直腸癌患者手術(shù)前后血清VEGF表達(dá)及與遠(yuǎn)期預(yù)后的相關(guān)關(guān)系

盧明挺，章志堅(jiān)

（1.浙江省臺(tái)州市黃巖區(qū)院橋中心衛(wèi)生院外科，浙江臺(tái)州318025；2.浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院肛腸外科，浙江臺(tái)州318020）

直腸癌患者手術(shù)前后血清VEGF表達(dá)及與遠(yuǎn)期預(yù)后的相關(guān)關(guān)系

盧明挺1，章志堅(jiān)2

（1.浙江省臺(tái)州市黃巖區(qū)院橋中心衛(wèi)生院外科，浙江臺(tái)州318025；2.浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院肛腸外科，浙江臺(tái)州318020）

目的分析直腸癌患者手術(shù)前后血清血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達(dá)及與遠(yuǎn)期預(yù)后的相關(guān)關(guān)系。方法采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)患者手術(shù)前后血清VEGF的濃度，分析與臨床指征的關(guān)系。所有患者至少隨訪3年，采用KaPlan-Meier分析3年生存率。結(jié)果VEGF的表達(dá)對(duì)照組為（107.4±18.3）mg/L，直腸癌組術(shù)前為（382.7±83.6）mg/L，術(shù)后為（257.4±76.4）mg/L。直腸癌組術(shù)前和術(shù)后血清VEGF明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），直腸癌組術(shù)后血清VEGF明顯低于術(shù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。術(shù)前和術(shù)后血清VEGF表達(dá)在Duckes分期、浸潤情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小等程度的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。將VEGF平均值257.4mg/L作為劃分VEGF水平高低的分界值，術(shù)前低、高表達(dá)的3年生存率為分別為90.9%（10/11）和78.9%（15/19），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。術(shù)后低、高表達(dá)的3年生存率為分別為85.7%（12/14）和81.3%（13/16），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論術(shù)前血清VEGF的檢測(cè)對(duì)于直腸癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后具有重要意義，術(shù)后血清VEGF的檢測(cè)對(duì)直腸癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后判斷價(jià)值不如術(shù)前血清VEGF的檢測(cè)。

直腸腫瘤；血管內(nèi)皮生長因子A；預(yù)后

腫瘤的生成和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管，新生血管的生成為腫瘤提供必需的營養(yǎng)和氧氣，同時(shí)又為臟器轉(zhuǎn)移提供了通路，而腫瘤細(xì)胞又可分泌血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等特異性分子，促進(jìn)血管生成。目前傳統(tǒng)的手術(shù)或者放化療治療只針對(duì)腫瘤細(xì)胞本身，忽略了血管，從而易引起腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。VEGF是最強(qiáng)的促血管生長因子，目前有大量文獻(xiàn)顯示其在腫瘤組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，但研究多集中于術(shù)前檢測(cè)，而對(duì)術(shù)前術(shù)后與遠(yuǎn)期預(yù)后的相關(guān)性報(bào)道較少，本文主要解決這一問題。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院2007年1—12月收治的直腸癌患者（直腸癌組）35例，均經(jīng)過手術(shù)病理證實(shí)，病理類型均為腺癌。男性20例，女性15例，年齡38～84歲，中位年齡60歲。Duckes分期A期3例，B期13例，C期14例，D期5例；浸潤黏膜層8例，肌層7例，漿膜層以外20例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例；腫瘤大小，＜5cm 22例，≥5cm 13例。另取同期體檢的健康者30例作為對(duì)照組，男性18例，女性12例，年齡35～83歲，中位年齡58歲。2組患者性別、年齡等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 VEGF檢測(cè)：患者手術(shù)前1d和手術(shù)后5d抽取外周空腹靜脈血2mL，常規(guī)離心分離血清，保存待檢。VEGF檢測(cè)采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法，試劑盒購于深圳晶美公司，酶標(biāo)包被板、顯色劑A液、標(biāo)準(zhǔn)品、顯色劑B液、20倍濃縮洗滌液、終止液、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、說明書、樣本稀釋液、封板膜、酶標(biāo)試劑和密封袋。取4塊酶標(biāo)包被板，設(shè)置為標(biāo)準(zhǔn)品孔、術(shù)前樣本孔、術(shù)后樣本孔和空白對(duì)照孔，于標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL，術(shù)前和術(shù)后樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL，空白對(duì)照孔不加。37℃恒溫箱溫育30min，洗板。然后在除空白對(duì)照孔外的3個(gè)孔加入酶標(biāo)工作液50μL，重復(fù)溫育和洗板操作。每孔加入顯色劑，取出酶標(biāo)板，加如終止液，當(dāng)顏色由藍(lán)變黃終止反應(yīng)。由空白對(duì)照孔校零，于450nm波長檢測(cè)各孔吸光值，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，并計(jì)算相應(yīng)濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。生存曲線采用KaPlan-Meier分析，生存率比較采用Log rank檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 VEGF表達(dá)：對(duì)照組為（107.4±18.3）mg/L，直腸癌組術(shù)前為（382.7±83.6）mg/L，術(shù)后為（257.4±76.4）mg/L。直腸癌組術(shù)前與術(shù)后血清VEGF明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），直腸癌組術(shù)后血清VEGF明顯低于術(shù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 VEGF在各臨床指征中的表達(dá)：直腸癌組術(shù)前與術(shù)后血清VEGF表達(dá)在Duckes分期、浸潤情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小等程度的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 直腸癌組手術(shù)前后血清VEGF在各臨床指征中的表達(dá)（±s，ρ/mg·L-1）

