參附注射液對(duì)腸缺血再灌注大鼠心腎功能及SOD、MDA的影響

范宏宇，張春暉，楊 潔，張海霞

（1.河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院CT中心，河北宣化 075100；2.河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)臨床教研室，河北張家口 075000）

參附注射液對(duì)腸缺血再灌注大鼠心腎功能及SOD、MDA的影響

范宏宇1，張春暉2，楊 潔2，張海霞2

（1.河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院CT中心，河北宣化 075100；2.河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)臨床教研室，河北張家口 075000）

目的探討參附注射液（Shenfu injection，SFI）預(yù)處理對(duì)小腸缺血再灌注（ischem ia/reperfusion，I/R）心腎功能的保護(hù)作用及對(duì)丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）含量的影響。方法選取健康雄性Wistar大鼠24只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、I/R組、SFI組，每組8只動(dòng)物，通過(guò)夾閉腸系膜上動(dòng)脈建立腸損傷模型，SFI組于缺血前30min舌下靜脈注射SFI 10mL/kg，再灌注120min后，各組取血測(cè)定心腎功能并制備心腎組織勻漿測(cè)定SOD、MDA的含量。結(jié)果SFI組與I/R組相比，血清中反映心肌損傷程度的乳酸脫氫酶-1、肌酸激酶同工酶以及反映腎功能的尿素氮、肌酐水平明顯下降，組織勻漿中自由基代謝產(chǎn)物MDA降低、自由基清除酶SOD增多（P＜0.05）。結(jié)論SFI對(duì)大鼠腸I/R后心腎功能具有保護(hù)作用，機(jī)制可能與其促進(jìn)自由基的清除有關(guān)。

腸；再灌注損傷；參附注射液；大鼠

小腸缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）不僅能夠引起腸道組織功能損傷，而且由于腸道屏障功能障礙，使內(nèi)毒素和細(xì)菌移位到體循環(huán)，導(dǎo)致炎癥介質(zhì)的大量釋放以及自由基的產(chǎn)生，引起肺、肝、心、腎等的功能障礙，從而誘發(fā)多器官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）［1］，參附注射液（Shenfu injection，SFI）是由人參、附片等中藥提取而成的中成藥注射劑，具有很好的抗缺血再灌注損傷、抗休克等作用，本研究探討SFI對(duì)腸I/R后心腎功能的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組：實(shí)驗(yàn)用清潔級(jí)Wistar雄性大鼠24只，體質(zhì)量268～308g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物繁殖中心提供。隨機(jī)分為假手術(shù)組（C組）、腸I/R組、參附SFI治療組（SFI組），每組8只。

1.2 試劑與儀器：丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所；尿素氨（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，Cre）試劑盒，購(gòu)自北京世診中拓生物技術(shù)有限公司和上海科華東菱診斷用品有限公司；乳酸脫氫酶-1（lactic acid dehydrogenase-1，LDH-1）和肌酸激酶同工酶（creatine phosphokinase isoenzyme，CK-MB）試劑盒，購(gòu)自上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司和北京世診中拓生物技術(shù)有限公司；Aeroset型全自動(dòng)生化分析儀，為美國(guó)雅培Abbott公司產(chǎn)品，759型光柵分光光度計(jì)為上海精密儀器廠產(chǎn)品；FJ-200型高速分散均質(zhì)機(jī)為上海標(biāo)本模型廠產(chǎn)品。

1.3 模型的制備與處理：所有動(dòng)物術(shù)前禁食12h，自由飲水，1%戊巴比妥那（30mg/kg）腹腔注射麻醉，在無(wú)菌的條件下，經(jīng)腹正中切口，推開腸管分離腸系膜上動(dòng)脈（superiormesentery artery，SMA），I/R組用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉SMA 45min，然后松夾恢復(fù)血供再灌注120min；SFI組，于缺血前30min舌下靜脈注射SFI 10mL/kg，再灌注120min；C組，只在腸系膜上動(dòng)脈下穿線但不結(jié)扎，其余與I/R組相同。以上各組在再灌注120min后，于腹主動(dòng)脈取血8mL，注入離心管中，離心15min（300r/min），取上清液置于-80℃保存以備檢測(cè)心腎功能；取心、腎等臟器，應(yīng)用高速分散均質(zhì)機(jī)制備10%組織勻漿，測(cè)定SOD、MDA的含量。

1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法：應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組血清中反映心肌損傷程度的LDH-1、CK-MB以及反映腎功能的BUN、Cre等各項(xiàng)生化指標(biāo)，其中LDH-1、CK-MB采用速率法，BUN采用酶法，Cre采用堿性苦味酸法；分別應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性和改良TBA微量法測(cè)定MDA含量，組織勻漿蛋白以考馬斯亮蘭法進(jìn)行定量，用以反映自由基損傷。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以±s表示，分別采用單因素方差分析和q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 SFI對(duì)腸I/R損傷大鼠心腎功能的影響：與C組相比，I/R組的血清LDH-1、CK-MB、BUN、Cre明顯升高（P＜0.01）；與I/R組相比，SFI組血清LDH-1、CK-MB、BUN、Cre明顯降低（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 SFI對(duì)腸I/R損傷大鼠血清LDH-1、CK-MB、BUN、Cre含量的影響

