Syk與NF-κB在直腸癌組織中的表達及意義

問 明，任莉莉，馬振峰，張卓奇，崔乃鵬，陳保平

(河北大學附屬醫院，河北保定071000)

近年研究顯示，非受體型酪氨酸激酶Syk作為惡性腫瘤預后判斷的指標受到越來越多的關注。直腸癌是胃腸道中常見的惡性腫瘤，研究探尋與其密切相關的生物學標記物對臨床治療有重要意義。2009年6月，我們應用免疫組化法檢測了Syk及NF-κB在直腸癌組織中的表達，旨在探討Syk在直腸癌發生、發展過程中的可能作用機制為臨床治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料 隨機選取我院2007～2008年手術切除的直腸癌病理標本共50例(直腸癌組)，手術前均未經任何治療，術前腸鏡活檢病理及術后病理均證實為原發性直腸癌。患者平均年齡52.3歲(其中≥60歲32例，＜60歲18例)，男33例、女17例;腺癌36例，黏液腺癌9例，未分化癌5例;根據TNM分期標準(UICC 2009年)Ⅰ及Ⅱ期18例(無淋巴結轉移)，Ⅲ及Ⅳ期32例(有淋巴結轉移);根據細胞異型性及排列極性情況低度分化及未分化10例，中度分化31例，高度分化9例。另選癌旁正常組織10份(經病理HE染色證實)作為對照組。

1.2 Syk及NF-κB表達檢測 取兩組標本，經甲醛液浸泡固定后常規石蠟包埋，4 μm厚度連續切片3張，HE染色1張，免疫組織化學染色2張，70℃烤箱烤片2 h，免疫組化染色步驟依照試劑盒說明書進行(其中通用型免疫組化SP 試劑盒購自福州邁新生物技術公司，兔抗人NF-κB單克隆抗體購自Santa Cruz公司，鼠抗人單克隆Syk抗體購自NeoMarkers公司)。染色結果判定:應用光學顯微鏡于高倍視野(×400)下對細胞進行計數，計算陽性細胞百分比，以棕黃色顆粒定位明確、明顯染色者為陽性，弱染色或不染色者為陰性;陽性細胞＜10%為(－)、10%～25%為(+)、26%～50%為(++)、＞50%為(+++)，其中(－)及(+)判為陰性、(++)及(+++)判定為陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行統計學處理。率的比較及相關性分析采用四格表法及χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 Syk、NF-κB表達及其相關性 直腸癌組NF-κB陽性表達33例(66.0%)、Syk表達缺失(陰性) 20例(40.0%)，對照組NF-κB表達均為陰性、而Syk表達均呈陽性，組間比較P分別＜0.01及0.05; Syk與 NF-κB表達存在顯著負相關關系(P＜0.05)，見表1。

表1 直腸癌組Syk、NF-κB表達(例)

2.2 Syk表達與直腸癌臨床病理參數的關系 Syk表達與直腸癌腫瘤細胞分化、淋巴結轉移有關(P＜0.05)，與年齡、性別無顯著相關(P＞0.05)，見表2。

表2 Syk表達與直腸癌患者臨床病理指標的關系(例)

3 討論

Syk編碼基因為SYK，廣泛表達于造血細胞中，是磷酸化免疫受體活化基序首選招募的對象，與ZAP-70屬于同一酪氨酸激酶家族［1］。近期研究顯示，Syk與多種惡性腫瘤的發生、發展有關，如正常乳腺組織及非侵襲性乳腺癌細胞株中均可檢測到Syk表達，而侵襲性乳腺癌細胞株Syk的表達降低甚至缺失;Syk具有抑制乳腺癌細胞增殖及促其凋亡的作用，Syk陰性乳腺癌細胞株轉染野生型Syk后接種裸鼠形成的腫瘤較未轉染者接種裸鼠形成的腫瘤直徑小，且出現肝轉移的風險明顯降低［2，3］。研究發現，Syk與消化道腫瘤的發生存在密切關系［4～8］。甲基化是腫瘤抑制因子基因沉默的主要機制［9，10］，Yun等［11］研究發現，乳腺癌組織的SYK基因出現超甲基化，而癌旁正常乳腺組織的SYK基因不發生甲基化，推測Syk表達缺失發生在轉錄水平，可能由SYK基因CpG島超甲基化所致SYK基因沉默引起。本研究顯示，直腸癌組Syk表達缺失者占40.0%，而對照組均為陽性表達，組間比較存在明顯差異;Syk表達與腫瘤侵襲性及腫瘤細胞分化程度關系密切。提示Syk表達缺失與直腸癌發生、發展有密切關系，Syk表達缺失的直腸癌具有更高的侵襲性和轉移傾向，Syk對直腸癌細胞的生長和轉移有一定抑制作用。