表1 直腸癌組手術(shù)前后血清VEGF在各臨床指征中的表達(dá)（±s，ρ/mg·L-1）

*P＜0.05與術(shù)前比較（t檢驗(yàn)）

臨床指征例數(shù)血清VEGF術(shù)前術(shù)后Duckes 分期A、B16274.5±71.6223.2±46.2*C、D19489.5±98.0281.4±67.7*浸潤情況黏膜層8284.4±62.6201.3±48.0*肌層7341.4±72.8251.3±69.6*漿膜層以外20406.7±77.1293.7±83.5*淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有21422.1±101.5274.3±73.5*無14316.4±80.2226.6±78.4*腫瘤大小（L/cm）＜522415.3±89.4263.4±72.2*≥513327.4±88.5235.4±65.5*

2.3 遠(yuǎn)期預(yù)后：將術(shù)后血清VEGF平均值257.4mg/L作為劃分高低VEGF水平的分界值，并觀察術(shù)前術(shù)后以此為分界的3年生存情況。術(shù)前血清VEGF＜257.4mg/L和≥257.4mg/L的3年生存率為分別為90.9%（10/11）和78.9%（15/19），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。術(shù)后血清VEGF＜257.4mg/L和≥257.4mg/L的3年生存率為分別為85.7%（12/14）和81.3%（13/16），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

Folkman于1971年［1］首次提出“腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管的生成”假說，近幾十年來，大量臨床研究顯示出了該學(xué)說的科學(xué)性，并因此產(chǎn)生了一類作用于新生血管的靶向藥物。血管生成主要受激活因子和抑制因子的共同作用，當(dāng)二者失衡，就會(huì)導(dǎo)致血管退化或生成。血管生成促進(jìn)因子包含多種生物有效分子，其中VEGF是目前研究最多、作用最重要的一大類分子，包含7個(gè)成員，可在胚胎、炎癥、組織缺血和腫瘤時(shí)促進(jìn)血管生成。VEGF與腫瘤細(xì)胞的作用是相互的，一方面腫瘤細(xì)胞可以過度分泌VEGF，促進(jìn)周圍組織的血管生成，另一方面VEGF在促進(jìn)血管生成后，可為腫瘤組織提供必需的生長物質(zhì)，又為臟器轉(zhuǎn)移提供了通路［2-3］。因此，VEGF在腫瘤的生長、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起著重要作用。

本研究結(jié)果顯示，術(shù)前血清VEGF在Duckes分期A、B期的表達(dá)水平低于C、D期，同樣在浸潤至漿膜層以外的表達(dá)高于黏膜層和肌層，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小≥5cm的VEGF表達(dá)也明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小＜5cm的患者。證實(shí)VEGF表達(dá)與腫瘤生長、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。與文獻(xiàn)報(bào)道相似［4］。

本研究患者均獲得了3年隨訪，死亡5例。將術(shù)后血清VEGF平均值257.4mg/L作為劃分高低VEGF水平的分界值，并觀察術(shù)前術(shù)后以此為分界的3年生存情況。結(jié)果顯示術(shù)前血清VEGF低、高表達(dá)的3年生存率為分別為90.9%和78.9%，術(shù)后血清VEGF低、高表達(dá)的3年生存率為分別為85.7%和81.3%。表明術(shù)前血清VEGF的檢測(cè)對(duì)于直腸癌的遠(yuǎn)期預(yù)后具有判斷價(jià)值。術(shù)后低表達(dá)的3年生存率雖高于高表達(dá)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，造成這種現(xiàn)象的原因可能是由于樣本偏小，尚不能據(jù)此得出科學(xué)的結(jié)論。因此，筆者認(rèn)為術(shù)前血清VEGF的檢測(cè)對(duì)于直腸癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后具有重要意義，術(shù)后血清VEGF的檢測(cè)對(duì)直腸癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后判斷價(jià)值不如術(shù)前血清VEGF的檢測(cè)。

［1］FOLKMAN J.Tumor angiogenesis theraPeuitc imPlication［J］.N Engl J Med，1971，285（21）：1182-1186.

［2］陳中皓，王學(xué)志，徐銘，等.Survivin、MMP-2、nm23-H1、VEGF及其受體Flt-1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義［J］.中國癌癥雜志，2011，21（4）：290-293.

［3］陳琳，侯梅，吳琦，等.結(jié)直腸癌組織P53、ToPoⅡ、VEGF的表達(dá)及臨床意義［J］.中國基層醫(yī)藥，2011，18（18）：2547-2548.

［4］趙增仁，張麗靜，李芳，等.結(jié)直腸癌組織中VEGF、PINCH mRNA的表達(dá)變化及意義［J］.山東醫(yī)藥，2010，50（22）：19-21.

（本文編輯：劉斯靜）

R735.37

B

1007-3205（2012）05-0562-02

2011-12-22；

2012-03-05

盧明挺（1971-），男，浙江臺(tái)州人，浙江省臺(tái)州市黃巖區(qū)院橋中心衛(wèi)生院主治醫(yī)師，從事普通外科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.05.026