冷凍原腸中腸出血性大腸桿菌O157∶H7的研究＊

仇保豐，蔡寶亮，宋鴻雁，劉文斌，高逢結，顧炳泉，李 建

冷凍原腸中腸出血性大腸桿菌O157∶H7的研究＊

仇保豐1，蔡寶亮2，宋鴻雁3，劉文斌1，高逢結1，顧炳泉1，李 建1

目的檢測分析進出境冷凍原腸攜帶腸出血性大腸桿菌O157∶H7的情況。方法對2010－2011年進境或國產的35份冷凍原腸樣品（包括19份冷凍羊原腸和16份冷凍豬原腸）進行檢測，根據細菌的培養特性、生化鑒定和血清學鑒定，同時設立標準菌株作為對照。結果2份原腸樣品檢出腸出血性大腸桿菌O157∶H7，檢出率為5．71%。結論進境和國產原腸均有可能攜帶腸出血性大腸桿菌O157∶H7，應該加強監測。

冷凍原腸；腸出血性大腸桿菌O157∶H7；檢測

腸衣（Casing）是家畜新鮮腸管經加工處理，除去腸內外各種不需要的組織后所剩下的一層堅韌、半透明的薄膜，它是加工灌腸類食品的重要原料之一。我國是世界上主要腸衣生產國，同時也是腸衣來料和進料加工大國。腸衣產業為解決我國出口創匯、農民增收和增加就業等發揮很大作用，但是，腸衣也容易攜帶多種病原微生物，特別是去糞、清洗后未經刮制的原腸（Intestine），更容易攜帶和傳播病原體［1－2］。這一方面會對公共衛生安全和畜牧業發展造成威脅，另一方面也會給我國腸衣出口行業帶來沖擊，尤其是近年來隨著人們對食品安全的高度重視和國際貿易技術壁壘的影響，國內外對食品微生物的檢測要求也日益嚴格，我國腸衣行業有可能會遭受嚴峻考驗。

腸出血性大腸桿菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157∶H7是一種新發現的腸道致病菌，它對人類健康的危害已引起世界各國的普遍關注。我國每年生產和引進大量動物原腸，存在著攜帶和傳播EHEC O157∶H7的風險。但是，目前國內外對原腸攜帶EHEC O157∶H7的研究很少。對2010－2011年進出境的19份冷凍羊原腸和16份冷凍豬原腸攜帶EHEC O157∶H7的情況進行檢查，旨在獲得動物原腸攜帶EHEC O157∶H7的第一手資料。

1 材料與方法

1．1 材料 腸出血性大腸桿菌O157∶H7標準菌株（ATCC35150）由青島綠谷有限公司購買；m（EC）n、SMAC、LST－MUG肉湯、O157菌成套生化鑒定管（用于大腸桿菌O157∶H7／NM生化鑒定）均購自青島高科園海博生物技術有限公司；腸道埃希氏菌O157∶H7標準血清購自寧波天潤生物藥業有限公司。

1．2 腸衣樣品的采集 35份進境或國產冷凍原腸樣品，為2010－2011年在南通腸衣生產、加工企業采集，其中包括19份冷凍羊原腸和16份冷凍豬原腸。樣品采集方法如下：在冷凍原腸解凍后，迅速從包裝容器不同位置隨機選擇盡可能多的腸衣，分別用高壓滅菌處理過的剪刀和鑷子無菌采集約5g樣品放入無菌的均質袋中，直到每份樣品的總量不少于1 000 g，密封均質袋口放入未經使用的取樣袋內，扎經取樣袋再放入盛有冰袋的保溫盒內，密封后盡快送往實驗室并于－18℃凍存。

1．3 樣品的處理及細菌的培養和純化 腸衣樣品采集后盡快進行EHEC O157∶H7增菌培養、選擇培養和純化培養：先將樣品由冰箱拿出后置室溫解凍，在無菌操作臺內打開包裝袋，用滅菌處理過的剪刀和鑷子充分剪碎、混勻后，分別按照文獻［3］的方法對冷凍原腸中的EHEC O157∶H7進行分離和純化，同時設立標準菌株作為對照。

1．4 原腸攜帶大腸桿菌的鑒定 將1．3分離、純化獲得的EHEC O157∶H7可疑菌落分別按照文獻［3］的方法，用O157菌成套生化鑒定管和腸道埃希氏菌O157∶H7標準血清進行生化和血清學鑒定，根據鑒定結果做出判定。

2 結 果

2．1 EHEC O157∶H7的分離 35份冷凍原腸樣品分別按照文獻［3］的方法對其進行增菌培養、選擇培養和純化培養。對于不發酵山梨醇并在MUGLST發酵管內出現產氣的菌落，用接種環取少量菌液在普通瓊脂平板上劃線培養，然后挑取單菌落接種TSI，根據培養結果將EHEC O157∶H7可疑細菌進行進一步的鑒定。

