性反轉綜合征患者5例細胞和分子遺傳學檢測與分析

寧 玻，李 琳

（山東省臨沂市人民醫院1.男科，2.遺傳檢驗科 山東 臨沂 276003）

性反轉綜合征患者5例細胞和分子遺傳學檢測與分析

寧 玻1，李 琳*2

（山東省臨沂市人民醫院1.男科，2.遺傳檢驗科 山東 臨沂 276003）

性反轉綜合征；SRY；染色體；分析

性反轉綜合征（sex reverse syndrome）指染色體性別和性腺不一致的一類疾病,它包括46，XX男性和46，XY女性。這種性分化異常由決定性別的控制基因的異常所引起，表現為表型性別不能確定的中間性狀態，或表型性別與性腺性別或遺傳性別相矛盾的現象。我們通過對46，XX男性和46，XY女性患者的常規染色體檢查和SRY基因檢測，從遺傳學角度探討性反轉綜合征的發生機理。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2009年1月～2011年2月因不孕不育來我院就診患者5例。其中社會性別男性2例，女性3例。患者1：女，20歲，原發閉經。體檢：雙乳房發育TannerⅣ期，外陰幼稚，無陰毛，陰道深約4 cm。內分泌檢查：促黃體生成素18.06 mIu/mL（正常女性參考值1.1～11.6 mIu/mL），睪酮（T）：877 ng/dL（正常女性參考值63～120 ng/dL）。B超檢查未見子宮，雙卵巢未顯示。家族史：父母非近親婚配，母親月經規律，無異常生育史，無遺傳病家族史?；颊?：女，20歲，原發閉經。體檢：雙乳房發育TannerⅡ期，外陰發育一般，陰毛稀疏，陰道深約4 cm。內分泌檢查：雌二醇（E2）＜7.0 pg/mL（正常女性參考值24.5～1950 pg/mL），卵泡生成素（FSH）102.07 mIu/mL（正常女性參考值2.8～14.4 mIu/mL），促黃體生成素（LH）50.81 mIu/mL（正常女性參考值1.1～11.6 mIu/mL），其余內分泌指標在正常范圍。B超示：始基子宮，大小為：32 ×10×24mm，雙側卵巢顯示不清。家族史：父母非近親婚配，母親發育正常，月經規律，無異常生育史及家族遺傳史?；颊?：女，35歲，原發閉經。體檢，雙乳房發育TannerⅡ期，外陰女性，發育幼稚，無陰毛，陰道盲端。B超示：未見子宮，雙側卵巢未顯示。家族史：父母非近親婚配，母親發育正常，月經規律，無異常生育史及家族遺傳史?；颊?：男，26歲，結婚2年未育，精液檢查無精子。體檢：外陰男性，陰毛稀少，陰莖發育正常，雙側睪丸明顯小于正常，大小約為15 ×12 ×10mm，質堅韌，雙側附睪及輸精管均可觸及；內分泌檢查：T：60.5 ng/dL（正常男性參考值270～1732 ng/dL），FSH：21.28 U/L（正常男性參考值0.7～11.1 U/L）；LH：9.82 U/L（正常男性參考值0.8～7.6 U/L），其余內分泌指標在正常范圍。B超示：左側睪丸大小為：21mm×14mm×11mm，右側睪丸大小為：25 ×16×11mm。家族史：父母非近親婚配，兩個姐姐婚育生子無異常。患者5：男，24歲，結婚2年未育，精液檢查無精子。體檢：皮膚細膩，無胡須。外陰男性，陰莖發育正常，雙側睪丸小，質軟。雙側附睪及輸精管可觸及。內分泌檢查：T：81.77 ng/dL，FSH：25.32 U/L, LH：12.81 U/L。B超示：左側睪丸大小為：22 ×13 ×12mm，右側睪丸大小為：23 ×14 ×11mm。家族史：父母非近親婚配，兩個姐姐婚育生子無異常。

1.2 方法

1.2.1 細胞遺傳學檢查方法 常規外周血淋巴細胞培養、染色體制備、G、C顯帶分析，計數30個分裂相，鏡下分析3～5個核型，判斷患者染色體核型。

1.2.2 分子遺傳學檢查方法

1.2.2.1 外周血細胞DNA模板制備 取肝素抗凝血10 mL，裂解紅細胞，分離出白細胞經核酸裂解液和蛋白酶K處理，再以常規酚抽取法提取基因組DNA，用1×TE溶解DNA，置4℃保存。

