實驗室血樣保存條件對降鈣素原濃度測定的影響

陳月華 鄧小虎 于明明 鄭瑞強

江蘇省蘇北人民醫院，江蘇省揚州市 225001

降鈣素原（PCT）是降鈣素的前體物質，近年來被廣泛應用于鑒別細菌感染和非細菌感染。在正常人群中，血漿PCT＜0.1ng／ml，當全身細菌感染時，血漿PCT可明顯升高，大于1ng／ml，甚至大于10ng／ml，而隨著感染的控制PCT值可相應下降［1～3］。由于PCT基礎值較低，PCT測定值的輕微變化可能對臨床診斷產生重大的影響，因此，測定PCT時應將各種影響因素控制在最小。有關實驗室血樣保存條件，如血樣類型、保存時間及溫度、血樣密封狀態對PCT值影響的研究較少，對此，筆者比較了上述實驗室條件對PCT檢測的影響，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 血樣來源 所有血樣均來源于2011年1－3月我院ICU病房明確診斷膿毒血癥的患者，膿毒血癥診斷標準參照《2004年拯救嚴重膿毒血癥和感染性休克治療指南》［4］，所有血樣均經深靜脈導管采集，共采集10位患者的血樣。

1.2 標本的留取保存 按無菌原則空腹抽取無肝素管靜脈血20ml，分2管保存：血清管和全血管，每管10ml，其中血清管待血塊自然凝固收縮后，于常溫3 000r／min離心5min，留取血清，再分2管分別于4℃、25℃保存0h、2h、4h、8h、12h、24h時檢測PCT；全血管標本分2管，分別于4℃、25℃以全血保存0h、2h、4h、8h、12h、24h，檢測前提取血清并即刻檢測PCT。0h檢測的血清樣本隨機分為密封管、非密封管保存于25℃，保存2h、4h、8h、12h、24h分別檢測PCT。

1.3 儀器與試劑 PCT采用高敏免疫化學發光法，所有儀器為深圳市新產業生物醫學工程有限公司的邁格魯2000（MAGLUMI2000）免疫發光測定儀，試劑盒由同一公司提供，按說明書操作，所有試劑均在保質期內使用，儀器執行質控并在控，正常PCT＜0.5ng／ml。

1.4 統計學處理 所有數據采用SPSS17.0統計軟件進行分析。計量資料以0h檢測的PCT值為基線值（100%），取基線值的百分數，并計算百分數的均數及其標準差（±s），組間比較采用兩獨立樣本的非參數U檢驗，多組間比較采用多個獨立樣本的非參數檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 密封組與非密封組不同保存時間PCT變化（血清、25℃）（見圖1）同一時間密封組與非密封組間PCT值差異無統計學意義（P＞0.05），兩組保存4h后PCT值均較基線值下降，有統計學意義（P＜0.05）。

圖1 密封組與非密封組PCT隨保存時間的變化圖

2.2 4℃時血清、全血標本不同保存時間PCT的變化（見圖2）。

圖2 4℃血清、全血標本PCT隨保存時間的變化圖

血清在4℃保存2h、4h、8h時，其PCT值較基線值分別升高了11.2%、3.9%、1.4%，保存12h、24h時，PCT值較基線值分別下降了1.8%、4.3%，且4℃血清保存2h時較基線PCT值顯著升高，具有統計學意義（P＜0.05），其他時間PCT值與基線值間差異無統計學意義（P＞0.05）；全血4℃保存2h、4h、8h、12h、24h時，其PCT值較基線值分別下降了3.5%、9.6%、12.2%、13.1%、15.3%，保存4h后PCT值較基線值下降，有統計學意義（P＜0.05）；4℃保存2h后，兩組間PCT值差異均有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 25℃時血清、全血標本不同保存時間PCT的變化（見圖3）。

