茅梅提取物對肝損傷保護作用的研究

宋志遠,孔 棣，宋書輝，劉 斌

(1.天津中醫藥大學，天津 300073;2.天津市南開醫院，天津 300100)

茅梅rubusparvifolius為薔薇科懸鉤子屬植物，落葉小灌木，資源豐富，分布于河北、山西、陜西、四川及華東各省區[1]。茅梅是一種傳統民間中藥，據醫學古籍《本草拾遺》記載，該植物具有“止血活血、散瘀定痛、清熱解毒之功效，可內服、外敷”[2]。現代藥理學研究[2]表明，茅梅具有止血、抗血栓形成、抗心肌缺血、抗菌、抗腦缺血等作用。其化學成分包含黃酮苷、糖類、酚類等多種成分。本文主要對茅梅提取物對肝損傷的檢測指標及病理學改變的影響進行研究。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 大鼠50只,體質量(200±20) g，北京維通利華試驗動物技術有限公司，動物合格證號SCXK(京)2007-0001。

1.2 藥物與試劑 茅梅醇提物(用50%乙醇提取配制成1 mL相當于生藥1 g)，由天津中醫藥大學實驗室制備；18a-甘草酸二銨(甘利欣)，江蘇正大天晴藥業股份有限公司，批號20091105；谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶 (ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉肽酶(GGT)臨床診斷試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所，批號20100122。

1.3 儀器 高速低溫離心機；JY92-2D型超聲波細胞粉碎機(寧波新芝科器研究所)。

2 實驗方法

2.1 方法 取40只大鼠，用40%的CCl4花生油溶液皮下注射，每日1次，給藥體積均為10 mL/kg，連續9 d；其后將小鼠隨機分為4組:模型組、甘利欣組(5 mL/kg)、茅梅醇提取物高劑量組(5 mL/kg)、茅梅醇提取低劑量組(2.5 mL/kg)，各組分別灌胃給藥，每日1次，連續9 d。

2.2 指標檢測 末次給藥后2 h摘眼球取血，靜置，3 000 r/min，離心15 min，取血清，低溫保存[3]。用自動生化分析儀測定血清生化指標的活性。采血后處死動物,立即解剖取肝臟進行病理檢查。

2.2.1 肝臟指標的變化 檢測血清中ALT、AST、ALP、GGT活性并記錄數據,檢測結果與模型組比較，見表1。

2.2.2 組織學檢查 取肝臟組織經石蠟切片、HE染色，進行病理學檢查，根據肝臟組織病變形態程度的差異，將其病變分為，-：正常；++：間質水腫，少量炎細胞浸潤；+++：間質水腫，大量炎細胞浸潤，細胞變性；++++：間質水腫，大量炎細胞浸潤，細胞變性，散在細胞壞死[5]，見表2。

3 結果

3.1 對CCl4花生油溶液所致肝損傷模型小鼠肝指標的影響 見表1。

3.2 對40%的CCl4花生油溶液所致肝損傷模型大鼠肝臟組織學的影響 模型對照組肝臟明顯增大，與組織黏連較重，部分組織表面可見暗紅色或灰白色片狀結節，組織切片可見間質水腫，大量炎細胞浸潤，細胞變性，散在細胞壞死。茅梅大、小劑量組肝臟體積輕度到中度增大，與周圍組織僅有輕度黏連;肝臟較柔軟，表面有光澤，但肝臟較正常組織有不同程度的腫脹;肝臟細胞間質充血、水腫、炎細胞浸潤及少量細胞變性，但與模型對照組比較差異均有統計學意義(P<0.05)，與甘利欣組比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表1 茅梅醇提取物對CCl4大鼠肝損傷的影響(±s，n=10) U/L

表2 茅梅醇提取物對CC14花生油溶液所致肝損傷模型大鼠肝臟組織學的影響(n=10)

4 討論

CCl4急性肝損傷模型是一種經典的實驗性肝損傷動物模型，此模型能準確反映肝細胞的功能、代謝及形態學變化，一直是篩選具有保肝降酶作用藥物的常用模型之一。肝損傷是由多種病因引起并且可以有多種因素參與的復雜過程。CCl4在體內對肝細胞親和力大，自由基的形成及引發的鏈式反應是CCl4損傷肝組織的主要機制[5]。一般認為CCl4損傷肝組織機制是CCl4經肝細胞色素P450代謝激活后生成三氯甲基自由基(·CCl)和氯自由基(·Cl)，引起生物膜脂質過氧化，當自由基增加到一定程度時，清除自由基的特異酶類的活性就降低，造成膜結構和功能損傷，蛋白質等物質合成代謝發生障礙，導致胞漿內轉氨酶滲入血液,肝細胞脂質過氧化或壞死[6]。這與病毒性肝炎的病理解剖、病理生理諸方面的改變和表現出來的癥狀及肝功能檢測的指標等方面具有相似性[7]。

茅梅前期的實驗研究和調查中就已顯示其具有較好的抗肝損傷的作用。本實驗結果亦顯示,1)茅梅提取物能明顯降低CCl4所致的肝損傷大鼠肝指數的升高(P<0.05)。因此茅梅具有明顯的抗肝損傷的作用，茅梅高劑量組的效果最好，低劑量組次之。2)推測其抗肝損傷的機制可能與茅梅能增強大鼠清除自由基、抑制自由基啟動的脂質過氧化反應、肝細胞受到自由基攻擊時可因其過度消耗而減少有關[8]。3)D-GalN可引起肝彌漫性壞死[9]，D-GalN是肝細胞的磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，它進入機體后與磷酸尿苷(UDP)結合，形成UDP-D-GalN,消耗體內的UDP，影響細胞器及酶生成物質核酸、糖蛋白、脂糖等的合成，使細胞器受損、膜損害，致肝細胞壞死[10]。試驗結果顯示，茅梅提取物能減輕D-GalN所致的肝損傷程度，可能是其具有促進體內尿嘧啶核苷酸的合成，拮抗D-GalN干擾的功能，從而起到保護肝臟的作用。

目前，茅梅的抗肝損傷作用尚未深入研究。本實驗對其進行的系統研究，將對開發茅梅成為新的抗肝損傷的藥物具有極大的參考價值。

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