復方健骨膠囊對大鼠卵巢切除誘導的骨質疏松癥的影響

陳海飛，卞 俊，鮑蕾蕾，柳正良

CHEN Hɑi-fei，BIAN Jun，BAO Lei-lei，LIU Zheng-liɑng

(Depɑrtment of Phɑrmɑcy，No.411 Hospitɑl of CPLA，Shɑnghɑi 200434，Chinɑ)

絕經后女性的雌激素水平下降是導致骨質加速丟失、引發骨質疏松癥的重要原因［1］。據此，學者們采用切除雙側卵巢的方法建立了大鼠骨質疏松癥模型［2-3］，并在相關研究中廣泛運用。本實驗按照中醫腎主骨的理論，以補腎方復方健骨膠囊為實驗藥物，通過觀察卵巢切除誘導的骨質疏松癥大鼠模型用藥前后骨鈣含量和骨密度，評價該藥治療骨質疏松的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 60只雌性SD大鼠，清潔級，體質量300 g左右，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，許可證號SCXK(滬)2003-0003。

1.2 藥品 復方健骨膠囊，由骨碎補、淫羊藿、丹參、補骨脂、牛膝、山藥組方，膠囊內容物為棕褐色顆粒，由本院制劑室自制。

1.3 儀器 原子吸收分光光度計(HG9620A型，沈陽光華精密儀器有限公司)、雙能X線骨密度儀(LUNAR EXPERT#1170型，美國)、精密卡尺、動物解剖器械、電子天平(SL-1001型，精度0.1 g，上海民橋電子儀器廠)、電子天平(JA2003型，精度0.001 g，上海精科天平)、烘箱。

1.4 卵巢切除術［2-3］及術后篩查 摘除卵巢后5 d進行陰道涂片檢查，1次/d，連續7 d，如涂片呈動情反應(鏡下見大量半透明、扁平的表皮細胞)，表明卵巢切除不完全，應棄去不用。假手術組按同法進行手術，去除1小塊脂肪代替卵巢。

1.5 動物分組及給藥方法 大鼠術后經1周適應性喂養后分組，除假手術組外，卵巢摘除大鼠隨機分組為模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性藥對照組，本組10只。假手術組和模型組給予蒸餾水，低劑量組、中劑量組和高劑量組分別給予復方健骨膠囊內容物200、400、800 mg/kg，陽性藥對照組給予碳酸鈣100 mg/kg，1次/d，連續90 d。所有試驗動物均食用配制的飼料，自由攝食飲水，單籠飼養，定期觀察一般情況，每周測1次體質量。

1.6 骨鈣含量測定 動物喂養90 d后處死，剝離出左右側股骨，于烘箱中105℃烘烤至恒重，稱量骨干重。左側股骨用于測量骨長。右側股骨置于100 ml潔凈燒杯中，加入混合酸(硝酸∶高氯酸=4∶1)15 ml，蓋上表面皿，在電熱板上加熱消化(冒白煙)，酸液不夠時可以再加入少量混合酸。待消化液透明無色后加數毫升去離子水，煮沸以除盡剩余的酸，重復2次，最后消化液的體積不超過1 ml。消化樣品時同時作空白對照，加入與樣品消化時相同體積的混合酸，在相同條件下消化。按照原子吸收分光光度計操作說明書進行測定。測定液、標準溶液和空白對照均用氧化鑭溶液稀釋、定容。

1.7 股骨密度測量 左側股骨用生理鹽水浸泡的紗布包裹，冷藏保存，用雙能X線骨密度儀測定股骨中點和股骨遠心端骨密度。

2 結果

2.1 對體質量的影響 見表1。實驗第30天、第60天和第90天，模型組體質量明顯高于假手術組(P＜0.05)，各劑量組與模型組相比差異無統計學意義(P＞0.05)。表明200、400、800 mg/kg劑量復方健骨膠囊對模型動物體質量均無明顯影響。

表1 給藥前后各組大鼠體質量變化(±s，各組n=10，g)

表1 給藥前后各組大鼠體質量變化(±s，各組n=10，g)

