丹酚酸B對小鼠的急性毒性試驗

凌 真，董登存，李倚云，聞琍毓

(揚州藥品檢驗所，江蘇 揚州 225009)

丹參(Salvia miltiorrhiza Bge.)為唇形科鼠尾草屬植物干燥的根及根莖，具有活血調經、祛瘀止痛、涼血消癰、清心除煩和養血安神的功效，現代藥理學研究表明，丹參具有抗心肌缺血、腦缺血、血栓，改善微循環、促進組織再生及抗菌、抗炎等作用［1］。丹參的有效成分主要分為水溶性和脂溶性，其中水溶性成分中活性較強的有丹酚酸B，是目前研究較多的丹參活性成分之一［2～5］。

目前，對于丹酚酸B的毒性研究方面的文章還較少，本文采用一次性尾靜脈注射的方法，考察丹酚酸B對小鼠的急性毒性作用，為后續研究作參考。

1 試驗材料

1.1 受試物 丹酚酸 B原料，批號:110620，含量:99.4%，淺黃褐色粉末，由上海醫藥工業研究院提供。臨用前用0.9%的氯化鈉注射液配制至所需濃度。

1.2 試驗動物 清潔級ICR小鼠(由揚州大學比較醫學中心提供，生產許可證號:SCXK(蘇)2007－0001)，體重18～21 g，數量70只，雌雄各半;小鼠雌雄分開飼養于屏障環境內(使用許可證號:SYXK(蘇)2009－0006)，飼喂小鼠配合飼料(購自南京安立默科技有限公司)，自由飲水和攝食。

1.3 儀器與試劑 CP225D電子分析天平(賽多利斯，德國)，1mL一次性醫用注射器(江陰市醫療器械有限公司)，0.9%的氯化鈉注射液(江蘇亞邦藥業集團股份有限公司)。

2 方法與結果

2.1 預試驗 探索丹酚酸B原料溶液對小鼠尾靜脈注射給藥的100%致死量(LD100)和0%致死量(LD0)。結果為丹酚酸B原料溶液的100%致死量為800mg·kg－1，0%致死量為500mg·kg－1。

2.2 正式試驗 用丹酚酸B原料溶液作為供試液，按改良寇氏法［6］進行LD50的測定。根據預實驗的結果確定正式實驗，分為生理鹽水對照組和6個劑量組，為500、540、570、600、700和750mg·kg－1。實驗動物隨機分為七組，每組10只，雌雄各半，根據預試驗的結果設計給藥劑量，分組。

根據《中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則》(以下簡稱《指導原則》)，給藥前，小鼠禁食12 h，自由飲水。實驗采用尾靜脈單次注射給藥方式給藥，給藥容積為20mL·kg－1，給藥時間在30 s完成。4 h內嚴密觀察，第2天起，每天觀察2次，連續觀察14 d，隔天稱量動物體重，記錄動物的飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、毒性反應和死亡情況。對瀕死及死亡動物進行大體解剖，其他動物在觀察期結束后進行大體解剖，肉眼觀察主要臟器的改變。統計各組小鼠的死亡數，計算LD50值和95%的可信限。

2.3 毒性反應 給藥后，部分小鼠在20～30 s即出現活動減少、呼吸急促、抽搐、震顫等癥，在注射30 s～2min內死亡，極個別動物在1～24 h內出現死亡。將死亡小鼠進行解剖，肉眼觀察小鼠的心、肝、脾、肺、腎等臟器，均未見異常改變。其余小鼠先出現活動減少、呼吸急促等現象，但持續幾十秒至1 h后恢復。觀察14 d后，除750mg·kg－1組外，各劑量組存活動物體重均有增長，并與生理鹽水組基本一致，實驗結束后，存活小鼠頸椎脫臼處死，立即剖檢尸體，肉眼觀察小鼠的心、肝、脾、肺、腎等臟器，均未見異常改變;750mg·kg－1組的僅存活一只動物，體重增加較大，腹腔有部分積液，可能為體重增長較多的原因(見表1)。

表1 丹酚酸B靜脈注射小鼠的體重變化

2.4 LD50及LD50的95%可信限 根據動物死亡數，用Bliss法計算半數致死量，LD50=636.8909mg·kg－1，LD50的 95%可信限為:617.2255 ～657.1828mg·kg－1(見表2)。

3 結論與討論

丹參是臨床防治動脈粥樣硬化(AS)的常用藥物，含有多種有效成分，丹酚酸B是其多種有效成分中的一種，具有很強的抗氧化作用，是目前已知的抗氧化作用最強的天然產物之一，對心、腦、肝、腎等器官均具有重要的藥理作用，是目前研究較多的丹酚酸有效成分。

表2 Bliss法計算LD50值

關于丹酚酸B的急性毒性試驗結果未見文獻報道，對丹酚酸B的毒性研究也較少。本文對丹酚酸B進行了急性毒性試驗，結果表明，實驗小鼠尾靜脈注射過量的丹酚酸B后會出現一定的中毒現象，其半數致死量為636.8909mg·kg－1，LD50的 95% 可信限為 617.2255 ～ 657.1828mg·kg－1。生存的小鼠體重增加與生理鹽水組基本相同，將存活小鼠處死后，肉眼觀察未見主要臟器病理改變。以上結果顯示，丹酚酸B的毒性較低，臨床應用比較安全。

由于對丹酚酸B的毒性研究未見報道，本文對丹酚酸B的急性毒性做了初步的研究，對丹酚酸B的進一步研究、開發和臨床的安全應用提供一定的參考。

［1］王蓉，愿永芳.丹酚酸B藥理作用的研究概況［J］.中醫藥導報，2011，17(4):130 －132.

［2］汪蕓.丹酚酸B對心腦血管疾病藥理作用的研究進展［J］.現代中西醫結合雜志，2010，19(35):4634 －4637.

［3］林治榮，陳程，田登科，等.丹酚酸A與丹酚酸B抗大鼠心肌缺血再灌注損傷的比較研究［J］.時珍國醫國藥，2011，22(2):412 －414.

［4］Han X，Liu JX，LI XZ.Salvianolic acid B inhibits autophagy and protects starving cardiac myocytes［J］.Acta Pharmacol Sin，2011，32(1):38 －44.

［5］姜希娟，趙桂峰，盧斌，等.丹參單體對TNF－α誘導大鼠動脈平滑肌細胞MCP－1和IL－1β的影響［J］.中華現代中醫學雜志，2006，2(7):583 －586.

［6］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學［M］.第2版.北京:人民衛生出版社，1991:201.