藥物流產后孕婦血漿中米非司酮濃度的監測Δ

車 敏，林 敏，黃以蘭，劉瓊珊，王 梅（福建省人口和計劃生育科學技術研究所，福州 350011）

米非司酮（Mifepristone）配伍米索前列醇終止早孕已為臨床廣泛應用[1]，同時也是計劃生育工作中一項簡單、有效的措施。由于其方法成功率高，具簡便、隱私性的特點，也常被一些育齡婦女用來作為私自終止妊娠的手段。采用高效液相色譜（HPLC）法檢測米非司酮的血藥濃度[2，3]，以及考察米非司酮的人體藥動學均有文獻報道[4]，但尚未見妊娠婦女藥物流產后體內米非司酮血藥濃度監測的相關文獻報道。本試驗建立的以正己烷與二氯甲烷萃取血漿中米非司酮的HPLC法，具有操作簡單、靈敏度高、實用性強等特點，適合基層計劃生育部門監測妊娠流產后孕婦血漿中米非司酮的濃度情況。

1 材料

1.1 儀器

1100 Series高效液相色譜儀，配置G1314A可變波長檢測器（美國Agilent公司）；XW-80A渦旋混合儀（上海滬西廠）；J2-21高速冷凍離心機（美國Beckman公司）；Sartorius電子天平（德國Sartorius公司）；KL512型氮吹儀（北京康林科技有限責任公司）。

1.2 試藥

米非司酮（Mifepristone，規格:每片25 mg，批號:43101104）、米索前列醇（Misoprostol，規格:每片0.2 mg，批號:43100204）均為北京紫竹藥業股份有限公司提供；米非司酮標準品（浙江仙居制藥廠，純度:99.8%）。甲醇、乙腈、正己烷、二氯甲烷為色譜純，試驗用水為去離子水。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱:Hypersil ODS（250 mm× 4.6 mm，5μm）；預柱:Hypersil ODS（1.0 mm×4 mm，5 μm）；流動相:甲醇-乙睛-水（42∶28∶30）；流速:1.0 mL·min－1；紫外檢測波長:302 nm。

2.2 標準貯備液的配置

準確稱取米非司酮標準品適量，以甲醇溶解定容制成50 mg·L－1的米非司酮標準貯備液。臨用時以甲醇稀釋成所需的系列標準溶液。

2.3 血漿樣品的處理

冷凍血漿在室溫下融化，渦旋混勻。取1.0 mL至離心管中，加入正己烷和二氯甲烷（7∶4）的混合液5 mL，振蕩，離心。吸取上清液，下層重復處理，合并上清液，用氮氣流吹干，殘渣加100 μL甲醇溶解，50 μL進樣。

2.4 受試者的選擇及試驗方案

本所計劃生育門診進行藥物流產的健康孕婦28例，年齡22～35歲，無肝、腎、血液方面疾病，無應用甾體避孕藥及宮內節育器既史往，月經規則，停經＜49 d，經妊娠試驗、婦科檢查和B超確診為早孕者，經陰道超聲證實為正常妊娠。簽署知情同意書，自愿接受試驗且同意接受觀察者，應便于隨訪。受試者口服米非司酮，早8點服2片，晚8點服1片，連服2 d，第3天早晨8點頓服米索前列醇3片，服藥前后禁食1 h。在服用米索前列醇6 h后，未見完整胎囊排出者行人工刮宮。所有受試者均在服藥前和胎囊排出后24、48、72 h時抽取靜脈血5 mL于肝素抗凝管中，靜置離心后分離血漿，冷凍保存待分析。

3 結果

3.1 專屬性試驗

本試驗條件下，空白血漿、米非司酮標準品血漿以及藥物流產后血漿樣品經HPLC法分析，色譜圖見圖1。由圖1可見，米非司酮峰形良好，保留時間為9.901 min，血漿中的雜質及米非司酮代謝產物均對其無干擾。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

3.2 線性關系及檢測限考察

精密吸取米非司酮標準貯備液適量，加入空白血漿1.0 mL，配制成濃度為5 000、2 000、1 000、500、100、50、20 μg·L－1的系列標準血漿溶液。按“2.3”項下方法處理并測定，記錄色譜。以樣品的色譜峰面積為定量依據，以待測樣品峰面積（A）為縱坐標，樣品濃度（c）為橫坐標，采用加權最小二乘法進行線性回歸計算（權重系數為1/c2），求得線性回歸方程為A＝6.067 3+0.558 2c（r＝0.998 3）。結果表明，米非司酮血藥濃度在20～5 000 μg·L－1范圍內線性關系良好。血漿中米非司酮的最低檢測限為10.0 μg·L－1（S/N＝3）。