NF-κB是重要的核轉錄因子，參與多種基因調控、機體免疫應答和細胞死亡的信號傳導過程，已有研究證明其活化與多種腫瘤的發生、發展有關［12］。研究顯示，在乳腺癌細胞中Syk可通過抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-k)抑制NF-κB活化。NF-κB可調節尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)的激活、分泌，而uPA的激活、分泌與多種惡性腫瘤的發生、發展及轉移密切相關。還有研究顯示，NF-κB(p65)移位活化后可與血管內皮生長因子(VEGF)-C啟動子上的特定區域結合而上調VEGF-C表達，而VEGF-C被認為是目前最強的促淋巴管新生的因子，其過表達可導致淋巴管過度增生。本研究顯示，直腸癌組NF-κB陽性表達33例(66.0%)，而對照組表達均為陰性，組間比較有顯著差異;NF-κB與Syk表達呈顯著負相關，Syk表達缺失病例中可見到NF-κB高表達。提示NF-κB活化與直腸癌存在密切關系;Syk可能通過調節NF-κB表達而影響細胞信號的轉導及淋巴管生成，進而導致腫瘤的發生與進展。其具體機制尚需擴大樣本進行深入研究。

總之，Syk可能通過抑制NF-κB的活化抑制直腸癌發生及進展，有望作為新靶點用于直腸癌的治療。

［1］Abtahian F，Guerriero A，Sebzda E，et al.Regulation of blood and lymphatic vascular separation by signaling proteins SLP-76 and Syk［J］.Science，2003，299(5604):247-251.

［2］Coopman PJ，Domt H，Barth M，et al.The Syk tyrosine kinase suppresses malignant growth of human breast cancer cells［J］.Nature，2000，406(6797):742-747.

［3］王華毅，張兆祥，胡余昌，等.乳腺癌和非乳腺癌組織中Syk、survivin、Ki-67的表達及其相關性［J］.臨床與實驗病理學雜志，2008，24(2):158-161.

［4］Wang S，Ding YB，Chen GY，et al.Hypermethlation of Syk gene in promoter region associated with oncogenesis and metastasis of grastric cancinoma［J］.World J Gastroenterol，2004，10(12):1815-1818.

［5］陳明霞，丁永武，蔣奎榮，等.酪氨酸激酶Syk在胰腺癌中的檢測及其臨床意義［J］.南京醫科大學學報(自然科學版)，2003，23 (5):492-493.

［6］秦寶山，李繼昌.酪氨酸激酶Syk在胃癌中的表達及意義［J］.中國誤診學雜志，2006，16(3):411-412

［7］佟峰，趙文華，王長亮，等.Syk和VEGF-C在胰腺癌組織中的表達及臨床意義［J］.山東醫藥，2008，48(35):27-29.

［8］宋玉琴，周武元，趙文華，等.Syk蛋白在胰腺癌中的表達及臨床意義［J］.中華腫瘤防治雜志，2007，14(15):1149-1150.

［9］Jones PA，Larid PW.Cancer epigenetics comes of age［J］.Nat Genet，1999，21(2):163-167.

［10］Baylin SB，Herman JG.DNA by permethylation in tumorigenesis，epigenetics joins genetics［J］.Trends Genet，2000，16(4):168-174.

［11］Yunfei Y，Richard M，Aysegul S，et al.Hypermethylation leads to silencing of the SYK gene in human breast cancer［J］.Cancer Res，2001，61(4):5558-5561.

［12］Charalambous MP，Maihfofner C，Bhambra U，et al.Upregulation of cyclooxygenase-2 is accompainied by increased expression of nuclear facter-kappa B and I kappa B kinase-alpha in human colorectal cancer epithclial cells［J］.Br J Cancer，2003，88(10):1598-1604.