咽舒噴霧劑組方合理性驗證研究

崔清華，張雷明，薛云麗，田景振

(1.山東中醫藥大學，山東濟南250335;2.煙臺大學，山東煙臺254000;3.南京綠葉思科藥業有限公司，江蘇南京210061)

咽舒噴霧劑是由山豆根、黃芩、丹皮、赤芍、生地、薄荷等11味藥材組成的復方醫院制劑，具有清熱養陰、解毒利咽、活血生津等功效。臨床用于治療各種急慢性咽炎，作用直接、迅速、持久。對復方研究時發現山豆根主要有效成分生物堿類會與其他黃酮類成分產生沉淀反應，導致有效成分損失，降低藥效，有必要對方中山豆根的去留做一篩選。另咽舒復方中大部分藥物為治療咽炎常用藥，而赤芍、生地這兩味藥材無論從化學成分還是藥理活性上均沒有文獻表明有治療咽炎作用，故對這兩味藥材逐一拆方考察［1］，觀察精簡后的不同處方對有效組分含量及抗炎效果的影響，闡明方劑配伍的科學性，并為咽舒噴霧劑的劑型完善奠定基礎。

1 材料

扶他林乳膠劑(北京諾華制藥有限公司，批號X2045);咽舒噴霧劑組方所用藥材(煙臺綠葉有限公司，均符合《中國藥典》2010年版各項下質量標準要求);硝酸鋁、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、三氯甲烷、溴麝香酚藍、磷酸二氫鉀等，均為分析純或化學純;AR3130分析天平(Adventurer公司);健康SPF級昆明種小鼠，體重(20±2)g［山東綠葉制藥有限公司實驗動物中心，動物生產許可證號:SCXK(魯)2009－0009］;752紫外分光光度計(上海元析);PHS－3C pH計(上海三信)等。

2 實驗方法與結果

2.1 供試品溶液的制備 丹皮、薄荷置多功能提取器中提取揮發油，收集蒸餾液。山豆根等幾味，按簡單拆方法分別對不同組方下得藥材加10倍量水煎煮2次，每次1.5 h，合并煎煮液，濾過，濃縮至每毫升藥液中藥材量為0.1 g，加入揮發油，混勻，分別制備原方藥液、全方減山豆根、全方減赤芍、全方減生地共四種藥液，備用。

2.2 總黃酮含量測定(亞硝酸鈉－硝酸鋁顯色法)［2］以蘆丁為對照品，取供試品溶液1 mL，置25mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應的試劑為空白，照紫外－可見分光光度法，在500 nm處測定吸光度。

2.3 總生物堿含量測定(酸性染料比色法)［3］以氧化苦參堿作對照品，取供試品溶液1 mL，置于60 mL分液漏斗中，精密加入pH 7.6的緩沖溶液8 mL，0.001 mol·L－1溴甲酚藍液2 mL，混勻后加入三氯甲烷10 mL，振搖萃取5 min，放置10 min，分層，分取三氯甲烷液加入含有0.2 g無水硫酸鈉的10 mL量瓶中，搖勻，放置10 min，以三氯甲烷作為空白，在414 nm波長下測定吸光度。

2.4 抗炎作用［4］昆明種小鼠60只，雌雄各半，隨機分成6組:生理鹽水對照組、扶他林乳膠劑組、咽舒噴霧劑原方組、原方減山豆根組、原方減赤芍組、原方減生地組。每組小鼠左、右耳前、后兩面分別用棉棒涂生理鹽水及相應藥物(分2次給藥，間隔30 min)。末次給藥30 min后，在各組小鼠右耳涂二甲苯12 μL(前后各6 μL)，1 h后處死動物，用9 mm打孔器于每只小鼠的左右耳相同部位打下耳片，分別稱重，計算腫脹率及腫脹抑制率，比較組間差異的顯著性。

腫脹值=右耳片重－左耳片重;

腫脹率=腫脹值/左耳片重;

腫脹抑制率=(對照組腫脹均值－用藥組腫脹均值)/對照組腫脹均值。

2.5 結果 總黃酮含量測定標準曲線:C=2.147 7A+ 0.071，R2=0.999 2(0.38～1.14 mg·mL－1內線性范圍良好)。

總生物堿含量測定標準曲線:C=1.783 4A+0.037 2，R2=0.996 3(0.2～1.2 mg·mL－1內線性范圍良好)。

有效組分含量測定及抗炎效果見表1、表2。

表1 咽舒噴霧劑不同組方總黃酮及生物堿含量測定結果(n=3)

表2 咽舒噴霧劑不同組方對小鼠二甲苯致耳腫脹的影響(n=10)

3 討論

拆方研究可說明中藥復方的配伍關系和組方理論，通過拆方分析得出的規律性認識，為研制中藥復方新藥提供可靠的依據。中藥復方是按君臣佐使配伍的，是中醫用藥的特色所在。現代復方藥理研究，對多個方劑進行拆方等深入研究后，在一定程度上證實了方劑配伍的合理性。拆方研究對篩選方劑的有效成分，優化方劑的配伍不失為一種好的方法［5］。

組分含量和抗炎效果成正比關系，證明所選指標有意義。有效組分結合藥效學雙重指標得出的結論更具有科學性和使用性。原方減山豆根后，無論從有效組分含量還是抗炎作用效果上都相比原方有很大損失。證明山豆根在復方中的作用，其正面效果遠大于負面效應，故應保留。

原方減赤芍后其有效組分和藥效損失均超過10%，大于單味藥材的平均值，故應保留。原方減生地后組分含量有少量損失，藥理結果與原處方不相上下，考慮到可能存在長效作用等未知因素，故選擇尊重原方，保留地黃。

本實驗通過簡單拆方對咽舒復方中有爭議的藥味逐一減少以觀察療效變化，尋找組效關系。從中找出起主導作用的藥物，或各味藥物在復方中的地位，或各味藥之間的最佳配伍比例［6］。實驗結果充分顯示了原處方配伍的合理性和科學性。雖然沒有達到精簡處方的目的，但是從組分和藥理兩方面證實了山豆根在方中的君藥地位;赤芍和生地的存在顯示了中醫理論指導下的增效減毒作用。研究表明，咽舒噴霧劑組方合理，藥效明確，具備進一步開發的價值。

［1］ 朱萱萱，紀偉，彭青，等.熱痹消治療急性痛風性關節炎的拆方研究［J］.中醫藥學刊，2004，22(3):433－434.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:333.

［3］ 邵晶，倪京滿，郭玫，等.苦參藥材中總生物堿含量的測定［J］.安徽農業科學，2008，36(36):15950－15951，15967.

［4］ 許建安.五鶴續斷抗炎鎮痛作用的實驗研究［J］.數理醫藥學雜志，2011，24(4):449－451.

［5］ 李凌艷，馬長勇.中藥復方研究的現狀與方法探析［J］.齊魯藥事，2011，30(1):44－47.

［6］ 王麗靜，賈曉斌，陳彥，等.中藥復方拆方研究的思路與方法［J］.中成藥，2008，30(9):1343－1346.