RP-H PLC測定注射用鹽酸萬古霉素的含量

莊權(quán)權(quán)

（福建省泉州市第一醫(yī)院藥劑科，福建 泉州 362000）

RP-H PLC測定注射用鹽酸萬古霉素的含量

莊權(quán)權(quán)

（福建省泉州市第一醫(yī)院藥劑科，福建 泉州 362000）

目的：用反向高效液相色譜法測定注射用鹽酸萬古霉素的含量。方法：色譜柱為Shim-pack VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm)，以0.025 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液-甲醇（80∶20）為流動(dòng)相，檢測波長為230 nm，流速0.7 mL/min，柱溫40℃。結(jié)果：在5～80 mg/L范圍內(nèi)，萬古霉素濃度與峰面積的線性關(guān)系良好（r=0.999 9），高、中、低3種濃度的加樣回收率為98.65%～101.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)差為0.10%～0.98%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、簡便，適用于注射用鹽酸萬古霉素的質(zhì)量控制。

反向高效液相色譜法；注射用鹽酸萬古霉素；含量測定

萬古霉素是一種糖肽類抗生素，對各種革蘭陽性菌（包括球菌與桿菌)均具有強(qiáng)大抗菌作用，特別是用于治療耐藥葡萄球菌敏感性強(qiáng)，效果顯著，經(jīng)濟(jì)、安全[1]。其作用機(jī)制是以高親和力結(jié)合到敏感細(xì)菌細(xì)胞壁細(xì)胞前體肽聚末端的丙氨酸，阻斷構(gòu)成細(xì)菌細(xì)胞壁的高分子肽聚糖合成，導(dǎo)致細(xì)胞壁缺損而殺滅細(xì)菌。此外，也可能是通過改變細(xì)菌細(xì)胞膜滲透性，并選擇性地抑制其RNA的合成[2]。萬古霉素抗菌譜窄，抗菌活性強(qiáng)，療效確鑿，屬殺菌劑?？诜灰孜?，主要分布于血漿，可透入各體腔和胎兒體內(nèi)，但不易進(jìn)入房水，很少在體內(nèi)代謝，主要通過腎臟排泄，血液透析和腹膜透析不能清除此類藥物。萬古霉素對革蘭陽性球菌（腸球菌除外），敏感的陽性桿菌及厭氧陽性球菌和陽性桿菌均呈殺菌作用。萬古霉素對腸球菌呈抑菌作用，對腸球菌需在氨基糖苷類抗生素協(xié)同作用下才呈殺菌作用[3]。

近年來萬古霉素不良反應(yīng)屢有報(bào)道,如休克、過敏樣癥狀、急性腎衰、粒細(xì)胞減少等[4-7]。對重癥病人、長期使用本藥的患者、低出生體重兒、新生兒和幼兒與可引起腎、聽力損害的藥物（氨基糖苷類抗生素等）聯(lián)合用藥的患者應(yīng)控制其血藥濃度[8]。本研究建立了反相高效液相色譜法（RPHPLC）測定注射用鹽酸萬古霉素含量的方法。該法簡便、準(zhǔn)確，適用于注射用鹽酸萬古霉素的質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC-20A液相色譜儀 （日本島津公司）；LC-solution色譜工作站 （日本島津公司）；SPD-10AVP紫外檢測器 （日本島津公司）；CP225D型電子天平（德國賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；KO-100DB超聲波清洗機(jī) (昆山市超聲儀器有限公司)；Simplicity超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

萬古霉素對照品（原中國藥品生物制品檢定所，規(guī)格：100 mg，批號：0360-200301）；注射用鹽酸萬古霉素 （Eli Lilly Japan K.K，規(guī)格：0.5 g，批號：MW19231）；甲醇為色譜醇；水為重蒸餾水；磷酸二氫鉀等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)[9]

色譜柱為Shim-pack VP-ODS C18（250 mm× 4.6 mm）；流動(dòng)相為0.025 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液 -甲醇（80∶20），檢測波長為 230 nm，流速0.7 mL/min，柱溫40℃，進(jìn)樣量：20 μL。在此色譜條件下，對照品和樣品中萬古霉素與其相鄰色譜峰的分離度均 ＞1.5，理論半數(shù)（n）按萬古霉素峰計(jì)算不低于2 000。供試品、對照品及空白輔料色譜圖分別見圖1～3。

圖1 萬古霉素對照品、供試品及空白輔料RP-HPLCA萬古霉素對照品；B萬古霉素供試品；C空白輔料

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取萬古霉素對照品約10 mg，置25 mL量瓶中，加10 mL雙蒸水溶解后，再加磷酸二氫鉀緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取0.5 g注射用鹽酸萬古霉素，精密稱定，置25 mL量瓶中，加 10 mL雙蒸水溶解后，再加磷酸二氫鉀緩沖液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