2．2 EHEC O157∶H7的鑒定 對35份樣品中分離到的EHEC O157∶H7可疑細菌用O157菌成套生化鑒定管和腸道埃希氏菌O157∶H7標準血清進行生化試驗和玻板凝集試驗，有2份冷凍原腸樣品的EHEC O157∶H7檢測結果呈現陽性，陽性率為5．71%。

3 討 論

目前，歐盟和加拿大等國家和地區對我國出口腸衣的獸藥殘留制定了嚴苛的限量指標，并要求做到每批檢測，極大地增加了出口的難度和負擔。但是，國外對腸衣攜帶致病菌的問題卻不夠重視。究其原因，我國出口的絕大多數腸衣是已經加工為成品的鹽漬腸衣，而國外的大量研究表明，絕大多數細菌在鹽漬腸衣的這種高滲環境下經過一段時間（約30d）就會被殺滅［4－6］。再加之出口到國外的腸衣除了要經過長時間的海上運輸外，到達國外還需要再次加工和蒸煮才供食用，因此國外對腸衣攜帶致病性微生物的問題并不苛求。

我國作為腸衣出口主要國家，一方面，在國內屠宰場和腸衣企業間大批量、遠距離的運輸來自全國各地的冷凍腸衣，存在著傳播動物疫病和危害公共衛生安全的巨大隱患。另一方面，因為勞動力成本低廉，我國還是世界上重要的腸衣來料和進料加工大國，每年有大量的來自不同地區和國家的冷凍腸衣涌入國內，很容易將國外的動物疫病帶入國內，給我國畜牧養殖業和腸衣從業人員的健康帶來威脅。因此，對冷凍原腸攜帶微生物的情況進行系統、全面的檢測控制已經非常迫切。劉增再等對湖南某腸衣出口企業的40個鹽漬豬腸衣樣品攜帶豬瘟病毒進行檢測，CSFV陽性率為7．5%［7］。對于冷凍原腸攜帶致病菌的研究，國內目前尚未見報道。本研究選擇19份冷凍羊腸衣和16份冷凍豬腸衣作為檢測樣品，結果發現2份有致病菌，EHEC O157∶H7檢出率為5．71%。

［1］Chawla SP，Chander R，Sharma A．Safe and shelf－stable natural casing using hurdle technology［J］．Food Control，2006，17：127－131．

［2］Gabis DA，Silliker JH．Salmonella in natural animal casings［J］．Appl Environ Microbiol，1974，27（1）：66－71．

［3］SN／T 0973－2000進出口肉及肉制品中腸出血性大腸桿菌O157∶H7檢驗方法［S］．北京：中國標準出版社，2001．

［4］Wijnker JJ，Koop G，Lipman LJA．Antimicrobial properties of salt（NaCl）used for the preservation of natural casings［J］．Food Microbiol，2006，23：657－662．

［5］Benli H，Hafley BS，Keeton JT，et al．Biomechanical and microbiological changes in natural hog casings treated with ozone［J］．Meat Sci，2008，79：155－162．

［6］Jo C，Lee JW，Cho KH，et al．Quality properties of sausage made with gamma irradiated natural casing from intestine of pork or lamb［J］．Radiat Phys Chem，2002，63：365－367．

［7］劉增再，朱中武，唐連飛，等．鹽漬腸衣豬瘟病毒實驗室檢測的相關性研究［J］．湖南農業大學學報（自然科學版），2005，31（6）：644－647．

Investigation on eEnterohemorrhagic Escherichia coli O157∶H7 in frozen intestine

QIU Bao－feng1，CAI Bao－liang2，SONG Hong－yan3，LIU Wen－bin1，GAO Feng－jie1，GU Bing－quan1，LI Jian1
（1．Nantong Entry－Exit Inspection and Quarantine Bureau，Nantong 226018，China；2．Jiangsu Entry－Exit Inspection and Quarantine Bureau，Nanjing 210001，China；3．Laboratory Animal Center of Nantong University，Nantong 226001，China）

To study the enterohemorrhagic Escherichia coli（EHEC）O157∶H7 in entry－exit frozen intestines，35 intestine samples，which included 19 samples derived from lambs／sheep and 16 samples derived from hogs，were collected in imported or domestic products during 2010－2011．Based on bacterial properties，biochemical and serological confirmation，and a EHEC O157∶H7 reference strain was prepared as well，it shows that 2 frozen intestine samples were contaminated with EHEC O157∶H7，positive rate was 5．71%．Imported or domestic intestines might be contaminated with EHEC O157∶H7，the relevant supervision and study should be strengthened．

frozen intestines；EHEC O157∶H7；detection

R378．2

A

1002－2694（2012）02－0191－02

＊江蘇檢驗檢疫局科研項目（No．2010KJ35）資助

仇保豐，Email：baofengqiu2008＠yahoo．cn

1．南通出入境檢驗檢疫局，南通 226018；2．江蘇出入境檢驗檢疫局，南京 210001；3．南通大學實驗動物中心，南通 226001

2011－09－18；

2011－10－23