科技進(jìn)展

科技進(jìn)展

從美國密歇根州豬分離出抗萬古霉素腸球菌的分子特性

2008年，在美國密歇根州豬分離鑒定了萬古霉素抗藥腸球菌（VRE），這是首次在美國北部家畜中報(bào)道 VRE。在2009年和2010年繼續(xù)抽樣，檢測在密歇根州是否還存在VRE。2009年，共檢測豬糞便樣品和飼料樣品（n=56），集市上收集的豬糞樣品（n=9）和密歇根州農(nóng)場豬糞便樣品（n=18）分離出VRE。2010年，豬糞便樣品是從26個(gè)集市（n=73）和六個(gè)州的9個(gè)商業(yè)豬場采集的（n=18）。分離的VRE用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，限制片段長度多態(tài)性分析，脈沖凝膠電泳（PFGE），S1核酸酶消化及多位點(diǎn)序列分型（MLST）進(jìn)行分子的評估。2009年在州農(nóng)場分離出6個(gè)VRE，另外分離的6個(gè)VRE（占總數(shù)的8.2%）是從5個(gè)集市樣品中分離的。所有12株分離的腸球菌與密歇根州第一次報(bào)道的VRE高度相關(guān)：所有均為具有萬古霉素抗性的糞腸球菌 （VREf），Tn1546（D型）攜帶vanA基因，沒有檢測到插入序列IS1251，插入序列與IS1251、hyl和esp相似。PFGE分析有150～160處PFGE圖形相似（相似度大于80%）。MLST將它們序列分為ST5、ST6或ST185，都屬于一個(gè)克隆復(fù)合體CC5（認(rèn)為該菌株是在歐洲豬群中流行）。這個(gè)研究顯示了VREf是廣泛存在于密歇根州豬群中的。 （王蕾 編譯，譯自 《人獸共患病學(xué)和公共衛(wèi)生》）

譯自 ：Gordoncillo MJ， Donabedian S， Bartlett PC，et al.Isolation and Molecular Characterization of Vancomycin-Resistant Enterococcus faecium from Swine in Michigan， USA.Zoonoses Public Health，2012[Epub ahead of print]

非結(jié)構(gòu)蛋白2在MARC-145細(xì)胞中調(diào)節(jié)繁殖與呼吸綜合征病毒的復(fù)制：影響基因沉默和過度表達(dá)

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是對經(jīng)濟(jì)有重大影響的豬病。有許多疫苗用于控制該病，但是目前還沒有特別成功的疫苗。急需研發(fā)一個(gè)細(xì)胞系，用于大量生產(chǎn)PRRSV疫苗。為了研究Nsp2在MARC-145細(xì)胞中對高致病豬繁殖與呼吸綜合征病毒（HP-PRRSV）復(fù)制的影響，基于RNA干擾理論，構(gòu)建Nsp2基因的短發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA，構(gòu)建了細(xì)胞系表達(dá)HPPRRSV的Nsp2基因。保守的HP-PRRSV Nsp2基因序列用來設(shè)計(jì)短的干擾RNA以及用于檢測干擾RNA對PRRSV在體外細(xì)胞上轉(zhuǎn)錄表達(dá)和復(fù)制的沉默作用。Nsp2、ORF7和βactin mRNA的表達(dá)用半定量PCR檢測。用Nsp2的siRNA感染后減少了在感染PRRSV的MARC-145細(xì)胞中Nsp2的表達(dá)。MARC-145-TJ Nsp2和 MARC-145-TJM Nsp2細(xì)胞系用G418篩選（這些細(xì)胞都感染了HP-PRRSV，正常MARC-145細(xì)胞作為模型，當(dāng)CPE出現(xiàn)后病毒滴度用TCID（50）表示。下調(diào)Nsp2導(dǎo)致明顯的抑制PRRSV復(fù)制，減少了結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)。靶向Nsp2的siRNA下調(diào)Nsp2在MARC-145細(xì)胞中的表達(dá)并且抑制了PRRSV在MARC-145細(xì)胞中的復(fù)制。shRNA載體 S-1和S-2可以有效抑制病毒在MARC-145中的復(fù)制。結(jié)果顯示細(xì)胞表達(dá)高致病性PRRSV TJ株和致弱TJM株Nsp2基因是穩(wěn)定的。PRRSV在上述細(xì)胞中復(fù)制比在MARC-145細(xì)胞中快，尤其在早期階段。這顯示了Nsp2在PRRSV復(fù)制過程中扮演了重要的角色。 （王蕾 編譯，譯自《獸醫(yī)微生物學(xué)》）

譯自： Wang FX， Wen YJ， Yang BC， et al.Role of nonstructural protein 2in the regulation of the replication of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus in MARC-145cells:Effect of gene silencing and over expression.Vet Microbiol， 2012,161（1-2）:58-65.

