ATDC在胃癌中的表達及其與幽門螺桿菌感染的關系

汪偉民* 蔡煒龍 潘 杰 許洪寶

浙江省湖州市中心醫院普外科（313000）

胃癌為最常見的惡性腫瘤之一，根據全球癌癥統計資料，2008年胃癌新發病例數和死亡病例數分別占癌癥總體新發病例數和死亡病例數的8%和10%，70%以上的新發病例和死亡病例出現于發展中國家[1]。胃癌的發生、發展是一個多因素參與的多步驟過程，幽門螺桿菌（H.pylori）感染與胃癌發生密切相關目前已成為共識[2]。ATDC基因（ataxia-telangiectasia group D complementing gene）又名 TRIM29（tripartite motif-containing 29），定位于染色體11q22-23，編碼由588個氨基酸構成的蛋白質。ATDC蛋白的氨基酸序列中含有多個鋅指基序和一個亮氨酸拉鏈基序，使之可形成同源或異源二聚體。ATDC在正常成體組織中表達于胎盤、前列腺和胸腺，在胚胎組織中表達于外胚層[3]，具有促進細胞增殖和抑制電離輻射敏感性的功能。Kosaka等[4]的研究發現胃癌組織中ATDC表達較正常胃黏膜顯著增高，其高表達可作為胃癌淋巴結轉移的標記。關于胃癌組織中ATDC表達與H.pylori感染的關系，目前尚未見文獻報道。本研究通過檢測胃癌組織中的ATDC表達并分析其表達與胃癌臨床病理特征和患者H.pylori感染狀態的關系，旨在進一步明確ATDC在胃癌中的作用，并初步探討ATDC與H.pylori相關胃癌的關系，以期為胃癌的有效防治提供新的思路。

材料與方法

一、標本獲取

選取2008年6月～2010年5月于浙江省湖州市中心醫院行胃癌根治術的72例胃癌患者的癌組織和相應癌旁非癌組織（距胃灶邊緣3～5 cm）石蠟包埋標本，所有標本均經HE染色病理檢查明確診斷，按美國癌癥聯合會（AJCC）標準對胃癌行組織學分級。入選患者男38例，女34例，年齡32～76歲，平均（54.6±16.6）歲。所有患者均未接受過H.pylori根除治療，術前未接受過放化療。經13C-尿素呼氣試驗（13C-UBT）判定 H.pylori感染情況，H.pylori陰性28例，陽性44例，陽性率為61.1%。

二、ATDC免疫組化染色

以免疫組化SP法檢測胃癌組織和相應癌旁組織中的ATDC表達和分布。兔抗人TRIM29多克隆抗體為Abcam plc.產品，即用型兔SP免疫組化檢測試劑盒（含生物素標記羊抗兔IgG和HRP標記鏈霉卵白素工作液）為北京中杉金橋生物技術有限公司產品，操作按試劑盒說明書進行。以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知ATDC染色陽性切片作為陽性對照。

結果判定：ATDC免疫反應陽性物質定位于細胞質。隨機選取10個200倍視野，每視野計數400個細胞。陽性細胞比例：無，0分；<30%，1分；30%～60%，2分；≥60%，3分。陽性染色強度：無，0分；弱，1分；一般，2分；強，3分。總分為兩組分值之和：0 分，陰性（－）；1～2 分，弱陽性（±）；3～4 分，陽性（+）；5～6 分，強陽性（++）。 陽性和強陽性判定為ATDC表達陽性。

三、統計學分析

應用SPSS 16.0統計軟件，組間率的比較采用χ2檢驗，組間等級資料的比較采用Wilcoxon檢驗或Kruskal-Wallis H檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

一、胃癌和相應癌旁組織ATDC表達比較

72例胃癌組織中，ATDC陰性、弱陽性、陽性、強陽性表達例數分別為5、12、40、15例，陽性表達率為76.4%（55/72），其表達定位于腫瘤細胞質；相應癌旁組織ATDC陰性、弱陽性、陽性、強陽性表達例數分別為 50、20、2、0例， 陽性表達率為 2.8%（2/72），其表達定位于細胞質（見圖1）。胃癌組織ATDC陽性表達率明顯高于相應癌旁組織，差異有統計學意義（P<0.05）。

二、ATDC表達與胃癌臨床病理特征和患者H.pylori感染狀態的關系

圖1 ATDC在胃癌和相應癌旁組織中的表達（免疫組化SP法，×200）

中低分化、伴轉移（包括淋巴結轉移和遠處轉移）、伴H.pylori感染的胃癌患者，胃癌組織ATDC陽性表達率和表達強度分別明顯高于高分化、不伴轉移、不伴 H.pylori感染的胃癌患者，差異均有統計學意義；不同性別組間ATDC表達則無明顯差異（見表1）。表明ATDC表達與胃癌組織學分級、轉移以及患者的H.pylori感染狀態相關，而與患者性別無關。

表1 ATDC表達與胃癌臨床病理特征和患者H.pylori感染狀態的關系

討 論

胃癌是嚴重威脅人類健康的消化系統惡性腫瘤之一，其早期診斷和治療一直是相關領域的研究熱點。已知H.pylori是人類胃癌的Ⅰ類致癌原，因此尋找H.pylori相關胃癌的分子標記物對胃癌的有效防治具有重要意義。

