淺談ELISA試劑使用前的確認

顏秀娟 邱昌文 袁 婷 林丹英

（南寧中心血站，廣西 南寧 530003）

實驗室對經血感染性指標進行有效檢測，是確保臨床輸血安全的重要手段。酶聯免疫檢測（ELISA）是目前我國采供血機構用于獻血者血液病毒篩查的法定方法[1]。因此，ELISA試劑得到有效控制，是保證實驗室測檢結果準確的關鍵環節。而檢測試劑有效性的確認是一項不可忽視的環節，在試劑使用前、中、后期都要對試劑的靈敏度、特異性進行嚴格監控，確保檢測試劑的有效性[2]。現將我們對ELISA試劑在使用前進行確認的一些粗淺認識介紹如下。

1 試劑確認的涵義理解

“確認”的定義ISO 9001：2000標準3.8.5條將“確認”定義為：“通過提供客觀證據對特定的預期使用或應用要求已得到滿足的認定”[3]，在ISO/IEC17025：2005中“確認”的定義為“通過檢查并提供客觀證據，以證實某一特定預期用途的特定要求得到滿足”[4]，顯然兩者對“確認”的表述是一致的。由此可見，“確認”的目的是檢查預期使用要求或應用要求是否得到滿足，“確認”的范圍是針對特定的預期用途的特定要求，“確認”的要求是按照一定的程序和方法，通過試驗、核查認可、驗證等檢查方式，收集和提供客觀證據，以判定其最終是否符合預期要求或應用要求。ELISA試劑盒熱穩定性差，遇熱后靈敏度、特異性都將降低[5]。如果試劑盒在長途運輸過程中保證不了規定的溫度要求，其質量將會受到影響。為了避免試劑盒和質控品在運輸過程中可能發生變質、泄露給檢驗工作帶來的影響，以及對新批號的試劑和質控品在本實驗室的“表現”進行預判，確定試劑批間差異和可接受性，應對新進貨的試劑盒和質控品進行確認[6]。另外，我國對體外免疫診斷試劑的注冊、批準、生產、監控等環節都有嚴格控制。用于血液篩查的檢測試劑屬于藥品和三類醫療器械監督管理范疇，質量必須符合《中華人民共和國藥品管理法》和《中華人民共和國醫療器械監督管理條例》的有關規定[7]。《血站實驗室質量管理規范》中明確規定：每批試劑投入使用前應進行確認[8]。因此，試劑確認的目的是對新的或者有變化的ELISA試劑的系統檢查與評價進行策劃和控制，保證其在正式使用前符合預期的使用要求。

2 試劑確認依據

ELISA血液檢測試劑的確認方法和驗收標準，依據《中國輸血技術操作規程（血站部分）》《中國生物制品規程》、《ELISA試劑盒操作說明書》和《參考品使用說明書》。

3 制定試劑確認計劃

按照本站確認管理程序文件的要求，由質量管理科制定確認計劃，確認計劃包括：確認目的、確認項目、確認原因、確認時間、確認部門、確認方法和確認標準。質量管理科將確認計劃發至相關科室后，由相關科室組織參與確認的人員，以便做好確認前的準備工作。

4 試劑確認的內容和步驟

ELISA試劑盒的確認包括查驗、質量抽檢和資質驗證3部分內容。原則上應查驗合格、入待檢庫后，才進行質量抽檢活動。ELISA試劑盒的確認按到貨批次執行，即不同時間進貨的同供方、同一批號的試劑每次均需要進行確認。對于首次抽檢不合格的項目應加倍抽樣進行復檢。

4.1 試劑查驗和入庫

試劑采購回血站后，由設備科首先對每批試劑進行初步查驗確認。查驗的內容及標準：應首先確認新到貨的試劑是經過對試劑生產商的評估批準采用的試劑；然后是檢查試劑包裝：必須按照規定貼有批批檢防偽標簽、有使用說明書，在包裝上注明有效期、品名、規格、批準文號、生產日期、產品批號、儲存溫度，并附有質量合格的標志，如供方資質（供方已向本站提供了有效的企業法人營業執照副本、藥品注冊證書、藥品生產或經營許可證、進口藥品注冊證等證件復印件）、中標情況（供方已通過了本站的物料供方評審，并列入了“合格供方清單”）、試劑資質（有說明書和批批檢報告）、規格型號（與訂購規格相符）、采購數量（與訂購數量相符）、采購價格（不高于政府集中采購招標時中標價格）、試劑盒外觀（外觀完整，無破損，無變形，無滲漏，無污染，每盒都貼有中國藥品與生物制品檢定所的激光防偽標簽）、有效期限（可使用3個月以上）、包裝情況（有專用箱進行外包裝，并有封口膠封箱）、運輸條件（運輸過程符合試劑盒保存要求）。查驗合格后將試劑放入標識“待檢”區域內，并在庫存卡詳細記錄實際進貨日期、數量、批號、有效期及現有庫存量并簽字。試劑進貨確認完畢，庫存管理員填寫“試劑送檢單”，連同“物料查驗入庫單”和隨機抽取的試劑盒樣品及相關資料（試劑的批批檢證書和關鍵原輔材料的出廠檢定合格證書）一起遞交試劑確認部門（由質量管理科負責）。