1.2.2.2 S RY引物和P C R擴增 S RY引物序列P5′-CATGAACGCATTCATCGTGTGGTC-3′和m5′-CTGCGGGAAGCAAACTGCAATTCTT-3′擴增片段的長度為254 bp，PCR反應體積20 μL，含MgCl21.5mmoL、4種dNTP各200μmoL，單條引物60 ng、模板DNA100 ng，Taq酶1 U，反應液面以18 μL石臘油覆蓋。以93 ℃45 s，55℃45 s，72 ℃60 s為1個循環周期，擴增35個周期，最后72℃延伸5min，PCR產物以EB染色的2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，紫外燈觀察結果并照相記錄。

2 結果

本組病例1～3染色體結果為：46，XY，SRY結果均為陽性；病例4、5染色體結果為46，XX，SRY結果均為陽性。

3 討論

人類性別根據基因、細胞、器官和社會等不同層次可將其分為基因性別、染色體性別、性腺性別和社會性別。人類正常性發育包括性別決定和性別分化兩個階段。性別決定取決于含X或Y的精子與卵子的結合，性別其他差異則由性腺產生的激素或因子所引起的相應效應，是一系列基因按時間、空間序列表達、相互作用的結果。SRY基因突變、易位或缺失可導致發育異常[1]。

患者1～3社會性別為女性，染色體結果為46，XY，但她們沒有男性性征，是女性性反轉。SRY基因均為陽性，B超未發現卵巢、睪丸組織。考慮可能原因：（1）性腺組織條索狀；（2）體內既往曾經存在睪丸，表現為隱睪，已經萎縮；（3）SRY基因突變。目前發現有15%的46，XY女性性反轉患者有SRY基因突變[2]。有文獻報道，46，XY女性，SRY基因陽性患者發生性腺母細胞瘤比率高達10～20%[3]。因此對46，XY女性，SRY基因陽性患者經檢查未發現性腺，應嚴密隨診，必要時腹腔鏡探查、尋找性腺組織。

患者4、5，社會性別為男性，染色體結果為46，XX，SRY基因陽性，T水平低下，LH，FSH水平升高。兩患者均因不育就診，檢查無精子。46，XX男性性反轉患者根據SRY基因測定可分為SRY陽性及SRY陰性兩類。而患者的臨床癥狀也常表現出一定程度的異質性，SRY基因陽性的患者外生殖器發育多較正常[4]，在青春期前，無其他明顯陽性體征，但也有伴隨生殖器畸形病例報道[5]。本文中的兩患者性功能基本正常，陰莖勃起硬度可維持正常性交，但因不育就診，檢查發現無精子。目前46，XX 男性的發病機制還不明確，主要存在以下的假說[6-7]:（1）靶基因突變假說;（2）局限性Y染色體嵌合假說；（3）XP-YP易位假說。由于46，XX男性性反轉綜合征患者臨床癥狀表現不一，其發病機制可能不是單一的，所以臨床應根據常規體檢、內分泌檢查、染色體核型分析、SRY及其他基因檢測，明確診斷，根據患者對性功能或生育目的要求的不同，制定相應的治療措施。

總之，由于性別決定和分化過程的復雜性以及性反轉發生機制的多樣性，臨床表現的異質性，對性反轉患者在診斷上應進行染色體和SRY基因的常規分析，以明確患者性別異常的原因，指導合理治療，促進第二性征的發育，防止性腺惡變的發生。

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Exmination and analysis of cellular andmoLecular genetics in patients with sex reversal syndrome

NING Bo,LI Lin
(The people's Hospital of Linyi city Shandong province,Linyi,Shandong 276003,China)

Sex reversal syndrome; SRY; Chromosome;Analysis

R596.1

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2012.08.004.010.02

2012－03－05

山東省科技攻關計劃（2008GG10002063）。

寧 玻（1979－），男，山東煙臺人，主治醫師，主要從事男科工作。

*李 琳，Email：lilinxy1996@sina.com。

(本文編輯: 李新剛)