硫黃熏蒸對當(dāng)歸中阿魏酸含量的影響

姜麗楠，趙海霞，田 林

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟南 250355;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟南 250011)

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便等功效，主產(chǎn)于甘肅，并在甘肅、云南、四川、湖北等地形成道地產(chǎn)區(qū)［1］。當(dāng)歸含有多種化學(xué)成分，其中阿魏酸是其活性成分之一。具有抗腫瘤、抗突變［2］、抗氧化、清除自由基、細胞保護［2，3］、抗血小板凝集和血栓［4］、抗變態(tài)反應(yīng)［5］等作用。

1 材料

1.1 試藥 阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110773－201012)，乙腈，甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，硫黃(藥用硫黃，山東信通化工有限公司)，當(dāng)歸購于甘肅岷縣，經(jīng)張學(xué)順教授鑒定為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。

1.2 儀器 HPLC色譜儀(美國 Waters2996PAD、717Plus、600Controller)、AE200型250g電子天平(美國)、CP2250型電子分析天平(奧豪斯國際貿(mào)易有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備 對照品溶液的制備:取阿魏酸對照品適量，精密稱定，加70%甲醇25mL制成含阿魏酸161.60 μg·mL－1的溶液，即得。

供試品溶液的制備:取本品粉末(過3號篩)，約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇20mL，密塞，稱定，超聲處理40min，密塞，稱定，超聲40min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續(xù)濾液，置25mL容量瓶中，加入70%甲醇至刻度，即得。

2.2 色譜條件 XB －C18色譜柱(4.6mm ×250mm，5μm)，流動相為乙腈－0.085%磷酸溶液(17∶83)，檢測波長316 nm，柱溫35 ℃，流速1.0mL·min－1，進樣量10μL 理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于5000。對照品和樣品的HPLC圖(見圖1)。

圖1 阿魏酸HPLC圖譜

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取對照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL 于 25mL 量瓶中，加 70% 甲醇至刻度，對照品質(zhì)量濃度分別為 3.232，6.464，12.93，19.39，25.86，32.32 μg·mL－1。進樣量為 10μL，以質(zhì)量濃度對峰面積積分值回歸計算，結(jié)果表明各熏蒸品中阿魏酸含量在3.232～32.32 μg·mL－1線性關(guān)系良好，回歸方程為 Y=53835X －57496(r=0.9999)。

2.4 精密度試驗 精密吸取未熏蒸當(dāng)歸供試品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，記錄阿魏酸峰面積，結(jié)果其RSD為1.00%。

2.5 穩(wěn)定性試驗 精密吸取未熏蒸當(dāng)歸供試品溶液10μL，每隔1 h進樣一次，記錄阿魏酸的峰面積，結(jié)果其RSD為1.28%。結(jié)果表明供試品溶液在5 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重現(xiàn)性試驗 精密稱取同一熏蒸工藝的樣品5份，制備供試品溶液，分別進樣10μL，按外標(biāo)法計算阿魏酸的質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果RSD為0.92%。

2.7 回收率試驗 精密稱取當(dāng)歸粉末約0.5 g，平行5份，分別精密添加阿魏酸對照品約0.5mg，制備供試品溶液，進樣測定，計算回收率，結(jié)果平均回收率為98.56%，RSD為2.16%，見表 1。

表1 硫黃熏蒸當(dāng)歸中阿魏酸的加樣回收試驗

3 熏蒸工藝研究

3.1 樣品的制備［6］采用有機玻璃材料自制熏箱，熏箱內(nèi)容積0.04 m3，內(nèi)設(shè)一層網(wǎng)狀隔板，熏箱頂部和底部各開一窗口，并且在4個側(cè)面共留8小孔。試驗時將500g當(dāng)歸均勻擺放于網(wǎng)狀隔板上，稱取規(guī)定量藥用硫黃置于搪瓷盤中，并放入熏箱底部，點燃硫黃，關(guān)閉熏箱門，待硫黃形成明顯藍色火焰時，用膠帶將熏箱門封閉。熏至規(guī)定時間后，開啟并且將8個小孔打開，抽氣1 h，最后開啟熏箱門。

3.2 正交試驗法優(yōu)選 選用L9(34)試驗設(shè)計，以阿魏酸為指標(biāo)，結(jié)合實際生產(chǎn)，選擇、硫黃用量(A)、熏蒸時間(B)、熏蒸次數(shù)(C)、抽風(fēng)排氣時間(D)作為考察因素。各因素水平見表 2，結(jié)果見表 3，4。

表2 因素水平

表3 正交試驗結(jié)果

表4 方差分析

結(jié)果表明，因素A和B對硫黃熏蒸當(dāng)歸后阿魏酸有顯著影響，因素C無顯著影響，并確定當(dāng)歸經(jīng)硫黃熏蒸的最佳工藝為硫黃用量100g·cm－3，熏蒸1次，每次2 h。

3.3 驗證試驗 取當(dāng)歸飲片3批，各250g，按優(yōu)選出的熏蒸工藝條件進行熏蒸，并測定阿魏酸的質(zhì)量分數(shù)，分別為0.05278%，0.05261%，0.05243%。表明優(yōu)選的工藝條件穩(wěn)定可行。

4 討論

硫黃熏蒸對當(dāng)歸中阿魏酸的含量有一定的影響，且隨著硫黃用量增加、熏蒸時間延長、次數(shù)增加而呈減少的趨勢。硫黃熏蒸是中藥的養(yǎng)護方法之一。當(dāng)歸經(jīng)硫黃熏蒸后，外觀美白光亮、利于干燥、防腐、防霉、防蛀蟲，能夠有效延長貯存保質(zhì)的時間。但當(dāng)歸經(jīng)硫黃熏蒸后不僅對其有效成分有影響，其二氧化硫殘留量及重金屬都易產(chǎn)生。

綜上所述，當(dāng)歸熏硫弊多利少，因此既能保持當(dāng)歸較好的外觀，又能保證其質(zhì)量及用藥安全，新的加工工藝勢在必行。

［1］孫紅梅，張本剛，齊耀東，等.當(dāng)歸藥材資源調(diào)查與分析［J］.中國農(nóng)學(xué)通報，2009，25(23):437 －441.

［2］Kawabata K，Yamamoto T，Hara A，et al.Modifying effects of ferulic acid on azoxymethane－induced colon carcinogenesis in F344 rats［J］.Cancer Lett，2000，157(1):15 －21.

［3］Ogiwara T，Satoh K，Kadoma Y，et al.Radical scavenging activity and cytotoxicity of ferulic acid［J］.Anticancer Res，2002，22(5):2711 －2717.

［4］黃豐陽，徐秋萍.中藥有效成分的抗血小板作用研究進展［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，1999，22(2):28－31.

［5］劉穎.淺議當(dāng)歸的化學(xué)成分與臨床藥理作用［J］.中國醫(yī)藥指南，2010，8(27):51 －53.

［6］趙海霞，劉偉.硫黃熏蒸對山藥中尿囊素的影響［J］.中草藥，2009，40(6):903 －904.