圖3 25℃血清、全血標本PCT隨保存時間的變化圖

血清在25℃保存2h、4h、8h、12h、24h時，其PCT值較基線值分別下降了4.2%、6.9%、9%、10.8%、12.8%，保存4h后PCT值較基線值下降，有統計學意義（P＜0.05）；全血25℃保存2h、4h、8h、12h、24h時，其PCT值較基線值分別下降了7.7%、12.5%、13.7%、15.0%、16.8%，全血25℃保存2h后PCT值較基線值下降，有統計學意義（P＜0.05）；其中，25℃保存4h時，兩組間PCT值差異具有統計學意義（P＜0.05），其他時間兩組間PCT值差異無統計學意義（P＞0.05）。

3 討論

正常情況下，PCT由甲狀腺C細胞產生，在人體中水平極低（健康成人＜0.1ng／ml），PCT的半衰期為22～30h，在體內外穩定性很好［5，6］。有研究發現PCT檢測在體外不受動靜脈血、冷凍和復溫的影響，血清與血漿之間PCT也無顯著差別［7］。本研究也發現保存血樣時密封與否對PCT影響不大。

Michael等學者的研究中發現降鈣素原的降解速度較緩慢，血漿室溫保存24h，PCT僅下降12.4%［7］，本研究也有相近的發現。本研究中，除4℃血清組外，4℃全血組、25℃血清組、25℃全血組PCT值在血樣保存2h內下降最快，分別下降了基線值的3.5%、4.2%、7.7%。全血4℃、血清25℃保存4h后及全血25℃保存2h后PCT值較基線值下降，有統計學意義，據此建議采血后最好在2h內盡快檢測PCT。但保存4h之后，PCT值降低速度非常慢，此后20h三組PCT值每小時下降基線值的0.2%～0.3%。保存24h后，三組PCT值較基線值僅下降了15%左右，因此，PCT在體外是相對穩定的。為提高PCT檢測結果的準確性，建議采血后2h內完成檢測，若實際工作中無法完成，建議制定規范的操作流程，確保從采血到檢測的時間間隔相對恒定，以保證PCT動態檢測的穩定性。

血清4℃保存2～8h，PCT值不降低反而升高，其機制尚不明確，分析其原因可能與以下幾點有關，（1）和降鈣素原與血清白蛋白的結合、解離有關。當溫度降低時，降鈣素原與白蛋白的解離遠超過降鈣素原的降解，因此PCT值不降低反而升高。（2）降鈣素原降解為小分子片段，這些小分子片段可能與化學發光試劑中的有效成分有更高的親和力，導致PCT值的假性升高［7］。目前尚無研究明確降鈣素原的蛋白結合度及解離率，而且膿毒血癥患者血清白蛋白濃度個體差異很大［8］，因此血清4℃時PCT檢測值可能波動較大，本研究中4℃血清組PCT值均數的標準差較其他組明顯高，也支持上述推測，因此不推薦血清4℃保存。4℃全血保存2～8h并未出現PCT值較基線升高，分析可能與降鈣素原和（或）其降解產物被血細胞表面吸附有關。上述有關推測尚需進一步實驗證實。

比較四組PCT檢測結果可以發現，血清25℃組、全血4℃組PCT值較另外兩組變化更平穩，因此，血樣保存首選血清室溫下保存，若以全血保存則建議冷藏保存。

綜上所述，為提高PCT檢測的準確性，保證PCT動態檢測的穩定性，建議采血后2h內盡快完成檢測，若無法完成，則建議制定規范的檢測流程，確保采血與檢測的時間間隔相對恒定，血樣標本以血清室溫下保存最好，若全血標本以冷藏保存為宜。

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［6］ 吳丹霞，姚筱.血清降鈣素原在急性感染性疾病診斷中的應用〔J〕.中國感染控制雜志，2011，10（1）：33.

［7］ Michael M，Klaus T，Stephan S，et al.Procalcitonin－Influence of Temperature，Storage，Anticoagulation and Arterial or Venous Asservation of Blood Samples on Procalcitonin Concentrations〔J〕.Eur J Clin Chem Clin Biochem，1997，35：597.

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