血漿中APC基因甲基化檢測在早期肺癌診斷中的意義

賈紅珍

肺癌是目前全世界癌癥死因的第一名。1995年全世界有60萬人死于肺癌，而且每年人數(shù)都在上升。本病多在40歲以上發(fā)病，而女性患肺癌的發(fā)生率上升趨勢更明顯，發(fā)病年齡高峰在60～79歲之間。男女患病率為2.3:1。以往研究發(fā)現(xiàn)，肺癌組織中APC基因的啟動子區(qū)會發(fā)生高甲基化，并且對肺癌診斷可能有一定的價值。腫瘤患者血漿中DNA含量增高，主要來源于腫瘤細胞，因此若在血漿DNA中也能檢測到這種甲基化改變，將有助于肺癌早期診斷。在本次研究中將對我院自2011年1月1日至2011年12月31日前來就診的31例肺癌患者給予臨床分析，從而探討血漿中APC基因甲基化檢測在早期肺癌診斷的臨床意義，為提高肺癌疾病的診斷率從而使患者得到及時治療以及提高患者生活與生存質量提供可靠臨床依據(jù)，現(xiàn)結果如下。

資料與方法

1.一般資料:本文將對我院自2011年1月1日至2011年12月31日前來就診的31例肺癌患者給予臨床分析。31例肺癌患者作為研究組，其中男性患者為21例、女性患者為10例，年齡在29至71歲之間，平均為(52.1±1.3)歲;選取31例肺良性腫瘤患者作為對照組一，其中男性患者為19例、女性患者為12例，年齡在27至70歲之間，平均為(51.9±1.1)歲;選取31例健康人群為對照組二，其中男性為20例、女性為11例，年齡在28至71歲之間，平均為(52.0±1.2)歲。研究組、對照組一、對照組二患者在性別、年齡、教育背景以及社會經歷等方面無顯著性差異，且P＞0.05，三組人群一般資料具有臨床可比性。

2.方法:研究組肺癌患者、對照組一肺部良性腫瘤患者以及對照組二健康人群分別進行血漿中APC基因甲基化檢測，觀察并記錄三組人群檢測結果，進行統(tǒng)計學分析，得出結論。

(1)樣本采集:對研究組、對照組一、對照組二患者分別采集EDTA－K2抗凝全血，采集量為2毫升，之后將所采集到的血液樣本進行離心，選用每分鐘3000轉的離心速度持續(xù)離心十分鐘，分離血漿，之后對分離出的血漿采用每分鐘12000轉繼續(xù)離心十分鐘，將所得血漿置于零下70攝氏度保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)試劑及儀器:轉甲基試劑盒選用NEB公司生產;DNA熱啟動聚合酶為TaKaRa公司生產;提取DNA選用磁珠法，使用上海浩源公司生產的相關試劑盒;選用MJ公司生產的PTC－100型號PCR擴增儀;選用KoDak公司制造的凝膠成像系統(tǒng);選用美國ABI公司生產的7500熒光定量基因擴增儀;化學修飾試劑盒選用Chemicon公司生產。

(3)檢測方法:使用磁珠法對上述提取血漿進行提取，具體操作步驟為血漿經裂解液處理后，加入磁珠以及結合液，促進血漿中DNA于磁珠表面吸附，吸附完成后使用磁體將磁珠從血漿中吸出，并使用洗液對磁珠進行多次清洗，最后將清洗所得溶液使用洗脫液進行DNA洗脫，將上清液吸出，上清液中所含物質即為血漿中DNA。將上清液進行化學修飾，之后使用實時熒光定量MSP進行擴增，即TaqMan探針，檢測APC基因甲基化，將結果設定為陽性以及陰性兩種。

3.統(tǒng)計學方法:所有數(shù)據(jù)均使用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學分析，對于計量資料用(±s)表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用X2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結果

研究組肺癌患者、對照組一肺部良性腫瘤患者以及對照組二健康人群血漿中APC基因甲基化檢測結果對比分析，具體情況見表1。

表1 三組人群血漿中APC基因甲基化檢測結果對比分析

由表一可知，研究組肺癌患者體內血漿中APC基因甲基化陽性率為100.00%，明顯高于對照組一的3.23%以及對照組二的0.00%，且P＜0.05，三組人群對比結果具有統(tǒng)計學意義;研究組肺癌患者體內血漿中APC基因甲基化陰性率為0.00%，明顯低于對照組的96.77%以及對照組二的100.00%，且P＜0.05，三組人群對比結果具有統(tǒng)計學意義。

討論

APC基因，全稱為adenomatous polyposis coli基因［1］，近年來隨著醫(yī)學水平的提高，該基因的染色體定位、蛋白質結構以及基因序列均已經明確［2］。研究發(fā)現(xiàn)［3］肺癌患者身體組織中APC基因的啟動子區(qū)有高甲基化現(xiàn)象發(fā)生，因此能夠為臨床診斷肺癌疾病提供可靠的依據(jù)，但肺癌患者血漿中的DNA含量有所增高，且此類DNA的主要來源是患者自身的腫瘤細胞［4］，因此肺癌患者血漿中若能夠檢測出APC基因發(fā)生甲基化改變，將更有助于早期肺癌患者的病情診斷。

本次研究所選用的肺癌患者均經CT臨床醫(yī)學檢查可知其體內含有肺部實體瘤，且肺部實體瘤直徑均小于2厘米，患者均進行病理活檢，確診為肺癌患者，因此本文中研究組所有肺癌患者均為早期。經本文研究可知，早期肺癌患者體內血漿中APC基因甲基化陽性率與肺部良性腫瘤患者及健康人群檢測結果具有明顯差異，因此可對患者進行血漿中APC基因甲基化檢測，根據(jù)患者檢測結果對其病情進行判斷，即血漿中APC基因甲基化檢測結果為陽性，則綜合患者臨床醫(yī)學影像檢查結果以及實驗室檢查結果可判斷其為肺癌疾病。

綜上所述，對患者進行血漿中APC基因甲基化檢測，能夠根據(jù)患者檢測結果，較為準確的判斷患者是否患有肺癌疾病，使患者及時進行治療，并制定具有針對性的治療方案，從而提高患者治療效果，提高患者生活質量與生存率。

1 Gmnau C，Clark SJ，Rosenthal A.Bisulfite genomic sequencing:systematic Investigation of critical experimental parameters［J］.Nucleic Acids Res，2011，29(13):65.

2 潘世揚，張寄南，魏源華，等.抑癌基因APC啟動子甲基化檢測及其在肺癌診斷中的應用［J］.臨床檢驗雜志，2004，22(6):415－418.

3 張麗霞，潘世揚，謝而付，等.不同甲基化檢測技術對模擬肺癌患者血漿中APC基因甲基化的檢測［J］.臨床檢驗雜志，2007，25(3):199－201.

4 Leon SA，Shapiro B，Sklaroff DM，et a1.Free DNA in the serum of cancer patients and the effect of therapy［J］.Cancer Res，1977，37(3):646－650.