科技進展

在PRRSV非結構蛋白2（nsp2）的非必需區插入的標記疫苗的外源基因穩定表達

豬繁殖與呼吸綜合征病毒 (PRRSV)非結構蛋白2(nsp2)在PRRSV各株顯示高度的多樣性和可變性，nsp2區域中間的一些序列對于病毒的復制不是必要的。最近的研究試圖在nsp2的不重要的區域插入外源基因，然而插入外源基因在體外不能被重組病毒穩定表達。

本研究在減毒疫苗毒株HuN4-F112（疫苗株HuN4-F112是高致病性PRRSV HuN4株的減毒株）的nsp2區域刪除75個核苷酸 （25個氨基酸），然后插入一個編碼新城疫病毒（NDV）核蛋白 （NP）的B細胞優勢表位基因 （49個氨基酸），構建了一個感染性的cDNA克隆。

全長cDNA感染性克隆在體外感染細胞，拯救出重組病毒 （rHuN4-F112-Δ508-532），刪除 75核苷酸和插入 NDV NP基因并沒有影響病毒的復制。它們和改造前的病毒具有相似的生長動力學特點。

重組病毒在細胞上傳20多代，通過免疫熒光分析 (IFA)和染色體基因組測序，可知插入的基因穩定表達。

為了評價重組病毒作為疫苗的免疫效果，我們給仔豬免疫重組病毒并且用致死劑量的高致病性PRRSV攻毒。免疫仔豬產生抗NDV NP和PRRSV的特異性抗體，沒有產生對抗刪除nsp2 25aa的抗體。攻毒后，所有的免疫仔豬沒有出現臨床癥狀或死亡，而對照組的豬只在攻毒后10天全部死亡。

這個試驗的結果顯示重組PRRSV可作為標記的備選疫苗。

譯自：Xu YZ，Zhou YJ，Zhang SR，et al.Stable expression of foreign gene in nonessential region of nonstructural protein 2 (nsp2) of porcine reproductive and respiratory syndrome virus：Applications for marker vaccine design.Vet Microbiol，2012 Mar 30.[Epub ahead of print]

胸膜肺炎急性發作時放線桿菌的轉錄概況

細菌在其自然宿主內的基因表達譜可以洞察宿主-病原體相互作用和細菌感染的分子決定因素。本研究檢測了胸膜肺炎急性發作時豬胸膜肺炎放線桿菌的轉錄概況。

我們對比分析了25只患病豬肺臟損傷組織分離的胸膜肺炎放線桿菌的轉錄概況 （樣品在攻毒后6、12、24小時采樣）。攻毒6個小時內，可在豬的肺臟觀察到局灶性纖維蛋白出血性病變，這表明胸膜肺炎放線桿菌已設法在宿主體內成功地安頓下來。

我們識別了237個不同的調控基因，這些基因編碼的蛋白與細菌在宿主體內寄生和生存有關。這些蛋白質由許多主導不同方面能量代謝的基因控制，特別是厭氧呼吸及碳水化合物的代謝。顯示早期感染時，細菌外膜和蛋白質翻譯后加工的改變也是重要的。結果表明，胸膜肺炎放線桿菌利用各種戰略增加其適應性，如應用鈉泵作為一種替代方法獲得能量。此外，轉錄數據提供了胸膜肺炎放線桿菌逃避宿主諸多免疫因素和在惡劣環境中 （在宿主巨噬細胞內）生存的潛在線索。它能在巨噬細胞內生存可能與脲酶活性，動員各種應激反應相關，細胞表面的唾液酸使其逃避宿主的防御系統。

這些數據強調了胸膜肺炎放線桿菌隨著宿主狀態進行代謝調整的重要性，幫助人們深入了解胸膜肺炎放線桿菌高效入侵和在急性發病時定植和留存的機理。

譯自：Klitgaard K，Friis C，Jensen TK，et al.Transcriptional Portrait of Actinobacillus pleuropneumoniae during Acute Disease-Potential Strategies for Survival and Persistence in the Host.PLoS One，2012 Apr 17.[Epub ahead of print]

明確人和豬的鞭蟲基因的特殊性

鞭蟲 （毛首線蟲）能導致世界范圍內約600百萬人得病，大多在發展中國家。鞭蟲也感染其他動物，包括豬 (T.suis)，狗 (T.vulpis)和非人靈長類動物，使被感染動物和人患相似的鞭蟲病。雖然鞭蟲物種一直被認為是具有宿主特異性的，但這一觀點具有相當大的爭議，多年來，T.trichiura和T.suis是否屬同一種是有爭議的。

這里，我們將人源和豬源鞭蟲整個線粒體基因組進行對比，通過系統發生分析，驗證了這一假說——人和豬的鞭蟲是不同種的。這一結果與先前比較核糖體DNA得出的結論一致。

未來將進行大規模的研究工作證實T.trichiura在豬及T.suis在人中是否存在。

譯自：Liu GH，Gasser RB，Su A，et al.Clear Genetic Distinctiveness between Human-and Pig-Derived Trichuris Based on Analyses of Mitochondrial Datasets.PLoS Negl Trop Dis.2012 Feb 21.[Epub ahead of print]

不同歐洲國家戊型肝炎病毒在家豬中的流行和傳播

戊型肝炎病毒 （HEV）基因型3和4型能導致人的肝病，并且以豬為主要的儲存器。世界范圍內對豬HEV的研究很多，但是缺乏關于豬群中HEV感染動力學方面的資料。

在六個不同的歐洲國家研究商品豬養殖場HEV傳播動力學。收集的數據顯示HEV在斷奶仔豬流行率在8%～30%。HEV在架子豬流行率在20%～44%之間。育肥豬的流行率在8%～73%之間。母豬流行率在所有這六個歐洲國家相似。只在西班牙和捷克共和國的被檢公豬糞中便檢測到HEV，流行率分別為4.3%和3.5%。