豬T淋巴細(xì)胞亞群的全基因組相關(guān)研究

淋巴細(xì)胞在被動(dòng)免疫中起到重要的作用，對于免疫具有非常重要的作用。不同個(gè)體外周血中的T淋巴細(xì)胞亞群比例不同已被證明是基因控制的，但是對于基因調(diào)控的機(jī)制還知之甚少。弄清基因調(diào)控的機(jī)理可以幫助人們在豬選育中提高免疫力的遺傳進(jìn)展。

為了確定豬免疫特性相關(guān)的基因組區(qū)域，進(jìn)行了一個(gè)全基因組的相關(guān)研究。本文研究了總共3個(gè)品種675只豬。在21日齡，所有的豬都免疫改良的古典豬瘟活疫苗。血液樣品在20日齡和35日齡時(shí)采集。這兩個(gè)日齡的7個(gè)免疫指標(biāo)：包括CD4+、CD8+、CD4+CD8+、CD4+CD8-、CD4-CD8+、CD4-CD8-的比例以及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞的比率被評估和計(jì)算出來。所有的樣品基因型都為62，163單核苷酸多態(tài)性（SNP）用Illumina公司的porcine SNP 60k BeadChip檢測。基于單點(diǎn)回歸模型，SNPs和每個(gè)免疫性狀關(guān)聯(lián)試驗(yàn)的質(zhì)量控制后選出40833SNPs。用處理全基因組關(guān)聯(lián)分析（GWAS）方法處理多重試驗(yàn)的結(jié)果，10000序列展示全染色體和全基因組關(guān)聯(lián)試驗(yàn)的顯著水平。總的來說，確定61個(gè)SNPs達(dá)到了全染色體關(guān)聯(lián)顯著水平，有3個(gè)SNPs達(dá)到了全基因組關(guān)聯(lián)顯著水平。在先前的研究中 27個(gè)重要的SNPs位于免疫相關(guān)QTL區(qū)域。此外，幾個(gè)重要的SNPs落入已知的免疫相關(guān)基因的區(qū)域，它們中的14個(gè)基因落入已知的T淋巴細(xì)胞相關(guān)的基因區(qū)域。

本研究證明了全基因組相關(guān)研究是揭示潛在基因變異影響T淋巴細(xì)胞亞群的可行方法。本研究為今后繼續(xù)研究豬免疫力因果突變打下了基礎(chǔ)。 （王蕾 編譯，譯自 《英國醫(yī)學(xué)研究理事會(huì)基因組學(xué)》）

譯 自 ： Lu X， Fu WX， Luo YR， Ding XD， et al.Genome-wide association study for T lymphocyte subpopulations in swine.BMC Genomics， 2012， 13（1）:488.

特異性蛋白質(zhì)印跡雜交檢測人和豬的旋毛蟲感染

旋毛蟲病是人畜共患病，是由旋毛蟲屬寄生蟲引起的，該病在全世界廣泛分布。為了確診，需用蛋白質(zhì)印跡雜交檢測驗(yàn)證人和豬血清樣品ELISA檢測陽性樣品，因?yàn)镋LISA檢測結(jié)果有許多假陽性。這個(gè)研究的目的是鑒定在感染人和豬的血清中大量存在的旋毛蟲特異抗原，界定一個(gè)檢測旋毛蟲的特異方法 [通過蛋白質(zhì)印跡雜交（western blots）檢測方法檢測感染宿主血清]，可以將假陽性血清與真陽性血清分開。運(yùn)用排泄/分泌抗原，用蛋白質(zhì)印跡雜交檢測了450份人的血清樣品 [150份確診感染旋毛蟲的人血清和300份沒有感染旋毛蟲但ELISA檢測為陽性的人血清 （假陽性）]。我們還檢測了210份豬血清 [（1）30份血清樣品采自試驗(yàn)室感染旋毛蟲的豬； （2）90份血清樣品從自然感染旋毛蟲的豬上采集；3）90份血清樣品從沒有感染旋毛蟲的豬上采集（人工消化膈肌，ELISA檢測為假陽性）。所有真正陽性的血清（從實(shí)驗(yàn)室感染豬和自然感染豬及確診的感染旋毛蟲的人采集的血清）呈三個(gè)條帶反應(yīng)（條帶大小48～72kD）。該檢測方法敏感性為100%并且可以將旋毛蟲感染的人和豬的血清與健康人和豬的血清分開 （特異性100%）。 （王蕾 編譯， 譯自 《國際寄生蟲學(xué)雜志》）

