179-201105）；苯甲酸鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號:100433-200301）；乙腈、甲醇為色譜純（德國默克公司）；水（屈臣氏蒸餾水經0.2 μm微孔濾膜過濾）；十二烷基磺酸鈉（西格瑪奧德里奇（上海）貿易有限公司，含量≥99%，批號:106437）；樣品為上市的布洛芬口服液體制劑（共20種規格，包括了糖漿劑、口服液、滴劑、口服混懸劑）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用外標法測定。色譜柱:Waters XTerra?MS C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相:乙腈-0.5%十二烷基磺酸鈉-磷酸（V/V/V）＝520∶480∶1（流動相在使用前需經0.2 μm微孔濾膜濾過）；流速:1mL·min－1；檢測波長:230 nm；進樣量:10μL；柱溫:30℃。以保留時間定性，峰面積定量。理論板數以苯甲酸鈉計可達4000以上；樣品中苯甲酸鈉峰與布洛芬峰及其他峰能夠達到分離度＞2，保留時間苯甲酸鈉為9.5min，布洛芬為11.4min，結果樣品中的其他組分對苯甲酸鈉和布洛芬的含量測定無干擾。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.樣品；B.苯甲酸鈉對照品；C.布洛芬對照品；1.苯甲酸鈉；2.布洛芬Fig 1 HPLC chromatogramsA.sample；B.sodium benzoate control；C.ibuprofen control；1.sodium benzoate；2.ibuprofen

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取苯甲酸鈉對照品10.13mg，置于100mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成苯甲酸鈉濃度為101.3mg·L－1的對照品溶液。精密稱取布洛芬對照品12.52mg，置于25mL棕色容量瓶中，加流動相適量超聲10min并稀釋至刻度，搖勻，制成布洛芬濃度為500.8mg·L－1的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取樣品適量，置于100mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得含布洛芬濃度為0.5mg·L－1的供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例取不含布洛芬和苯甲酸鈉的其他成分，制成陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制備得陰性對照溶液。

2.3 專屬性考察

按處方量的比例稱取輔料，依“2.2.2”項下方法制備，照“2.1”項下色譜條件測定。結果，在布洛芬、苯甲酸鈉主峰處，輔料不干擾結果的測定。

2.4 線性關系考察

精密稱取布洛芬對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成濃度為每1mL中含布洛芬1.547mg的標準貯備溶液。再精密量取1、2、3、4、5、6、7mL，置于 10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，按“2.1”項下色譜條件測定。以濃度（C）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程A＝1650096C+77979（r＝0.9998）。結果表明，布洛芬檢測濃度在154.7～1829.0mg·L－1范圍內與其峰面積積分值線性關系良好。

精密稱取苯甲酸鈉對照品適量，加水溶解并稀釋制成濃度為每1mL中含苯甲酸鈉1.031mg的標準貯備溶液。再精密量取1、2、3、4、5、6、7mL，置于 25mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，按“2.1”項下色譜條件測定。以濃度（C）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程A＝1120056C+61979（r＝0.9996）。結果表明，苯甲酸鈉檢測濃度在41.24～288.6mg·L－1范圍內與其峰面積積分值線性關系良好。

2.5 精密度試驗

分別取“2.4”項下布洛芬和苯甲酸鈉的標準溶液適量，連續進樣6次，測定峰面積。結果，布洛芬、苯甲酸鈉RSD分別為0.16%、0.55%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取同一批號的樣品適量，共6份，按“2.1”項下色譜條件測定含量。結果，布洛芬、苯甲酸鈉RSD分別為0.33%、0.54%，表明方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

取布洛芬口服溶液制劑1瓶，加流動相制成每1mL中約含布洛芬0.5mg的溶液，室溫下放置，分別于0、2、4、6、8 h取樣，按“2.1”項下色譜條件進樣分析。結果，布洛芬、苯甲酸鈉的RSD分別為0.44%和0.79%，表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