取萬古霉素對照品適量，精密稱定，用磷酸二氫鉀緩沖液溶解制備成 5、10、20、40、80 mg/L系列濃度溶液，按上述色譜條件，進(jìn)行含量測定。以峰面積(Y)對溶液濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程

Y=（1.955 96 e－0.05）X＋（－10.141 8）r=0.999 9；結(jié)果表明：在5～80 mg/L范圍內(nèi)，萬古霉素濃度與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取萬古霉素對照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相制成含萬古霉素5、20、80 mg/L的溶液，分別精密吸取20 μL注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次。精密度試驗(yàn)RSD=0.53%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按1.4項(xiàng)方法制備樣品溶液，分別于0、0.5、1、2、4 h取樣，精密量取20 μL注入液相色譜儀測定。穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD=1.10%，說明萬古霉素在4 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

按1.5項(xiàng)方法平行制備6份同一樣品溶液測定含量。重復(fù)性試驗(yàn)RSD=0.97%，說明本法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

于空白輔料中，按處方量加入萬古霉素對照品適量，用流動(dòng)相制成低、中、高3種濃度萬古霉素溶液（分別為5、20、80 mg/L），按外標(biāo)法分別測定并計(jì)算回收率及RSD。結(jié)果萬古霉素回收率均在95.0%～105.0%之間，RSD=0.99%表明本方法的回收率良好。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

3 討論

3.1 對于波長的選擇，中國藥典采用 280 nm檢測。本研究取萬古霉素對照品適量，加流動(dòng)相溶解后，進(jìn)行紫外掃描（200～400 nm），發(fā)現(xiàn)萬古霉素在230和280 nm處檢測出色譜峰基本一致，但是空白對照試驗(yàn)表明，溶劑在230 nm波長處有極弱吸收，且保留時(shí)間短，不干擾主要成分和有關(guān)物質(zhì)的檢查，故選擇230 nm為檢測波長。

3.2 在實(shí)驗(yàn)過程中，選擇1.0 mL/min流速時(shí)，液相色譜儀器柱壓達(dá)4 MPa，影響色譜柱使用壽命，低流速又影響出峰時(shí)間，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)比較，確定流速為0.7 mL/min。

3.3 柱溫高低影響萬古霉素的出峰時(shí)間。柱溫升高，出峰時(shí)間加快；同時(shí)柱溫過高又影響柱子使用壽命。通過實(shí)驗(yàn)，確定柱溫為40℃，此條件不影響萬古霉素分離度。

3.4 實(shí)驗(yàn)表明，pH值及鹽濃度對萬古霉素的峰位及柱效有一定的影響，但對雜質(zhì)檢出及改善峰對稱性影響不大。同時(shí)由于高濃度的鹽對柱效損耗較大，經(jīng)過多次摸索和比較，發(fā)現(xiàn)以0.025 mol/L磷酸二氫鉀溶液∶甲醇（80∶20）為流動(dòng)相峰型好，柱效高，各峰之間分離較好，故選此作為流動(dòng)相。

3.5 萬古霉素注射液在4 h之內(nèi)穩(wěn)定性良好，建議醫(yī)護(hù)人員現(xiàn)配現(xiàn)用，以避免其降解，影響用藥安全。

本研究結(jié)果表明反相高效液相色譜法準(zhǔn)確、簡便，適用于注射用鹽酸萬古霉素的質(zhì)量控制。

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Content Determination of Vancomycin Hydrochloride for Injection by RP-HPLC

Zhuang Quanquan（Pharmacy Department of the First Hospital of Quanzhou City of Fujian Province,Fujian Quanzhou362000，China）

Objective:To determine the content of vancomycin hydrochloride for injection by RP-HPLC.Methods:Shim-pack VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm)was used,the mobile phase consisted of 0.025mol/L KaH2PO4-methanol(80∶20)，the detection wavelength was at 230 nm,the flow rate was 0.7 mL/min and the column temperature was at 40℃.Results:There was a good linear relationship(r=0.999 9) within the range of 5～80 mg/L for vancomycin,the average recovery was from 98.65%to 101.7%for three different concentrations of vancomycin,and the relative standard deviation was from 0.10%to 0.98%. Conclusion:This method is simple,accurate and can be used for the content determination and the quality control of vancomycin hydrochloride for injection.

RP-HPLC；Vancomycin Hydrochloride for Injection；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2012.03.004

2011-06-14）

莊權(quán)權(quán)，男，碩士，藥師。研究方向：臨床藥學(xué)。E-mail：ansen09@hotmail.com