譯自： Gómez-Morales MA,Ludovisi A,Amati M,Blaga R,et al.A distinctive western blot pattern to recognize Trichinella infections in humans and pigs.Int J Parasitol， 2012[Epub ahead of print]

不同日糧類型對豬后腸道揮發(fā)性硫化物的影響

將豬飼喂小麥-大麥日糧（STD）或者小麥DDGS日糧后，通過體外發(fā)酵的方法測定大腸中揮發(fā)性硫化物（VSC）和硫酸鹽還原比例（SRR）。從盲腸到結(jié)腸末端，硫化氫和SRR產(chǎn)量逐漸升高，而且STD日糧組顯著高于DDGS組。DDGS組中甲硫醇產(chǎn)量顯著提高，二甲基硫醚差異不顯著。通過定量PCR測定大腸中硫酸鹽還原菌以及總體細(xì)菌數(shù)，發(fā)現(xiàn)隨著大腸從前到后，這些菌類顯著提高，但是與日糧類型無關(guān)。可見，豬的大腸中VSC產(chǎn)量在不同的腸段變化幅度很大，日糧不同類型會(huì)影響與之相關(guān)的微生物。 （彭華編譯，譯自 《應(yīng)用微生物學(xué)雜志》）

Poulsen HV,Jensen BB,Finster K,et al.Microbial production of volatile sulphur compounds in the large intestine of pigs fed two different diets.Journal of Applied Microbiology,2012,113（1）:143-154.

DDGS與日糧配制方法對保育豬干物質(zhì)消化率、鈣和磷的沉積與排放的影響

磷是豬飼料中一種較昂貴的原料，過量使用磷會(huì)導(dǎo)致糞中磷排放增加，從而影響環(huán)境，因此，應(yīng)優(yōu)化日糧配方以降低飼料成本并減少糞中磷的排放。本試驗(yàn)分為5個(gè)處理，第1個(gè)處理為對照組，即以總磷為基礎(chǔ)配制小麥-豆粕型日糧；第2～5個(gè)處理以總磷或可用磷為基礎(chǔ)配制含10%或20%DDGS的日糧組。 選用39頭閹公豬（初始體重為10.37±0.37kg），隨機(jī)分配到5個(gè)處理組中，適應(yīng)期為7天，在隨后5天的試驗(yàn)期，收集糞樣和尿樣。與對照組相比，飼喂10%和20%DDGS日糧組干物質(zhì)消化率降低，降低幅度分別為2%和4%（P＜0.01）。各處理組間的采食量與總磷攝入量無顯著差異，但以可用磷為基礎(chǔ)配制的日糧組磷的攝入量顯著低于（P＜0.01）以總磷為基礎(chǔ)配制的日糧組。飼喂DDGS豬的糞中磷含量低于未飼喂組，在DDGS組中，以可用磷為基礎(chǔ)配制的日糧組的磷的排放量顯著低于（P＜0.01）以總磷為基礎(chǔ)配制的日糧組。日糧中DDGS的含量對總磷的排放、沉積以及表觀消化率無影響（P＞0.05）。與對照組相比，飼喂DDGS日糧組鈣的攝入量有降低的趨勢，糞中鈣的含量和沉積增加（P＜0.05）。 與 10%DDGS 日糧組相比， 20%DDGS 日糧組鈣的排放有升高的趨勢（P=0.08），鈣沉積、沉積系數(shù)以及表觀消化率降低（P＜0.05）。無論以總磷還是以有效磷為基礎(chǔ)配制日糧，日糧中DDGS的含量對鈣的攝入、沉積、排放和表觀消化率無影響。綜上所述，增加保育豬日糧中DDGS的含量可降低干物質(zhì)消化率、糞中磷的含量，但對磷的排放、沉積以及消化率無影響。無論以總磷還是以有效磷為基礎(chǔ)配制含DDGS的日糧，對磷的消化率或總排放量無影響，但以有效磷為基礎(chǔ)配制的日糧總磷含量降低。 （彭華編譯，譯自 《動(dòng)物飼料科學(xué)與技術(shù)》）

譯自： Hanson AR,Xu G,Li M,et al.Impact of dried distillers grains with solubles（DDGS）and diet formulation method on dry matter,calcium,and phosphorus retention and excretion in nursery pigs.Animal Feed Science and Technology,2012,172（3–4）:187–193.