新生兒金黃色葡萄球菌敗血癥早期診斷和治療的進展

許國慶

（廣東省惠州市第二婦幼保健院，廣東 惠州 516001）

新生兒敗血癥是一種常見的新生兒感染性疾病，雖然近年來研究發現表皮葡萄球菌的感染率逐年上升，但是金黃色葡萄球感染仍是導致敗血癥發生的最常見原因[1]。該病發病兇險，具有較高病死率，為12%～20.5%[1]。早期診斷及治療是決定疾病轉歸的關鍵因素。現在診斷該疾病的金標準為血液培養，但是該方法檢出率低，檢查時間長，極大影響患兒的治療效果。本組通過進行大量的文獻檢索，對該病診斷及治療方法的新進展進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 文獻來源

本組研究主要采用文獻檢索的方法對相關新進展進行研究。其中所得資料主要來源于CNKI數據庫及PubMed數據庫。所用到的檢索詞主要有金黃色葡萄球菌敗血癥、新生兒、診斷及治療、早期等。所得文獻類型主要有總數、論著及臨床研究等。

1.2 入選標準

本組研究中資料的納入標準主要為：①觀點明確、論據可靠。②內容與新生兒金黃色葡萄球菌敗血癥的診斷及治療新進展密切相關。③以近5年內發表的文獻為主，排除其中相關動物實驗、研究內容不清、論據不明確的文獻。

1.3 質量評估

本組研究中所得資料的篩選由2名專業人士進行，篩選過程中專業人員均仔細閱讀所檢測論文的摘要及全文，嚴格按照納入標準選擇所需文獻，對于其中意見出現分歧者進行討論，得出統一結論。

2 結 果

本組初次檢索所得文獻134篇，經篩選后得到24篇。其中記載的主要診斷方法為通過原位雜交法檢測靜脈血中性粒細胞中金黃色葡萄球菌中的DNA。研究發現該方法在較短時間內即可檢出金黃色葡萄球菌。治療方面仍然沿用藥敏試驗所得結果進行。

3 討 論

新生兒敗血癥是一種常見的新生兒感染性疾病，雖然近年來研究發現表皮葡萄球菌的感染率逐年上升，但是金黃色葡萄球感染仍是導致敗血癥發生的最常見原因。該病發病兇險，具有較高病死率，為12%～20.5%。早期診斷及治療是決定疾病轉歸的關鍵因素。文獻中記載的診斷新方法為過原位雜交法檢測靜脈血中性粒細胞中金黃色葡萄球菌中的DNA，該方法進行檢查時需要的試劑及儀器主要有：Hybrisep試劑盒、Hybfism雜交儀、，BacT/AIERT PF瓶、全自動血培養儀及顯微鏡及上、下游引物和探針。其中所使用的上游引物為[2]：5’-TGTGTAGCGGTGAAATGCG-3’(690～708 bp)，所研究中使用的下游引物的基因序列為為[2]5’-CATCGTTACGGCGTGGAC-3 ’(810～829 bp)，研究中所用探針的基因序列為[2]5’-TCTAATCCTGTT TGATCCCCACG 3’(778～800 bp)。檢查時[3]需要采集2ml患兒的靜脈血，分理出其中的中性粒細胞并進行固定，并通過熱處理方法對DNA進行變性處理。將特異性DNA探針用地高辛進行標記，與固定好的細菌DNA雜交后，與被ALP標記好的抗體相結合結合，通過硝基四氮唑藍/5，溴-4，氯-3，吲哚基磷酸染色，結果為陽性時在細胞中可見及青紫色顆粒，檢測過程中尚需用及熒光定量-PCR法對細菌的DNA進行測定，通過設立對照組進行結果的判定。進行血液感染判定時所需判定標準為：若3次血培養中2次或2次以上結果為陽性或血液熒光定量-PCR檢查結果為陽性時均可判定為金黃色葡萄球菌感染所致敗血癥判若3次血培養中僅有1次檢查結果為陽性或熒光定量-PCR檢查結果為陰性，判斷為其他污染性細菌。

研究表明[4]，近年來分子生物學檢查是目前臨床實踐中微生物檢查診斷中最有價值的一種。文獻記載中所應用的原位雜交法具有許多優點：不需要進行分離培養，可直接由患者的靜脈血中分離出中性粒細胞，可克服血液細菌培養時耗時長的缺點，并且不會因抗生素的應用而受影響。初次之外，部分資料就熒光定量-PCR的優點進行總結主要有[4]：特異性好、靈敏度高等優點，但是該方法對環境及設備條件要求較高，只有在具有一定經濟實力的醫院中才能應用。因此其推廣應用受到一定限制。

[1]Forrest GN,Mehta S,Weekes E,et a1.Impact of rapid in situ hybridization testing on coagulase-negative staphylococci positive blood cultures[J].J Antimicrob Chemother,2006,58(1):154-158.

[2]Flayhart D,Borek AP,Wakefield T,et a1.Comparison of BACTEC PLUS blood culture media to BacT/Alert FA blood culture media for detection of bacterial pathogens in samples containing therapeutic levels of antibiotics[J].J Clin Microbiol,2007,45(3):816-82l.

[3]德全,季海生.BacT/Alert3D血培養分級報告的臨床應用研究[J].中華醫院感染學雜志,2006,16(8):955-957.

[4]王沛,何永貴.金黃色葡萄球菌敗血癥早期診斷方法的建立[J].中華傳染病雜志(臨床論著),2009,27(11):682-684.