ATDC又名TRIM29，屬于TRIM蛋白家族，其特征性結構為含有三個鋅結合域（R、B1、B2）和一個卷曲螺旋區域（CC），ATDC 含有 B1、B2和 CC。TRIM蛋白家族為RING型E3泛素連接酶亞家族之一，其成員參與了發育、細胞生長等多種生物學過程以及一些人類疾病如HIV感染和惡性腫瘤的發生。研究顯示ATDC在肺癌、膀胱癌、結腸癌、卵巢癌、子宮內膜癌、多發性骨髓瘤、胃癌、胰腺癌中呈高表達，在黑素瘤、乳腺癌、頭頸部癌、前列腺癌中呈低表達[3～6]。

Kosaka等[4]以實時RT-PCR和免疫組化技術檢測了124例胃癌患者的ATDC mRNA和蛋白表達，發現胃癌組織中的ATDC mRNA表達水平是相應非癌組織的3.07倍，胃癌組織中ATDC陽性染色定位于腫瘤細胞質，基質細胞和正常上皮細胞中未見ATDC表達；ATDC mRNA表達與胃癌的大小、組織學分級、浸潤深度和淋巴結轉移相關；多變量logistic回歸模型顯示ATDC mRNA高表達可作為胃癌淋巴結轉移的獨立預測因素；此外，ATDC mRNA高表達尚與預后不良相關。Wang等[6]的研究顯示，ATDC在正常胰腺組織和慢性胰腺炎組織中基本不表達，在絕大多數侵襲性胰腺癌以及胰腺癌前病變中呈高表達，具有加速癌細胞增殖，促進腫瘤生長和轉移的作用。

本研究以免疫組化方法檢測ATDC在胃癌組織和相應癌旁組織中的表達，發現ATDC在胃癌組織中的陽性表達率顯著高于相應癌旁組織（76.4%對2.8%），且胃癌組織中的ATDC表達與胃癌組織學分級和轉移相關，表明ATDC可能參與了胃癌的發生、發展。

Wnt/β-catenin信號通路為常見腫瘤信號通路，大量研究[7～10]顯示該信號通路障礙為胃癌發生、發展的機制之一。關于胰腺腫瘤中ATDC表達的研究[6]顯示，胰腺癌組織中的ATDC表達與β-catenin水平升高相關，進一步探討其機制，發現ATDC可與 Dvl-2蛋白（Wnt/β-catenin信號通路 Axin/Gsk-3β/APC降解復合體中Gsk-3β的負調控因子）結合并穩定其表達，從而使β-catenin從降解復合體中釋放以穩定其表達，進而激活下游由β-catenin/TCF/LEF調節的靶基因轉錄，表明ATDC系通過激活Wnt/β-catenin信號通路發揮致胰腺癌作用。關于卵巢癌組織中ATDC與β-catenin關系的研究[11]亦表明β-catenin可能是ATDC參與卵巢癌發生、發展的效應蛋白。由此推測ATDC在胃癌發生、發展中的作用亦可能是通過調節Wnt/β-catenin信號通路實現的，具體機制有待進一步研究。

此外，有研究[12]發現ATDC可與乙酰轉移酶蛋白Tip60結合，ATDC過表達促進Tip60降解并改變其細胞內分布，使Tip60對p53的乙酰化作用降低，導致細胞生長和轉化活性增強。另有研究[13]發現，ATDC可通過與p53結合阻止其進入細胞核，從而抑制p53的核活性以及由p53調節的基因如p21、NOXA表達，促進細胞增殖。上述機制可用于解釋ATDC對腫瘤細胞的促增殖作用。因此ATDC參與胃癌的發生、發展還可能與p53信號通路有關。

本研究還發現伴H.pylori感染的胃癌患者胃癌組織ATDC陽性表達率和表達強度顯著高于不伴H.pylori感染的胃癌患者。本組胃癌患者系以13C-UBT判定H.pylori感染情況。鑒于胃癌患者的胃內環境已不適合 H.pylori生存，13C-UBT并不能準確反映胃癌患者的H.pylori感染狀態，因此根據上述結果僅能推測ATDC與H.pylori相關胃癌之間可能存在一定聯系。至于ATDC是否參與了H.pylori相關胃癌的發生機制，抑或ATDC與H.pylori系通過不同機制，在胃癌發生、發展的不同階段起不同作用，以及兩者是否具有協同致癌作用，均有待進一步研究。H.pylori感染可激活胃上皮細胞中的轉錄因子 NF-κB，NF-κB信號通路在H.pylori相關胃黏膜炎癥中起關鍵作用[14,15]，亦為胃癌發生的重要路徑之一[10]。ATDC參與胃癌的發生、發展是否與NF-κB信號通路有關，有待進一步研究。

綜上所述，ATDC在胃癌組織中的表達顯著高于相應癌旁組織，并與胃癌組織學分級和轉移相關，提示其可能參與了胃癌的發生、發展；而伴H.pylori感染的胃癌患者胃癌組織ATDC表達顯著高于不伴 H.pylori感染的胃癌患者，則提示ATDC可能與H.pylori相關胃癌有一定聯系。因此，ATDC有望成為新的胃癌分子標記物，為胃癌的早期診斷、預后判斷和基因治療研究提供新的靶點。

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