4.2 試劑質量抽檢

質量管理科委托檢驗科協助試劑質量確認檢測，并對檢測過程進行現場監控。試劑確認時，應包括試劑盒陰性和陽性對照品，弱陽性室內質控品，任意挑選的常規檢驗標本。應在與常規檢驗相同的環境和儀器狀態下，按照試劑盒說明書進行操作。判斷標準包括試劑的陰性和陽性對照品必須符合試劑盒要求；低值質控品（濃度以該試劑盒臨界值（cut off值）的2～3倍為宜）必須達到cut off值，并與試劑批批檢報告數據進行比較，及與以往實驗室檢測質控數據進行回顧性比較，差異在規定范圍內；常規標本試驗結果未出現本底異常。HBsAg檢測試劑盒國家規定最低檢出限為0.5ng/ml，因此需用該濃度質控品進行試劑確認[9]。具體方法如下：

①試劑組份外觀檢查：于光線明亮處以肉眼進行檢查，外包裝嚴密、無漏氣；酶標板潔凈無異物、無缺損；液體組份無沉淀或絮狀物；凍干組份呈白色或棕色疏松體。②試劑盒對照品檢測：按照試劑使用說明書要求檢測試劑盒內的陽性對照品、陰性對照品，依據試劑盒要求進行檢測結果判定，試劑盒的陽性對照品、陰性對照品的檢測結果符合試劑說明書規定的要求。③陽性符合率檢測：測定已知陽性標本8份，每份1孔，陽性符合率應為8/8。④陰性符合率檢測：測定已知陰性標本16份，每份1孔，，陰性符合率應大于14/16，且無花板現象。⑤批內重復性檢測：對同一弱陽性質控血清檢測16孔，計算S/CO值的平均值內x`、及標準差S，變異系數（CV=S/X×100%）值應小于15%。⑥敏感度檢測：最低程度應能檢出血站所選擇的衛生部臨檢中心提供的臨界質控血清，酶免試劑盒的OD/CO值≥1.0。

4.3 試劑資質驗證

質量管理科核對送檢的酶聯免疫試劑盒生產批號與《材料質控單》、《中國食品藥品檢定研究院檢驗報告》或廠家檢驗報告是否一致；送檢產品是否在有效期內，并進行資質驗證。資質驗證主要是進一步核查酶聯免疫試劑盒的生產廠家是否具有相應的資質，所具有的證件是否在有效期內（進口試劑必須具有國務院藥品監督管理部門核發的《進口藥品注冊證》），并根據以上檢查結果填寫“檢驗質量檢查報告”。

5 出據確認報告

質量確認檢測完成后，質量管理科收集、整理、分析和解析ELISA試劑盒的查驗結果和質量抽檢結果，并與驗收標準進行比對分析，做出是否通過驗收的結論，編制“ELISA試劑盒確認報告”，附相關記錄和說明書，報質量主管審批。質量主管或其受權人負責對確認實施過程、確認結果和結論進行全面審核，并做出確認是否完畢、是否符合既定驗收標準、是否允許投入使用的決定。

6 試劑確認后的處置

試劑確認合格后，發出放行報告并在試劑盒上進行標識，放置于標識“合格區”位置，準許領用。對于質量抽檢不合格的試劑，在外包裝箱/盒上粘貼“不合格物料標識，存放于“不合格區”，防止誤用。對于最終的確認結論為不合格的試劑，質量管理科須書面反饋給設備科，并報告質量主管審批，由采購負責人與供應商聯系進行退換處理。

7 結 語

試劑確認的目的是對新的或者有變化的ELISA試劑的系統檢查與評價進行策劃和控制，保證其在正式使用前符合預期的使用要求。只有使用符合質量要求的檢測試劑才能確保血液篩查試驗的精密度和準確度，是確保血液質量的有力保障。

[1]中華人民共和國.GB 18467-2001,獻血者健康檢查要求[S].2001.

[2]羅建勇.血站開展全面質量管理的體會[J].中國輸血雜志,2006,6(19):509-510.

[3]國際標準化組織.ISO 9001:2000質量管理體系要求[S].2000.

[4]國際標準化組織和國際電工委員會.ISO/IEC17025:2005檢測和校準實驗室能力的通用要求[S].2005.

[5]徐志峰,李惠,王淑艷,等.ELISA檢測影響因素分析[J].中國誤診學雜志,2001,1(4):584-585.

[6]江偉梅,葛紅衛,郭永建.淺談采供血機構實驗室檢驗試劑的管理[J].中國輸血雜志,2006,19(4):343-345.

[7]張文周.中華人民共和國藥品管理法實施條例[M].北京:人民出版社,2002.

[8]中華人民共和國衛生部.血站實驗室質量管理規范[S].2006.

[9]呂進明.淺談體外診斷試劑的管理[J].醫學動物防制,2004,20(6):338.