農藥對克氏原螯蝦消化酶活性的影響

材料與方法

試驗螯蝦與試驗設計

選取活潑健壯的螯蝦個體作為實驗材料，體重約20g重量差為0.2g。選用37個1m2的水泥池分為12個試驗組別，每組3個水泥池，另外一個水池作為對照組，水深約10㎝，模擬稻田養殖環境，每池放入一定量小浮萍，水花生，水池角落放入適量泥土，每池放入蝦15～20只，試驗10天，依次向試驗組⑴～⑿水池投入阿維菌素（殺蟲劑）、稻散·毒死蜱（殺蟲劑）、噻嗉酮異丙威（殺蟲劑）、芐·丁(除草劑)、芐·乙 (除草劑)、氯吡·甲磺隆(除草劑)、甲霜·惡毒靈(殺菌劑)、使百克(殺菌劑)、井岡·烯唑醇 (殺菌劑)、莊豐(生長劑)、甲天下衛士(生長劑)、天豐素(生長劑)。

試驗農藥用量

芐乙施用濃度為：0.05g/m2，芐丁施用濃度為：0.15g/ m2，氯吡·甲磺隆的施用濃度為： 20.03ml/ m2，井岡-稀唑醇施用濃度為：0.1507g/ m2 ，使百克施用濃度為：0.1530g/ m2，甲霜-噁霉靈施用濃度為：0.9990 g/ m2 ，莊豐施用濃度為：0.4620g/ m2， 甲天下衛士的施用濃度為：0.2738g/m2，天豐素的施用濃度為：0.6522g/ m2，阿維菌素的施用濃度為：0.0210ml/ m2，稻散·毒死蜱的施用濃度為：0.5ml/ m2， 噻嗉酮異丙威的施用濃度為：0.05g/ m2。

樣品制備

每池取三只螯蝦，在冰盤中活體解剖 ，剔除附著物，然后剖開， 取出全部肝胰臟、胃和腸道，用生理鹽水清洗胃和腸道內容物，濾紙吸干表面水分后分別稱重。將肝胰臟、胃和腸道樣本稱重，然后剪碎，加入5倍體積(w/v)的預冷雙蒸水(4℃)，低溫條件下使用玻璃勻漿器制成勻漿后，勻漿液用高速冷凍離心機4500r/min ，4℃離心15 min；取上清液(即粗酶液)，用于測定蛋白酶、淀粉酶活力 (4℃保存， 24h內測定完畢，或短期保存于-18℃低溫冰箱)。

消化酶測定

測定持續10d。隔天測一次，每次每池隨機取3只蝦。取蝦時間上午10點。

蛋白酶活力測定:采用酪蛋白為底物的福林—酚試劑顯色法。蛋白酶活性定義為:在一定的pH和溫度下，每min水解酪蛋白產生1€%eg酪氨酸為1個酶活力單位(€%eg/min)。

淀粉酶活力測定：采用淀粉—碘法，淀粉酶活性定義為：在37℃、30min和100mL酶液中的淀粉酶能完全水解淀粉10mg時為一個淀粉酶活力單位(€%eg/min)。

結果與分析

農藥對克氏原螯蝦毒性的影響

由于幾個殺蟲劑大多有軟殼現象，所以殺蟲劑應該會造成蝦軟殼。2號池稻散·毒死蜱和8號池 使百克經解剖發現肝臟變為淡綠色或褐色，是由于農藥的施用對其造成了毒性影響。。施藥當天偶爾下小雨，第2天多云，第3天小雨，后都是晴天，對消化酶活性有一定影像。

農藥的持續時間對克氏原螯蝦消化酶活性的影響

克氏原螯蝦施用十二種農藥后，可以看出芐乙對蛋白酶的影響是相當大的并且殘留時間相對較長，且對蛋白酶是有抑制作用，效果比較穩定；氯吡·甲磺隆對淀粉酶的影響比較大，在藥物施用后很快的會抑制淀粉霉的活性，殘留時間較長；噻嗪酮對蛋白霉的活性影響非常大，下藥后蛋白活性馬上升高超常，達到60ug/min€?05之后又在3天內驟然下降到21ug/min€?05，這個過程可能會造成蝦大量死亡；井岡-稀唑醇在4天內會使蛋白酶上升到一個最高點然后有會在2天內急劇下降到標準活性，這6天中可能會造成蝦大量死亡；使百克施用后會使蛋白酶降低到10ug/min€?05隨后有個緩慢上升下降的過程總體上對蝦的影響不大；甲霜-噁霉靈藥物使用后蛋白酶活性會急劇上升到一個至高點有會在4天內下降到標準活性，后期比較平穩。井岡-稀唑醇會導致淀粉酶很不穩定并在第6天會使淀粉酶降低到300um/min，而且這個低谷會持續4天以上，對蝦的生長影響較大；使百克前期變化不明顯到第6天后蛋白酶活性才會有逐漸下降反應，這一期間蝦有充分的適應時間；甲霜-噁霉靈對蝦淀粉酶的響相當大，施用藥物后馬上會是淀粉酶活性上升到800ug/min，隨后4天內有降低到300ug/min，之后抑制在300ug/min-500ug/min起伏，影響蝦的生長，嚴重時會造成大量死亡。莊豐對蛋白酶的影響是最大的但是其上升下降時間相對較長，蝦有充分的適應時間，不會造成大量死亡現象；另兩種藥物波動幅度不大，且緩沖時間長，對蝦的影響不大。滴滴神與莊豐對蝦淀粉酶的影響相當大，施藥后就會使淀粉酶活性降低到200um/min左右，其后兩天內又急劇上升到700um/min，應急反應可能會造成蝦大量死亡；田豐素基本無影響。

討論

從實驗結果來看，殺蟲劑與其他農藥差異顯著，毒性較大，對生長劑較敏感，但影響不大，說明其毒性較小，而有些農藥一般在3d才開始急劇下降或上升，故克氏原鰲蝦對其具有一定的耐受性。其呈現不同的規律，表明農藥在克氏原鰲蝦體內的分布、激活和解毒等過程比較復雜，同一種蝦對于不同農藥的敏感性各不相同，不同農藥的持續時間對消化酶的活性的影響也各不相同。最后結果：不同蝦由于生理條件不同，對同一種農藥的敏感性各不相同，同一種農藥對不同蝦和同種蝦的不同發育階段的毒性也布相一致。因此，在稻田養蝦里對水稻用藥防治病蟲要嚴格掌握藥物品種、濃度和使用方法， 才能增加養蝦產量。

（作者單位：長江大學動物科學學院）