頂空氣相色譜法測定替卡西林鈉原料藥中殘留溶劑

宋瑞芝，邢 軍，常恩慧，袁 敏，黃秀芬

(1.山東魯抗醫藥股份有限公司，山東濟寧272021;2.濟寧市藥品檢驗所，山東濟寧272020)

替卡西林鈉為半合成β一內酰胺類抗生素，臨床主要用于治療敗血癥、呼吸道感染、膽道感染及泌尿道感染等。由于該藥在合成過程中需使用乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氫呋喃等有機溶劑，故應對原料藥中有機溶劑的殘留量進行檢測。目前，《中國藥典》2010年版(二部)以及JP15均未收載替卡西林鈉的殘留溶劑測定方法，而美國藥典USP32只收載了替卡西林鈉原料中二甲基苯胺一種殘留溶劑的測定方法。本試驗根據《中國藥典》2010年版(二部)對有機溶劑殘留量測定的指導原則［1］，采用頂空進樣毛細管氣相色譜法，測定了替卡西林鈉原料藥中乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氫呋喃的殘留量。方法簡便靈敏，結果準確可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 PerkinElmer Clarus500氣相色譜儀，FID檢測器，PerkinElmer Headspace Sampler TurboMatrix 40頂空儀。

1.2 試藥 乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氫呋喃、二氯乙烷所用試劑均為分析純，水為高純水。替卡西林鈉原料藥3批(批號為1108001、1108002、1108003)，為山東魯抗醫藥提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 頂空進樣器條件:熱平衡溫度85℃;進樣針溫度105℃;傳輸線溫度115℃;熱平衡時間30 min。氣相色譜條件色譜柱:Elite－5(30 m×0.32 mm);載氣為N2，載氣流速35 cm·s－1;分流比10∶1;柱溫60℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度300℃;進樣量1.0 mL。5個主峰的理論板數、分離度均符合《中國藥典》2010年版(二部)的有關規定，結果如圖1所示。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取乙醇150.5 mg、乙腈20.1 mg、乙酸乙酯100.2 mg、四氫呋喃25.4 mg，加水溶解并定容至100 mL量瓶中，作為對照品儲備液。再精密量取此溶液10.0 mL于50 mL容量瓶中，精密加入內標液10.0 mL，用水定容至刻度，搖勻，做為對照品溶液。

圖1 對照品溶液色譜圖

2.2.2 內標溶液的制備 精密吸取二氯乙烷30 mg，用水溶解并定容至100 mL量瓶中，作為內標溶液。

2.2.3 樣品溶液的制備 取本品約1.0 g于20 mL頂空瓶中，精密加入內標溶液2.0 mL，純化水8.0 mL，密封搖勻，作為樣品溶液。

2.3 線性關系考察 分別精密量取對照品儲備液2、4、6、8、10、12、14 mL，分別置50 mL量瓶中，精密加入10 mL內標溶液，依次用水定容至50 mL量瓶中，搖勻;分別精密量取10 mL于20 mL頂空瓶中，密封，依法測定。分別以濃度(mg· mL－1)為橫坐標(C)，以各濃度下對照品峰面積A對與內標峰面積A內的比值為縱坐標(Y)，進行線性回歸，結果如表1。結果表明，乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氫呋喃在所研究范圍內濃度與其對照品峰面積與內標峰面積的比值呈良好的線性關系(見表1)。

表1 線性關系考察結果(%，n=3)

2.4 精密度試驗 分別取對照品溶液10 mL于5個20 mL頂空瓶中，密封，依法測定，測得乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氫呋喃峰面積與內標二氯乙烷峰面積比值的相對標準偏差分別為1.9%、1.9%、1.7%、1.8%

2.5 最低檢測限試驗 采用對照品溶液逐步稀釋法，依據S/N=3時測得最低檢出濃度分別為乙醇0.19 μg· mL－1、乙腈0.08 μg·mL－1、乙酸乙酯0.01 μg· mL－1、四氫呋喃0.03 μg·mL－1。

2.6 定量限試驗 采用對照品溶液逐步稀釋法，依據S/N =10時測得定量限濃度分別為乙醇1.05 μg· mL－1、乙腈0.32 μg·mL－1、乙酸乙酯0.04 μg·mL－1、四氫呋喃0.11 μg·mL－1。

2.7 回收率試驗 分別精密量取2.3項下的對照品儲備液5、10、15 mL，置50 mL量瓶中，精密加入內標溶液10 mL，搖勻，分別作為低、中、高三個濃度的對照品溶液，備用。取本品供試品約1g，精密稱定，置頂空瓶中，共12份，每3份為一組，其中一組分別精密加入內標溶液2.0 mL，純化水8.0 mL，密封搖勻，作為測定供試品中各溶劑含量用;另外三組分別加入上述低、中、高3個濃度的對照品溶液各10 mL，使樣品溶解，密封，依法測定含量并計算平均回收率。結果表明四種殘留溶劑的平均回收率(n=9)及相對標準偏差分別為乙醇 102.7%、2.5%;乙腈 100.7%、2.6%;乙酸乙酯102.3%、2.0%;四氫呋喃101.5%、2.3%。

2.8 樣品測定 取本品約1.0 g于20 mL頂空瓶中，精密加入內標溶液2.0 mL，純化水8.0 mL，密封搖勻，作為樣品溶液。依法測定，結果見表2，圖譜見圖2。

表2 樣品測定結果(%，n=3)

圖2 樣品溶液色譜圖

3 討論

3.1 進樣方式的選擇 頂空進樣可以避免將樣品中的難揮發性物質引入色譜柱，減少對柱子的污染，同時該四種有機溶劑沸點均較低且較接近［2，3］，宜采用頂空進樣方式。

3.2 本方法簡便，靈敏，精密度、回收率均能滿足中國藥典的要求，故適用于替卡西林鈉中四種有機溶劑的檢測。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄61－65.

［2］ 程能林，胡聲聞.溶劑手冊［M］.北京:化學工業出版社，1986.

［3］ 謝元超，王維劍，鞏麗萍.頂空氣相色譜法測定頭孢氨芐原料中殘留溶劑［J］.齊魯藥事，2011，30(4):209－210.