趕黃草不同溶劑提取物抑菌活性的初步探討

雷 嬌，肖 茂，朱 銳，夏靜若，楊宗琪

（1.川北醫學院 醫學檢驗學系，四川 南充 637000；2.川北醫學院 臨床醫學系，四川 南充 637000；3.川北醫學院 病原中心，四川 南充 637000）

趕黃草，學名扯根菜，別名水澤蘭、水楊柳等，主要分布在華北、華東、中南及陜西、四川和貴州等地［1，2］。

趕黃草含有沒食子（GaLie acid）、槲皮素（Guercatin）、2，6－二羥基苯乙酮－4－0－β－D－吡喃葡萄糖苷（2，6－dihydroxyacetophenone－4－0－β－D－gLucside）、兩個結構有待進一步確證的化合物及豐富的黃酮類物質［3，4］。中醫學認為，趕黃草性溫味甘，具有祛黃疸、利尿、活血、保肝、清熱等功效，以其為原料提取而成的肝素顆粒廣泛應用于臨床。近幾年來，國內外對趕黃草的化學成分及其對肝病的治療作用研究較多，但對該植物抑菌方面的作用，少有報道。本文分別采用趕黃草的水提取物及乙醇提取物對多種菌進行體外抑菌實驗，擬觀察趕黃草的體外抑菌活性，為臨床提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

趕黃草，采于四川古藺桂花鄉。供試菌種：金黃色葡萄球菌（StaphyLococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia co－Li）、枯草芽孢桿菌（BaciLLus stubtiLis）、綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa）、表皮葡萄球菌（StaphyLococcus epidermidis）、新生隱球菌（Cryptococcus neoformans）、白色念珠菌（MoniLia aLbican），皆由我校微生物實驗室提供。

1.2 方法

1.2.1 趕黃草水提取法［5］

取趕黃草10g，加適量蒸餾水浸泡30min后加熱煮沸，再用文火加熱30min，過濾得第1次水提取物，將濾渣用同樣方法得到第2次、第3次水提取物，合并3次濾液，再濃縮至10mL，得到趕黃草水提取物（即每毫升藥液含1g干藥）。

1.2.2 趕黃草乙醇提取法［6］

取趕黃草10g，共4份，分別置于500mL圓底燒瓶中，然后加適量30%、50%、70%和90%乙醇浸泡30min后，100℃加熱30min后過濾。藥渣再加適量同濃度乙醇溶液，100℃加熱30min后過濾。將兩次濾液合并，用文火濃縮至10mL，得到趕黃草相應濃度乙醇提取物（即每毫升藥液含1g干藥）。

1.2.3 比濁管的配制［7］

取0.5mL濃度為0.048moL／L的BacL2加到99.5mL濃度為0.18moL／L的H2SO4中配制成0.5個麥氏濁度的比濁管（相當于細菌數為1.5×108個／mL），密封備用。

1.2.4 菌懸液的制備［7］

將供試菌接種至固體培養基上，細菌37℃培養24h，真菌28℃培養48h后，用適量生理鹽水將菌落洗下。用比濁調管對比稀釋至0.5麥氏濁度（1.5×108個／mL），4℃保存備用。

1.2.5 藥敏紙片制備

取優質濾紙，用打孔器制備成直徑6mm的濾紙片，置于潔凈干燥的培養皿中，121℃高壓蒸汽滅菌20min。無菌操作下將其分別浸在趕黃草的各種提取液及相應提取劑中，備用。

1.2.6 藥敏試驗［9］

無菌操作下吸取0.2mL菌懸液于瓊脂平板上（細菌用MH瓊脂平板，真菌用沙氏瓊脂平板），均勻涂布，取含藥濾紙片緊貼于平板上，每個平板貼4片，每個菌種做三組平行，另外每個菌種用含提取劑濾紙片做一份陰性對照，10min后倒置于恒溫培養箱中37℃培養，細菌培養24h，真菌培養48h。使用十字交叉法測量抑菌圈直徑，并記錄數據。

2 結果

趕黃草水提取物及不同濃度乙醇提取物的體外抑菌效果見表1。

表1 趕黃草提取液的抑菌效果比較（抑菌圈直徑mm）

3 討論

現代藥理研究表明趕黃草有治療黃疸、水腫、經閉、血甭、帶下、跌打損傷以及各型肝炎、膽囊炎、脂肪肝等作用［10］，對細菌與真菌的抑菌作用研究甚少。本實驗用趕黃草的30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇提取物與水提取物，分別對白色念珠菌、新生隱球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌及表皮葡萄球菌在體外進行抑菌效果觀察。結果如表1所示，趕黃草水提物及醇提物對綠膿桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌均有不同程度的抑制作用，對供試真菌無抑菌效果。

表1提示水與乙醇不同溶劑趕黃草提取物的抑菌活性無明顯差別；乙醇濃度與抑菌效果之間呈不均一的線性關系，隨著乙醇濃度的增高，趕黃草乙醇提取物對綠膿桿菌的抑菌活性降低，對枯草芽孢桿菌和表皮葡萄球菌的抑菌活性增強：30%乙醇提取物對綠膿桿菌抑菌效果最好，90%乙醇提取物對枯草芽孢桿菌和表皮葡萄球菌體外抑菌效果較好。

隨著抗生素的廣泛應用，致使多重耐藥菌株的出現，細菌耐藥性的問題已日益突出。中草藥以其價格低廉，毒副作用小，且很少產生耐藥性等獨特優勢越來越受到外界重視，中草藥的抑菌作用已受到重視。目前，對趕黃草的抑菌作用研究較少，進一步對其抑菌機制、抑菌成分及其對更多其他菌種的抑菌活性進行研究將具有更大的價值。

［1］中國科學院植物研究所.中國高等植物屬檢索表［M］.北京：科學出版社，1979：205.

［2］中國植物志編委會.中國植物志（第二分冊）［M］.北京：科學出版社，1992：2.

［3］張旭，楊明.趕黃草有效成分的研究［J］.成都中醫大學學報，2002，25（4）：46－47.

［4］汪洪武，任啟生，馮長根，等.趕黃草中黃酮提取方法的研究［J］.中國藥學雜志，2002，37（7）：551.

［5］陳奇.中藥藥理實驗方法學［M］.上海：上海科技出版社，1996：67.

［6］鐘有添，陳玉帥，毛曉潔，等.玉米須抗菌活性的初步研究［J］.贛南醫學院學報，2008，28（4）：477－478.

［7］高尚進，毛艷，周漢東，等.11種中草藥對8種常見細菌的體外抑菌試驗［J］.川北醫學院學報，2008，23（5）：466－468.

［8］范家佑，郁建平，羅莉斯，等.馬尾松葉提取物的抑菌活性研究［J］.山地農業生物學報，2010，29（3）：279－282.

［9］向秋玲.帖覓菜不同溶劑提取物抑菌作用的研究［J］.江蘇農業科學，2010，15（4）：360－362.

［10］宋麗，臧志和，廖洪利，等.趕黃草的研究進展［J］.西南軍醫，2007，9（2）：87－88.