分別配制3份樣品，加入一定量的低、中、高濃度對照品溶液，置于100mL容量瓶中，加流動相適量，充分振搖，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續濾液5mL，置于10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10μL，按“2.1”項下色譜條件進樣分析。結果，本品中2種成分的平均加樣回收率分別為99.40%、100.01%、100.54%（RSD%＝0.10%、0.28%、0.12%）和98.97%、99.03%、100.61%（RSD＝0.17%、0.12%、0.18%），詳見表1。

2.9 樣品含量測定

按“2.1”項下色譜條件測定20批樣品含量，結果本品20批含量測定均符合要求，苯甲酸鈉百分量在0.07%～0.30%的范圍內，詳見表2。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

表2 樣品含量測定結果（n＝3）Tab 2 Content determination of samples（n＝3）

3 討論

解熱鎮痛藥口服液體制劑上市品種很多，大多含有布洛芬，且大多數試驗都是只測定其中的1種或多種主要成分，有紫外分光光度法[4]，以HPLC法居多[5-8]。苯甲酸鈉在2010年版《中國藥典》（二部）[9]中有收載，含量測定采用雙相滴定法，操作比較煩瑣，且取樣量大。本品中苯甲酸鈉含量較低，采用雙相滴定法干擾較大，結果易出現誤差。但是，對于其中的布洛芬及苯甲酸鈉的同時檢測暫未有報道。筆者采用HPLC法同時測定布洛芬口服液體制劑中布洛芬與防腐劑苯甲酸鈉的含量，操作簡單，結果可靠，專屬性強，可為控制布洛芬口服液體制劑的質量提供重要依據。

由布洛芬、苯甲酸鈉的紫外吸收圖譜可知，2種成分在210、262 nm波長左右都有吸收，在210 nm波長處吸收度較高，但210 nm波長靠近末尾吸收，許多物質在此都有吸收，容易產生干擾，故選擇230 nm波長作為含量的檢測波長。布洛芬不溶于水，苯甲酸鈉為水溶性物質，筆者采用了甲醇-水系統，按照不同配比的流動相溶解。為增加布洛芬溶解性及減少其他雜質包括溶劑峰的干擾，最終確定以乙腈-0.5%十二烷基磺酸鈉-磷酸（V/V/V）＝520∶480∶1為流動相。

雖然本次檢測的苯甲酸鈉百分量（0.07%～0.30%）都在國家允許范圍內，但是同一制劑不同廠家相差較大。而其對于兒童的含量是否在允許范圍內還值得商榷。建議國家有關部門針對同一制劑將苯甲酸鈉含量標準具體量化并列為檢測項目。

[1]關倩明.頭孢泊肟酯口服干混懸劑中苯甲酸鈉的HPLC測定[J].中國醫藥工業雜志，2005，36（1）:35.

[2]陳文秋，王貴華，李 田，等.銀黃口服液中苯甲酸鈉和羥苯乙酯的定量分析[J].中國藥業，2005，14（9）:56.

[3]毛桂福.反相高效液相色譜法測定呋喃西林溶液中2組分的含量[J].中國藥房，2005，16（8）:622.

[4]王 平，肖昌錄，袁訓賢.布洛芬緩釋片的制備及其體外釋放度考察[J].中國藥房，2011，22（9）:829.

[5]柏學敏，文麗麗，尹傳明.紫外分光光度法測定布洛芬片含量[J].黑龍江醫藥，2007，20（1）:4.

[6]趙 燁，陳 云，李小敏.HPLC法同時測定復方鋅布顆粒中馬來酸氯苯那敏和布洛芬的含量[J].江蘇藥學與臨床研究，2006，14（5）:307.

[7]歐陽春.反相高效液相色譜法測定布洛芬混懸液中布洛芬含量[J].中國藥業，2005，14（2）:41.

[8]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:120-121.

[9]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:1201-1202.