注:與同期模型組相比aP＜0.05

組別 第0天 第30天 第60天 第90天假手術組 306.5±11.7 337.7±12.0a352.8±12.0a363.8±12.4a模型組 306.2±10.9 368.9±11.4 391.9±13.4 408.7±13.9低劑量組 306.5±10.2 371.8±9.2 393.5±10.6 408.8±13.4中劑量組 306.4±10.1 365.4±11.0 387.3±12.9 401.0±12.5高劑量組 306.5±9.9 367.2±19.9 387.6±22.3 402.1±22.3陽性藥對照組306.5±9.6 370.5±7.0 392.8±10.1 407.4±10.6

2.2 對骨鈣含量的影響 見表2。模型組大鼠骨鈣含量明顯低于假手術組(P＜0.05)，說明骨質疏松癥大鼠模型建立成功。復方健骨膠囊中、高劑量組和陽性藥對照組骨鈣含量明顯高于模型組(P＜0.05)，表明400、800 mg/kg劑量復方健骨膠囊具有增加骨鈣含量的作用。

表2 給藥90 d后各組大鼠股骨重、骨長和骨鈣含量(±s，各組n=10)

表2 給藥90 d后各組大鼠股骨重、骨長和骨鈣含量(±s，各組n=10)

注:與模型組相比aP＜0.05

組別 骨重(g) 骨長(cm) 骨鈣含量(mg/g假手術組 0.407±0.013 3.51±0.02 270.3±17.2)a模型組 0.429±0.021 3.57±0.03 213.8±11.8低劑量組 0.422±0.024 3.54±0.03 218.0±14.4中劑量組 0.420±0.030 3.55±0.03 234.3±11.0a高劑量組 0.413±0.023 3.54±0.04 251.0±16.7a陽性藥對照組 0.416±0.029 3.53±0.04 240.0±9.4a

2.3 對骨密度的影響 見表3。模型組骨密度明顯低于假手術組(P＜0.05)，說明骨質疏松動物模型建立成功。復方健骨膠囊高劑量組骨密度明顯高于模型組(P＜0.05)，表明800 mg/kg劑量復方健骨膠囊具有增加骨密度的作用。

表3 給藥90 d后各組大鼠骨密度(±s，各組n=10)

注:與模型組相比aP＜0.05

組別 股骨中點骨密度(g/cm2)股骨遠心端骨密度(g/cm2)假手術組 0.241±0.017a 0.268±0.013a模型組 0.199±0.017 0.221±0.007低劑量組 0.211±0.008 0.228±0.018中劑量組 0.213±0.013 0.234±0.018高劑量組 0.228±0.017a 0.254±0.011a陽性藥對照組 0.218±0.012a 0.243±0.018a

3 討論

中醫學把骨質疏松癥歸屬于骨痿、骨枯、骨痹的范疇，認為腎虛和脾虛是重要病機，血瘀是促進因素。復方健骨膠囊為中醫驗方，由骨碎補、淫羊藿、補骨脂、牛膝、山藥、丹參等組成。該方以補腎強骨的骨碎補和補腎陽、強筋骨的淫羊藿為主藥，輔以歸腎、脾經、溫腎助陽的補骨脂;歸脾、肺、腎經、補脾養胃、生津益肺、補腎澀精的山藥;以及歸心、肝經，祛瘀止痛、活血通經的丹參，并佐以牛膝，共奏益補脾腎、強筋健骨、活血通絡之效。

本研究通過測定模型大鼠骨鈣含量和骨密度，評價復方健骨膠囊的抗骨質疏松作用。結果表明復方健骨膠囊能夠提高骨鈣含量，增加骨密度，有一定的抗骨質疏松作用，這為復方健骨膠囊治療骨質疏松癥提供了藥理依據。

［1］Christiansen C，Lindsay R.Estrogens，bone loss and preservation［J］.Osteoporosis Int，1990，1(1):7-13.

［2］Devlin H，Ferguson MW.Compositional changes in rat femur following ovariectomy［J］.Acta Anatomica，1989，136(1):38-41.

［3］Tabuchi C，Simmons DJ，Fausto A，et al.Bone deficit in ovariectomized rats［J］.J Clin Invest，1986，78(9):637-642.

(本文編輯:施 莼)