所收集的數據使用最近開發的模型進行了分析，估計不同國家的HEV傳播動力學，證明戊型肝炎在豬場流行。

這個研究中所有的樣品運用相同的檢測方法 （實時RTPCR），運用相同的模型 （SIR模型）進行數據分析。本研究描述了歐洲國家戊型肝炎病毒的流行和畜群間傳播動力學（捷克共和國、意大利、葡萄牙、西班牙、荷蘭和英國），證實在豬場HEV從斷奶仔豬到育肥豬的循環傳播。繁殖數的數學定義為R0，所有被研究的歐洲國家R0在同一范圍。

譯自：Berto A，Baker JA，Mesquita JR，et al.Prevalence and transmission of hepatitis E virus in domestic swine populations in different European countries.BMC Res Notes，2012 Apr 25.[Epub ahead of print]

菲律賓豬埃博拉萊斯頓病毒血清流行病學調查

埃博拉病毒在非洲流行，可導致人和非人靈長類動物病毒性出血熱。埃博拉萊斯頓病毒 (REBOV)已引起一些獼猴發病，但未發現其與人類患病有關聯。2008年年底，在菲律賓人們首次在豬體內發現REBOV。

2008年，在菲律賓邦阿西楠省和布拉干省REBOV流行的豬場共采集215份豬血清。運用多個血清診斷系統檢測這些樣品中REBOV的特異性抗體。在非流行地區——打拉共采集了98份豬血清。通過檢測這些樣品，調查REBOV是否在菲律賓的豬群中普遍存在。通過檢測發現感染豬場中70%的豬血清為REBOV抗體陽性，而在檢測打拉采集的血清樣品中未發現陽性。2008年感染豬場的REBOV高流行率顯示豬是REBOV的易感動物。本研究中運用的多種血清學檢測在未來可用于監測菲律賓豬群中的REBOV感染。

譯自：Sayama Y，Demetria C，Saito M，et al.A seroepidemiologic study of Reston ebolavirus in swine in the Philippines.BMC Vet Res，2012 Jun 18.[Epub ahead of print]

益生菌發酵的高濕玉米日糧對斷奶仔豬生長性能和腸道微生物的影響

本文研究了用嗜酸乳桿菌和乳酸片球菌發酵的高濕玉米對斷奶仔豬生長性能和腸道微生物的影響。

270頭剛斷奶的仔豬 （公母各半）以體重和窩為區組，按照隨機區組設計分成3個組 （每個處理5個圈，每圈18頭豬），分別飼喂3種日糧：沒有接種任何微生物的發酵高濕玉米 （對照組）；接種嗜酸乳桿菌發酵的高濕玉米 （LA組）；接種乳酸片球菌發酵的高濕玉米 （PA組）。豬飼喂液體日糧5周。用嗜酸乳桿菌和乳酸片球菌的特異性引物進行定量PCR分析，發現用這兩種菌發酵的高濕玉米中富含這兩種菌。乳酸是發酵過程中產生的主要短鏈脂肪酸 （SCFA）。3種發酵的高濕玉米中乳酸片球菌發酵組乳酸的濃度最高。5周的飼養試驗結果顯示，3種日糧對豬的生長性能無影響。但在試驗的最后3周，與PA組相比，LA組豬的增重較高，糞便中的大腸桿菌的數量較少 （P＜0.05）。對結腸細菌區系進行PCR和DDGE分析發現3個細菌群，而PA組豬只有1個細菌群。另外，LA組和PA組結腸的細菌多樣性和豐度降低 （P＜0.05）。無論飼喂何種日糧嗜酸乳桿菌和乳酸片球菌都很難在豬的腸道定植。這些結果說明飼喂益生菌發酵的高濕玉米可以調節豬的腸道微生物菌群，嗜酸乳桿菌發酵的高濕玉米具有影響豬的生長性能的潛力。

譯自：Wang JQ，Yin FG，Zhu C，et al.Evaluation of probiotic bacteria for their effects on the growth performance and intestinal microbiota of newly-weaned pigs fed fermented highmoisture maize.Livestock Science， 2012， 145(1–3) ：79-86.

釀酒酵母菌對赫曲毒素A和玉米赤霉烯酮的吸收及其與細胞壁厚度的關系

為了研究釀酒酵母菌對赫曲毒素A和玉米赤霉烯酮清除能力及其脫毒能力與菌的細胞壁厚度的關系，研究了釀酒酵母菌在不同毒素濃度對真菌毒素的結合能力以及胃腸道環境對其結合能力的影響。

本研究所用的釀酒酵母菌株均具有清除赫曲毒素A和玉米赤霉烯酮的能力。RC012和RC016菌株對赫曲毒素A的清除率最高，RC009和RC012對玉米赤霉烯酮的清除率最高。用透射電子顯微鏡對酵母的細胞壁進行了超微結構分析，發現酵母的細胞直徑或細胞壁厚度影響其對真菌毒素的清除能力。胃腸道環境中酵母菌與真菌毒素的結合能力增強。

以上結果說明，本研究所檢測的釀酒酵母菌株均能清除赫曲毒素A和玉米赤霉烯酮，其清除作用的原理是物理吸附，胃腸道環境可增強其吸附能力。

譯自：Armando MR，Pizzolitto RP，Dogi CA，et al.Adsorption of ochratoxin A and zearalenone by potential probiotic Saccharomyces cerevisiae strains and its relation with cell wall thickness.Journal of Applied Microbiology,2012,accepted.