阿莫西林與他唑巴坦聯用對400株致病菌株的體外抗菌活性研究

張 亮 余嘉銳 葉 琳

（中山大學孫逸仙紀念醫院，廣東 廣州 510000）

醫藥科技的進步帶來了抗菌藥物的發展。他唑巴坦作為β–內酰胺酶抑制劑中的一種，其作用也很明顯，但如果與阿莫西林聯用又會是怎樣的一種效果呢？在醫學界這是一個值得去探討和研究的問題。所以，本文將采用二倍稀釋法檢測阿莫西林和他唑巴坦在調制成一定比例的情況下，觀察400株致病菌株的體外抗菌活性和試驗菌生長情況，然后計算藥物的最低抑菌濃度，即MIC[1-2]。最后再分析阿莫西林與他唑巴坦聯用，何種比例效果最佳，以及對單用阿莫西林和兩者聯用后的體外抗菌活性進行比較。以下將對本研究進行實驗，現報道如下。

1 實驗必備材料和實驗具體步驟

1.1 實驗必備材料

1.1.1 實驗必備藥品

阿莫西林，批號是02–284，由華北制藥集團提供，其效價為95.2%；他唑巴坦，批號是01010，由珠海聯邦制藥廠提供，其效價為98.3%。

1.1.2 實驗必備菌株

本次實驗采用菌株數目一共為400株，全部來自于某院的臨床標本，并且已經由該院細菌室主任協助分離并對其鑒定。在這400株菌株里，耐甲氧西林金葡菌，英文簡稱為MRSA；耐甲氧西林表皮葡萄球菌，為MRSE；大腸埃希菌，為E.coli以及腸球菌均有56株；而甲氧西林敏感的金葡菌，即MSSA只有32株。其中，耐甲氧西林金葡菌（MRSA）全部產酶，耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）有52株產酶，甲氧西林敏感的金葡菌（MSSA）有22株產酶。在本實驗中，質控菌株是由某院生物制品檢定科提供的，而金葡菌，即ATCC26112有1株；大腸埃希氏菌，即ATCC44113同樣也是1株。

1.1.3 實驗必備培養基

是由法國某公司提供的批號為745301501的一種瓊脂，具體名稱叫做Mueller–Hinton瓊脂，簡稱是M–H瓊脂。

1.1.4 實驗測量儀器

采用的是由北京醫科大學昆侖藥物發展研究所生產的微量多點接種儀，來作為實驗測量儀器。

1.2 實驗具體步驟

1.2.1 M–H瓊脂培養基的準備方法

首先用天平稱量M–H粉末40g，再把稱好的粉末放到大椎形的瓶子里，并且倒進1000mL無菌蒸餾水，然后將該錐形瓶放在120℃溫度下進行高壓滅菌，切記在15min之后使用。

1.2.2 實驗菌懸液的制作方式

首先要從富含新鮮菌種的地方沾取少量的菌苔，再把它放在M–H瓊脂培養基中接種，隨后使用36℃的溫度將其培養大概20個小時，在20h后就會形成新的培養物，那么就用這新的培養物制成菌懸液。

1.2.3 實驗產酶菌的鑒定方法：對產酶菌進行鑒定的話，大多情況下是采用Nitrocefin試劑。首先，微量進樣器和Nitrocefin試劑是必須要準備妥當的，因為要使用該種進樣器來吸取大約10μL的Nitrocefin試劑，再將該試劑慢慢地滴在新鮮的菌苔上，將其靜至不動大概為1個小時，在1個小時之后，如果在加入Nitrocefin試劑后的菌苔顏色從黃色變成了紅色，那么就可以充分說明這個株菌是產酶菌；反之，如果不變顏色，則不是產酶菌。

1.2.4 最低抑菌濃度（MIC）的測定方式

實驗中首先需要準備好濃度不相同、并且是呈倍比的供試液，分別為10mL，將這些10mL的供試液逐個按順序分別加到試管中，然后將融化后的M–H瓊脂各加入90mL容量，在加入M–H瓊脂之后，最立刻要做的事情就是把平板傾注，實驗中最終將培養基抗生素的濃度值定下來，分別為64、32、16、8、4、2、1、0.5mg/L這幾個濃度值；另外，需要有一個參照物進行對比，所以實驗就需要準備一個只有培養基的平板，該平板需放置36℃溫箱1.5個小時左右。在這些程序都完成之后，就需要利用微量多點接種儀這個儀器，將各種菌懸液分別放在不同濃度抗生素的瓊脂表面，讓其進行接種，且保持在36℃溫箱中培養約20個小時，在20個小時之后觀察結果，我們需要觀察的是各個平板的接種部位是否存在菌生長。最低抑菌濃度，也就是MIC，它是試驗菌在不生長的情況下的最低抗生素濃度，我們可以通過實驗中得到的這些數據，然后計算出MIC、MIC、MIC、MIC 各個值。

2 實驗結果

2.1 阿莫西林一種藥品單用與阿莫西林、他唑巴坦兩種藥品聯用，對兩者體外抗菌效果進行比較。通過對阿莫西林單用與阿莫西林、他唑巴坦聯用的體外抗菌結果比較，我們可以發現阿莫西林和他唑巴坦聯用比阿莫西林單用的體外抗菌效果更好。見表1。

在醫學界，對于阿莫西林/他唑巴坦的比例調制問題，何為最佳，并不很明確。鑒此，本文就重在研究2個比例（為4∶1和2∶1比例），在確定研究比例的前提下，我們將進行這兩種比例的體外抗菌實驗測定，最終我們的實驗結果，可以明確而清晰地表明阿莫西林與他唑巴坦聯用的最佳比例為2∶1。請見表2。阿莫西林/他唑巴坦（2∶1）與阿莫西林/他唑巴坦（4∶1）。

表1 阿莫西林與阿莫西林/他唑巴坦體外抑菌情況比較

表2 體外抑菌情況比較

3 實驗結論

通過整個實驗，以及根據兩張表格的直接數據體現，我們最后可以得出以下結論：阿莫西林與他唑巴坦聯用比阿莫西林單用的體外抗菌效果更好；阿莫西林與他唑巴坦以2∶1的比例調制使用比阿莫西林單用和阿莫西林/他唑巴坦4∶1比例聯用對體外抗菌效果更好。

本文對阿莫西林與他唑巴坦聯用對400株致病菌株的體外抗菌活性研究是一項很大的成功，這將對醫學的發展有重要意義。

[1]趙耕云,李耘,李家泰.哌拉西林及三唑巴坦對β-內酰胺酶穩定性研究[J].中國抗生素雜志,2000,1(28):28.

[2]李家泰.臨床藥理學[M].2版.北京:人民衛生出版社,1998:586.