非小細胞肺癌患者癌組織中的ERCC1、EGFR、K-ras表達與其預后的關系

張晶晶，呂喜英，毛淑芳，李青山

(1承德醫學院附屬醫院，河北承德067000;2承德醫學院預防醫學教研室)

近年來，肺癌發病率持續上升，其病死率居癌癥之首，其中非小細胞肺癌(NSCLC)占85%。目前，術后化療是NSCLC綜合治療的主要手段之一，鉑類聯合第三代藥物的標準方案有效率僅為25% ～35%，患者總生存率僅提高約4.1%［1］。有研究表明，切除修復交叉互補基因1(ERCC1)與順鉑(DDP)耐藥有關;對耐DDP的NSCLC患者檢測表皮生長因子受體(EGFR)和原癌基因Kirsten-Rous肉瘤病毒(K-ras)基因突變，選擇性給予EGFR酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)分子靶向治療，可提高其療效，延長生存時間。本研究采用免疫組化法檢測了97例NSCLC患者癌組織中的ERCC1、EGFR、K-ras蛋白表達，旨在探討三者與NSCLC患者預后的關系，以指導其個體化治療。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇承德醫學院附屬醫院胸外科2008年6月～2010年12月住院的NSCLC手術患者97例，男72例、女25例，年齡38～80歲、中位年齡58歲，患者術后恢復較好，KPS評分＞70分。術后用鉑二聯(DDP+依托泊苷/吉西他濱/長春瑞濱)方案化療4個療程50例(化療組)，未化療47例(非化療組)。取97例患者的癌組織蠟塊作為觀察組，其中30例患者的癌旁組織蠟塊作為對照組。自入院當日至2011年11月，采用門診復查、電話或信件結合的方式進行隨訪，隨訪時間5～41個月、中位隨訪時間19個月。生存時間從手術日到隨訪截止日(或復發、轉移而死亡日)。

1.2 檢測方法 取觀察組、對照組組織蠟塊，切片厚5 μm，用抗原修復，以PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照;滴加小鼠抗人ERCC1、EGFR、K-ras一抗(1∶50、1∶100工作液)、二抗，行DAB顯色、蘇木素復染封片。采用免疫組化法檢測各組ERCC1、EGFR、K-ras表達，ERCC1、EGFR、K-ras、MaxVision免疫組化試劑盒購自福州邁新生物公司。每張切片隨機觀察5個高倍(×400)視野，每個視野計數100個腫瘤細胞。①按顯色強度分為4級:陰性(不著色)、弱陽性(淡黃色)、陽性(棕黃色)、強陽性(棕褐色)，分別計0、1、2、3分;②陽性腫瘤細胞百分比:無:0;1%～9%:0.1;10%～50%: 0.5;＞50%:1.0。以顯色強度評分與陽性腫瘤細胞百分比的乘積(半定量H值)作為蛋白表達相對強度，以中位H值判斷結果，ERCC1、EGFR的中位H值≥1.5為陽性，＜1.5為陰性;K-ras的中位H值≥2.0為陽性，＜2.0為陰性。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件，用χ2檢驗及確切概率法分析ERCC1、EGFR、K-ras陽性率與 NSCLC患者臨床生物學特征的關系，用Spearman等級相關分析分析 ERCC1、EGFR、K-ras的相關性。采用Kaplan-Meier法行生存分析，組間比較用Log-Rank檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組、對照組ERCC1、EGFR、K-ras表達比較 觀察組ERCC1陽性表達于腫瘤胞核，陽性率為29.9%(29/97);EGFR陽性表達于腫瘤胞膜和胞質，陽性率為22.7%(22/97);K-ras陽性表達于腫瘤胞膜，部分表達于胞質，陽性率為32.0%(31/ 97)。對照組ERCC1、EGFR、K-ras陽性率分別為0、3.3%(10/30)、0。兩組ERCC1、EGFR、K-ras陽性率比較，P均＜0.05。

2.2 NSCLC患者癌組織ERCC1、EGFR、K-ras表達與其生物學特征的關系 見表1。

2.3 ERCC1、EGFR、K-ras的相關性 ERCC1與EGFR、K-ras無明顯相關性。EGFR、K-ras均陽性表達0例，均陰性表達44例;EGFR陽性而K-ras陰性表達22例，EGFR陰性而K-ras陽性表達31例;EGFR與K-ras呈負相關(r=－0.371，P＜0.01)。

