質譜法分析大腸癌組織中踝蛋白的磷酸化修飾

摘要：踝蛋白的磷酸化修飾，特別是腫瘤等病理條件下的踝蛋白磷酸化狀態，與腫瘤的發病、轉移機理密切相關。本研究采用鹽析、離子交換層析和電泳分離并純化了人大腸癌組織中的踝蛋白（Talin），經胰酶水解獲得其肽段混合物，進一步分別利用固定化Fe³⁺親和層析和TiO₂親和層析在酸性條件下對其中磷酸化修飾肽段進行吸附，并以1%氨水進行洗脫。在Michrom Magic C₁₈色譜柱上， 以A： 99%水+1%乙腈+0.1%甲酸和B： 99%乙腈+1%水+0.1%甲酸兩種流動相進行梯度洗脫分離，采用ESI質譜進行依賴數據的二級子離子掃描。結果顯示，固定化Fe³⁺富集到8個磷酸化肽段而TiO₂富集到9個磷酸化肽段。本研究提供了一種快速、準確地鑒定從人大腸癌組織中分離表征踝蛋白的方法。

關鍵詞：質譜；踝蛋白；大腸癌；磷酸化修飾