3.3 回收率試驗

配制含米非司酮低、中、高質量濃度分別為50、500、2 000 μg·L－1的標準血漿溶液，按“2.3”項下方法操作及分析，將峰面積值代入標準曲線計算實測濃度，以實測量與加入量之比求算回收率，結果分別為（98.23±2.77）%、（102.25±3.46）%和（95.69±3.10）%。

3.4 精密度試驗

配制含米非司酮低、中、高質量濃度分別為50、500、2 000 μg·L－1的標準血漿溶液，按“2.3”項下方法操作，每種濃度各做5份樣品。將峰面積值代入標準曲線計算濃度，并求得日內和日間RSD，結果見表1。

表1 精密度及回收率試驗結果（n＝5）Tab 1 Results of precision and recovery test（n＝5）

3.5 受試者血藥濃度監測

受試者在胎囊排出后24、48、72 h時，所監測到的血漿中米非司酮濃度分別為（606.68±123.61）、（243.86±50.16）、（92.70±34.21）μg·L－1，藥-時曲線見圖2。服用米非司酮藥物流產前受試孕婦血漿中均未監測到米非司酮。

圖2 受試者胎囊排除后血漿中米非司酮藥-時曲線Fig 2 Plasma concentration-time curves of mifepristone in subject after discharging pregnant sac

4 討論

關于米非司酮的血藥濃度測定，國內文獻報道較多；血漿藥物萃取方法大都采用乙醚萃取、水層低溫凍結的方法[4]，操作具有一定的危險性和局限性。本試驗選擇正己烷和二氯甲烷的混合液萃取血漿中的米非司酮，方法簡便、迅速，定量分析線性關系良好，并能獲得較高的提取率。試驗過程選擇色譜級的正己烷和二氯甲烷，可使得樣品峰干凈無干擾。本研究建立的血漿中測定米非司酮的檢測方法，可監測到正常早孕婦女使用藥物流產，在胎囊排出72 h后血漿中米非司酮的量（（92.70±34.21）μg·L－1）。該方法專屬性好，適合基層計劃生育部門對非法使用米非司酮藥物流產后血漿中藥物濃度的監測。

在給予相同劑量米非司酮的前提下，代謝情況不同的早孕婦女可能會表現出不同的抗早孕效果。可能是由于血中的α-酸性糖蛋白水平的個體差異所引起的。因為米非司酮進入體內后大部分與α-酸性糖蛋白結合，在體內重新分布或存儲于組織中，或釋放游離的米非司酮。只有游離的米非司酮才通過細胞膜發揮生物效應，因而顯示有明顯的個體間藥效學和血藥濃度差異[5]。

臨床上終止妊娠首選米非司酮配伍米索前列醇法。由于受到傳統的重男輕女思想的影響以及性別鑒定技術的不斷提高，非法進行胎兒性別鑒定、濫用米非司酮類藥物及人為造成點滴出血流產現象、胎死腹中等情況要求流產、引產的事件時有發生，也給計劃生育執法工作造成困難。本研究擬建立一種較簡便、安全的血樣提取方法和HPLC條件，對基層計劃生育工作中一些疑似使用米非司酮成分的孕產婦要求終止妊娠或生產死胎的情況，對其血樣進行色譜判斷、定性分析，提供科學的診斷依據。

[1]宋淑華.米非司酮在婦產科的應用[J].天津中醫學院學報，2005，24（3）:175.

[2]高 晨，趙志剛，王 越，等.晚期妊娠引產產婦及其新生兒血漿中的米非司酮濃度測定[J].藥物分析雜志，2000，20（20）:119.

[3]Stith C，Hussian MD.Determination of mifepristone levels in wild canid serum using liquid chromatography[J].J Chromatography B，2003，794（1）:9.

[4]韋 陽，張美云，王恪申，等.中國健康女性口服低劑量米非司酮片劑的人體藥代動力學[J].中國臨床藥理學雜志，2003，19（6）:431.

[5]邵慶翔，桑國衛，姜麗霞，等.抗孕激素米非司酮及其代謝產物的臨床藥代動力學[J].中國臨床藥理學雜志，1993，9（3）:149.