尼美舒利聯(lián)合EGF受體沉默對膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的作用

游興松 戴國棟 袁玉林，＊

1湖北省嘉魚縣人民醫(yī)院，嘉魚437200；2武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)與組織學(xué)胚胎學(xué)系，武漢430071；＊通訊作者

目的：研究尼美舒利（NIM）與內(nèi)皮生長子受體（EGFR）沉默聯(lián)合應(yīng)用對膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的作用及機制。方法：不同濃度 NIM（0、25、50、100、200、400mol／L）與靶向EGFR小分子RNA（siRNA-EGFR）聯(lián)合作用于培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251，ELISA檢測培養(yǎng)上清中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）水平，MTT法檢測細(xì)胞增殖并計算抑制率，Western Blotting檢測細(xì)胞增殖、凋亡和血管形成調(diào)控相關(guān)蛋白，流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞周期和凋亡。結(jié)果：siRNA-EGFR濃度小于2μg／ml聯(lián)合NIM（25μmol／L～400μmol／L）處理U251細(xì)胞，其生長抑制率與NIM濃度呈依賴性增高，并阻滯U251細(xì)胞于G2／M期及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；蛋白分析表明，當(dāng)沉默U251細(xì)胞EGFR時，Bax蛋白表達(dá)隨NIM濃度增加而上調(diào)，bcl-2、細(xì)胞增殖核抗原（PCNA）和Ang-2蛋白表達(dá)隨NIM濃度增加而明顯下調(diào)（P＜0.05），Ang-1表達(dá)變化不明顯；siRNA-EGFR與25μmol／L的NIM處理U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞12h后，流式儀檢測到典型的凋亡亞二倍體峰，并且隨NIM處理時間延長（在作用48h之前）而增加，隨NIM處理劑量增加而呈現(xiàn)增加趨勢。結(jié)論：當(dāng)siRNA-EGFR濃度為2g／ml以下和作用時間在48h之前，EGFR沉默聯(lián)合NIM能發(fā)揮協(xié)同作用，其制可能與Bax蛋白表達(dá)上調(diào)和bcl-2、PCNA、VEGF、Ang-2蛋白表達(dá)明顯下調(diào)有關(guān)。