表1 NSCLC患者癌組織ERCC1、EGFR、K-ras表達與其生物學特征的關系［例(%)］

2.4 ERCC1、EGFR、K-ras表達與患者的生存時間

化療組ERCC1陽性、陰性患者的生存時間分別為5～33、9～42個月，非化療組ERCC1陽性為8～42個月;EGFR陽性而K-ras陰性、EGFR陰性而K-ras陽性患者分別為7～42、5～30個月。Kaplan-Meier分析顯示，化療組ERCC1陽性者的生存時間有低于陰性者的趨勢(P＞0.05)，非化療組ERCC1陽性者的生存時間長于化療組ERCC1陽性者(P＜0.05); EGFR陽性而K-ras陰性者的生存時間長于EGFR陰性而K-ras陽性者(P＜0.05)。

3 討論

ERCC1在核苷酸切除修復系統(NER)中起限速或調節作用［1］。ERCC1過表達通過NER途徑可使停滯在G2/M期的損傷DNA迅速修復，導致腫瘤細胞對鉑類耐藥。本研究97例NSCLC患者的ERCCl陽性率為29.9%，略低于國外報道［2］;其中化療組ERCC1陽性者生存時間低于陰性者，非化療組ERCC1陽性者生存時間長于化療組。ERCC1對NSCLC術后生存有雙重效應，ERCC1高表達可減少腫瘤復發危險，亦可致DDP耐藥;Ⅰ期患者術后ERCC1高表達主要為保護作用，而Ⅱ～Ⅲ期高表達主要導致鉑類耐藥或抵抗。ERCC1高表達提示NSCLC患者的生存結果更佳［2，3］，但對鉑化療效果不佳［2，4］，其原因主要是對一線化療藥物耐藥和(或)嚴重的化療毒副反應。

EGFR-TKI(包括吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼)的NSCLC分子靶向治療是肺癌治療史上重大的突破。EGFR突變狀態未知時，亞裔非吸煙女性肺腺癌患者是 TKI治療的優勢人群;IPASS、SLCG等［5，6］大型臨床研究顯示，EGFR突變的高選擇人群TIK一線治療的有效率為70.6%～74.5%，中位生存期為10.6～14.0個月。本研究顯示，NSCLC患者EGFR陽性率為22.7%，其在女性、腺癌患者中高表達，而男、女性腺癌患者的EGFR表達無統計學差異，其原因可能與樣本較少、不能準確反映真實情況有關。K-ras基因突變是EGFR-TKI原發性耐藥的重要預測指標，是靶向治療的負性預測因子。本研究顯示，NSCLC患者K-ras陽性率為32.0%，其與吸煙的腺癌患者(尤其是細支氣管肺泡癌)密切相關，與文獻報道［7］一致;且無論化療與否，EGFR陽性而K-ras陰性者的生存時間均明顯長于EGFR陰性而 K-ras陽性者。表明 K-ras突變不僅預示NSCLC患者的生存結果較差，還提示其對鉑類/長春瑞濱化療無效［8，9］。

近年研究發現，EGFR、K-ras突變在同一肺腫瘤中互相排斥(幾乎不會同時出現)，二者呈負相關。對EGFR陰性而K-ras陽性的NSCLC患者，通常提示其對TKI的療效甚差或無效，預后不良。因此，檢測ERCC1高表達、行耐鉑類化療患者的EGFR、K-ras突變狀態，可指導其有效的EGFR-TKI靶向治療。本研究發現，ERCC1與EGFR、K-ras無明顯相關性，但EGFR與K-ras呈負相關。提示對NSCLC術后患者常規檢測ERCC1、EGFR、K-ras基因及蛋白突變狀態，有利于指導其個體化治療。

綜上所述，ERCC1是預測NSCLC療效的生物標志物，也是判定患者生存預后的指標;EGFR基因突變是TKI治療必要而充分的預測指標;K-ras基因突變是生存預后指標。三者可影響化療藥物及方案的選擇，對制定個體化治療有重要意義。

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