協(xié)日音·湯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李郁英高鋼徐華

協(xié)日音·湯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李郁英1高鋼2徐華2

目的建立協(xié)日音·湯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法鑒別制劑中的苦地丁，采用高效液相色譜法測定處方中秦艽的成分龍膽苦苷。結(jié)果采用薄層色譜法鑒別制劑中的苦地丁；采用高效液相色譜法測定龍膽苦苷，在0.2104～0.7364μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=12838X+18492，r=1；平均加樣回收率為99.07%（N=9，RSD=0.98%）。結(jié)論方法可行，重現(xiàn)性好，能準(zhǔn)確監(jiān)控該制劑的質(zhì)量。

苦地丁，協(xié)日音·湯，龍膽苦苷

協(xié)日音·湯為蒙醫(yī)院常用的蒙藥制劑，由苦地丁、秦艽、麥冬等五味藥組成，治療由“協(xié)日”引起的各種黃疸病。為有效的控制該制劑的質(zhì)量，本試驗(yàn)采用TLC法對處方中的苦地丁進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC，以龍膽苦苷為定量指標(biāo)，建立處方中龍膽苦苷的測定方法。該標(biāo)準(zhǔn)操作簡單、方法可行，重現(xiàn)性好，能準(zhǔn)確監(jiān)控該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與材料

島津LC—10ATvp泵， SPD-10Avp型檢測器，島津工作站，惠普上分6010紫外分光光度儀。

苦地丁對照藥材(批號:990-9401)、龍膽苦苷（110770-200308，供含量測定用）：購自中國藥品生物制品檢定所。協(xié)日音.湯（批號：090512、090620、090726）由包頭市蒙中醫(yī)院提供；模擬樣（20091120）自制；甲醇為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 苦地丁薄層色譜鑒別

2.1.1 樣品溶液制備：取樣品5g，加丙酮30ml，超聲（150W，40KHZ）處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為樣品溶液。

2.1.2 陰性對照溶液的制備：取同工藝制備的不含苦地丁的樣品4.5g，加丙酮30ml，超聲（150W，40KHZ）處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為陰性對照溶液。

2.1.3 苦地丁對照藥材溶液的制備：取苦地丁藥材1g，加丙酮30ml，超聲（150W，40KHZ）處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.4 樣品測定：吸取上述3種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G簿層板上，以環(huán)己烷—丙酮（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。見圖1、2。

2.1.5 試驗(yàn)結(jié)果：在色譜中，樣品溶液在與苦地丁對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。而陰性對照溶液在此處未出現(xiàn)斑點(diǎn)；故此方法專屬性強(qiáng)，可作苦地丁的鑒別方法。

1 2 3 41、陰性對照溶液 2、樣品溶液（090726）3、苦地丁藥材 4、苦地丁對照藥材圖1 苦地丁薄層色譜鑒別方法學(xué)研究

1 2 3 4 51、模擬樣品 2、樣品（090726）3、樣品（090512）4、樣品（090620） 5、苦地丁對照藥材圖2 三批樣品的薄層色譜鑒別

2.2 龍膽苦苷的HPLC測定

2.2.1色譜條件:

2.2.1 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱[Agilent Tc-C18（5μ，4.6×250mm）]；流動相：甲醇—水（30：70）；檢測波長：254.0nm；柱溫：25℃；流速：1ml·min-1；理論板數(shù)按龍膽苦苷峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 提取溶劑及提取效率的考察

2.2.3 提取溶劑的選擇：參照《中國藥典》2005年版一部“秦艽”項(xiàng)下的龍膽苦苷含量測定方法，選用甲醇作為提取溶劑。

2.2.4 提取效率的考察：以甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲提?。üβ?00W,頻率50kHz），為保證被測成分提取完全，實(shí)驗(yàn)中考察了超聲提取20分鐘、30分鐘和40分鐘不同超聲提取時間對提取效率的影響， 結(jié)果：三份樣品分別超聲處理（功率300W，頻率50KHz）30、40、50分鐘后，含量基本一致。含量分別為1.055、1.104、1.099。

2.2.5 專屬性

2.2.5.1對照品溶液的制備：取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.5.2樣品溶液的制備：取樣品約2.5g，精密稱定，加入甲醇20ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液。

2.2.5.3陰性對照溶液制備：取同工藝制備的不含苦地丁的樣品約2.3g，精密稱定，加入甲醇20ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為陰性對照溶液。

2.2.5.4測定：分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、樣品溶液各10ul，分別注入液相色譜儀，測得結(jié)果為：陰性對照色譜圖中在與龍膽苦苷對照品以及供試品色譜圖相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分龍膽苦苷的測定無干擾。

2.2.6 線性關(guān)系考察：取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，精密量取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml，分別置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取10μl注入色譜儀測定。結(jié)果：在0.2104～0.7364μg濃度范圍內(nèi)，濃度與檢測峰面積呈線性。回歸方程為:Y=12838X+18492，r=1。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別在0h、4h、6h、8h、12h進(jìn)行測定，其檢測峰面積的RSD為0.41%，說明龍膽苦苷在12小時內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。

2.2.8 精密度：取樣品（批號：090512）6份，每份約2.5g，精密稱定，加入甲醇50ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液；另精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定。結(jié)果：6次測定的平均值為1.101mg/g，RSD為0.26%。

2.2.9 加樣回收率測定：取樣品（批號：090512，含量為1.101mg/g）約0.6g、0.7g、0.8g各3份，精密稱定，分別精密加入龍膽苦苷對照品，加入甲醇25ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液；另精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定。結(jié)果：平均回收率為 99.07%。RSD（%）為0.98%。

2.2.10 樣品含量測定：取樣品約2.5g，精密稱定，加入甲醇50ml，超聲（300W，40KHZ）處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液；另精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；分別精密吸取10ul，注入液相色譜儀，測定。結(jié)果見表2。

2.3 討論

在苦地丁的薄層色中，展開后立刻置紫外光燈（254nm）下檢視，斑點(diǎn)顯藍(lán)色，放置一定時間后顯黃色。參照中國藥典2005年版，采用HPLC法測定樣品中的龍膽苦苷；藥典的方法是對樣品進(jìn)行熱提取而本法采用超聲處理，經(jīng)兩種方法比較試驗(yàn)，測得結(jié)果基本一致。該方法操作簡單。

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1包頭醫(yī)學(xué)院職業(yè)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭014030

2包頭市藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古包頭014030