2.2 SFI對(duì)腸I/R損傷大鼠心肌組織勻漿中MDA、SOD含量的影響：與C組相比，I/R組的心肌勻漿中MDA含量明顯增高、SOD明顯降低（P＜0.01）；與I/R組相比，SFI組心肌組織勻漿中MDA含量明顯降低、SOD明顯增高（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 SFI對(duì)腸I/R損傷大鼠心肌組織勻漿MDA、SOD含量的影響

2.3 SFI對(duì)腸I/R損傷大鼠腎組織勻漿中MDA、SOD含量的影響：與C組相比，I/R組的腎組織勻漿中MDA含量明顯增高、SOD明顯降低（P＜0.01）；與I/R組相比，SFI組腎組織勻漿中MDA含量明顯降低、SOD明顯增高（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 SFI對(duì)腸I/R損傷大鼠腎臟組織勻漿MDA、SOD含量的影響

3 討 論

持續(xù)缺血后的再灌注過(guò)程對(duì)誘發(fā)器官損傷和MODS尤為重要。對(duì)許多器官而言，大多數(shù)組織和細(xì)胞的損傷不是在缺血期，而是在微循環(huán)恢復(fù)灌注之后，恢復(fù)組織灌流是氧自由基大量產(chǎn)生和釋放的過(guò)程。I/R氧自由基損傷在MODS發(fā)病過(guò)程中起重要作用［2］。由于缺氧缺血時(shí)能量代謝障礙，會(huì)使機(jī)體氧自由基大量生成，自由基的清除減少，同時(shí)當(dāng)機(jī)體恢復(fù)氧供、血供及側(cè)支循環(huán)重建時(shí)，加重氧自由基大量產(chǎn)生，形成自由基的放大反應(yīng)，大量氧自由基與生物膜上大分子物質(zhì)如不飽和脂肪酸反應(yīng)產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化物，破壞生物膜，同時(shí)導(dǎo)致蛋白質(zhì)交聯(lián)變性、DNA斷裂，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，造成組織損傷［3］。氧自由基大量產(chǎn)生，消耗大量SOD，引起SOD水平下降，且SOD活性也會(huì)受到抑制。MDA含量反映體內(nèi)脂質(zhì)氧化的程度，I/R損傷時(shí)MDA含量越高，體內(nèi)脂質(zhì)氧化程度越高，組織損傷越重［4］。因此氧自由基損傷在I/R致MODS發(fā)病過(guò)程中起重要作用。

本研究結(jié)果表明，I/R與C組相比，反映心肌損傷程度的LDH-1、CK-MB及反映腎功能的BUN、Cre水平明顯增高（P＜0.01），組織勻漿中自由基代謝產(chǎn)物MDA增多、自由基清除酶SOD減少，說(shuō)明腸I/R后自由基大量釋放，從而使心、腎等重要器官發(fā)生嚴(yán)重的損傷。

SFI的主要有效成分為烏頭類生物堿和人參皂苷，它是人參和黑附子的提取物，具有多種藥理作用，廣泛應(yīng)用于抗休克、心力衰竭等危重病的救治。研究發(fā)現(xiàn)SFI可以明顯降低腸I/R后腸、肝組織MDA含量，減少組織的脂質(zhì)過(guò)氧化程度，減輕腸道和肝臟的組織損傷［5］。本研究表明，經(jīng)過(guò)SFI預(yù)處理后，心腎組織勻漿中的自由基代謝產(chǎn)物MDA降低、自由基清除酶SOD增多，反映心肌損傷的LDH-1、CK-MB及腎功能的BUN、Cre水平明顯下降（P＜0.05），說(shuō)明SFI對(duì)腸I/R后心腎功能有顯著的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制自由基的產(chǎn)生有關(guān)，這也為臨床對(duì)MODS的治療提供了新的思路。

［1］ MOORE FA.The role of the gastrointestinal tract in postinjury multiple organ failure［J］.Am JSurg，1999，178（6）：449-453.

［2］ 張春暉，侯亞利，牛春雨，等.腸缺血再灌注致多器官損傷發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)微循環(huán)，2008，12（6）：390-391.

［3］ TANWAR M，DADA T，SIHOTA R，et al.Mitochondrial DNA analysis in primary congenital glaucoma［J］.Mol Vis，2010，16（3）：518-533.

［4］ 王進(jìn)，喬禮芬，李永勝，等.參附注射液對(duì)大鼠腸缺血再灌注肺損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2009，44（13）：993-997.

［5］ 王進(jìn)，喬禮芬，李永勝，等.參附注射液對(duì)腸缺血-再灌注遠(yuǎn)隔器官肝臟損傷的保護(hù)作用研究［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29（8）：607-610.

（本文編輯：趙麗潔）

R574.5

B

1007-3205（2012）07-0806-03

2012-02-14；

2012-03-13

河北省科學(xué)技術(shù)發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃（062761366）

范宏宇（1976-），男，河北宣化人，河北北方學(xué)院附屬第二醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事醫(yī)學(xué)影像診斷研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.07.022