來氟米特片中來氟米特及有關物質的測定

施務務，吳 歡

來氟米特(leflunomide，LFM)是一種新型的異唑類衍生物，具有抗炎和免疫抑制的作用［1］，主要用于類風濕性關節炎的治療，其作用機理與已知的抗炎免疫抑制劑不同，LFM對多種自身免疫性疾病均有治療作用［2］，該藥于1998年12月首次在美國上市，其含量測定的方法已有文獻報道［3-4］。本研究采用反相高效液相色譜法分離測定了LFM片中LFM及其主要有關物質，方法快速準確，靈敏度高，現報告如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 LC-2010A島津進口原裝高效液相色譜儀、工作站Lcsoiution。MILLIPORE純水機。

1.2 試劑 LFM對照品(購于中國藥品生物檢定所，純度99.7%，批號:100571-200801)、4-三氟甲基苯胺、特立氟胺、3-甲基LFM由第二軍醫大學藥學院提供，經HPLC檢測，其純度分別為 98.6、99.2、99.1%);LFM 片(江蘇亞邦愛普森藥業有限公司提供;規格:10 mg;批號:1002001、1002002、1002003);乙腈和甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱:Agilent ODS(4.6 mm ×250 mm，5μm);流動相:乙腈-甲醇-0.02 mol/L KH2PO4溶液(15∶20∶55);流速為1.5 ml/min;檢測波長為254 nm;進樣量20 μl。分別取 LFM、特立氟胺、4-三氟甲基苯胺、3-甲基LFM對照品適量，配制濃度分別為每mL中分別含1 mg、0.1 μg、10 μg 和 1 μg 的系統適用性溶液，LFM 理論塔板數達6000以上，各峰之間分離度大于1.5。見圖1。

2.2 輔料干擾實驗 精密稱取輔料細粉適量(約相當于LFM10 mg的片劑處方量)置10 ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，精密吸取20 μl;進樣，色譜圖見圖2。結果表明在LFM及其有關物質出峰位置上基質無干擾。

2.3 線性關系的考察 LFM對照品在使用前于105℃干燥2 h，精密稱取5 mg置10 ml量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，分別精密吸取5.0，4.0，3.0，2.0，1.0，0.5 ml置10 ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，依法測定，以LFM濃度C(mg/L)為橫坐標，色譜峰面積A為縱坐標，繪制回歸方程A=19.5361C+0.5249(R2=0.9992)。在0.025 ～0.25 mg/L 范圍內 LFM線性關系良好，見圖3。

2.4 重復性試驗和加樣回收率試驗 取批號為1002002的LFM片按“2.7”項下樣品溶液配制方法制備6份樣品溶液，按照“2.1”項下色譜條件依法測定，測得LFM平均含量為標示量的99.5%，RSD為1.2%。精密稱取空白輔料100 mg，置100 ml量瓶中(共9份)，分別加入經干燥后的LFM對照品約8，10，12 mg各3 份，按“2.7”項下方法測定，結果 LFM 的加樣回收率分別為(100.2%，99.7%，100.4%)，RSD 為(0.8%，1.1%，0.3%)。

2.5 穩定性試驗 取“2.7”項下樣品一份，按“2.1”項下色譜條件測定，分別 0，2，4，6，12，24 h 后同法測定，測得平均濃度的RSD為0.5%，表明樣品溶液在24 h內穩定。

2.6 對照溶液及樣品溶液的配制及含量測定 取LFM20片，精密稱定總重，研成細粉，精密稱取約相當于LFM10 mg的樣品細粉適量置100 ml量瓶中，加乙腈10 ml超聲5 min使溶解，以流動相定容，搖勻，濾過，既得;另精密稱取經干燥后的LFM對照品適量配制成濃度為0.1 mg/L的溶液。進樣體積10 μl，注入液相色譜儀，按“2.7”項下條件以外標法進行測定，測定結果見表1。

表1 三批LFM片中LFM的含量(%)

3 討論

本研究在摸索色譜方法時發現LFM與其3－甲基異構體分離較為困難，DAD在線對LFM及3－甲基異構體進行了全波段紫外掃描，兩色譜峰的紫外吸收曲線高度相似，分離難度較大。通過參考相關文獻［5］，同時也比較了有機相與水相比例及水相鹽濃度的變化，最終確定流動相為乙腈-甲醇-0.02 mol/L KH2PO4溶液(15∶20∶55);此時LFM理論塔板數大于6000，與其有關物質及有關物質之間分離度良好，均大于1.5。

本研究所采用的反相高效液相色譜法與現行國家藥品標準［6］中LFM的測定相比準確度更高、重現性更好，更好的測定了LFM片中LFM的含量。從本研究的系統適用性試驗可以看出，本研究開發的液相色譜條件不但可以應用于LFM的含量測定，還可以同時對其有關物質進行限量測定，為LFM原料及其制劑在生產或貯存過程中的質量分析提供了更為高效準確的檢測方法。

［1］蘇國棟，姜永悅，呂延文.來氟米特合成工藝的改進［J］.化工時刊，2011，25(4):11-12.

［2］中華醫學會風濕病學分會.類風濕關節炎診斷及治療指南［J］.中華風濕病學雜志，2010，14(4):265-270.

［3］翁水旺.HPLC法測定來氟米特片含量［J］.醫藥導報，2005，29(8):374.

［4］洪利婭，馬張英，屠凌嵐.高效液相色譜法測定來氟米特片的含量［J］.醫藥導報，2005，24(6):526-527.

［5］楊紅娟，洪志玲，曾 民.HPLC法測定來氟米特片中來氟米特的含量及含量均勻度［J］.中國藥品標準，2010，11(3):216.

［6］WS1－(X－059)－2003Z.國家藥品監督管理局國家藥品標準［S］.