電針傍刺對(duì)大鼠皮膚壓瘡血漿SOD活性及MDA含量的影響*

張秦宏，趙文麟，閻成海，孫忠人△，王樂(lè)巖，仇立波

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040;2.黑龍江省祖國(guó)醫(yī)藥研究所，黑龍江 哈爾濱150036;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江哈爾濱150001)

本研究從電針治療對(duì)大鼠褥瘡不同時(shí)間點(diǎn)血漿中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量變化角度，提出“電針促進(jìn)褥瘡的愈合”的假說(shuō)，探討電針治療褥瘡的作用機(jī)理，闡述電針療效與損傷組織愈合的關(guān)系，從分子生物學(xué)、電生理學(xué)、組織病理學(xué)等角度評(píng)價(jià)電針治療褥瘡的療效。這對(duì)探討電針促進(jìn)褥瘡愈合的作用機(jī)理和臨床治療均有重大的意義，同時(shí)也豐富和發(fā)展了電針治療本病的理論。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

華佗牌0.5寸針灸針(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)，水合氯醛(江蘇省昆山市年沙助劑廠)，碘伏(山東利爾康消毒科技股份有限公司)，酒精(齊齊哈爾市藥研消毒劑廠)，KY2000型半自動(dòng)生化儀(天津開(kāi)元醫(yī)療設(shè)備有限公司)，SOD、MDA蛋白測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所)，6805-B電針儀(上海欣曼科教設(shè)備有限公司)，anke TDL-50b低溫臺(tái)式高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

健康清潔級(jí) SD大鼠75只，雄性，體重250～300 g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。采用隨機(jī)數(shù)字表法將75只大鼠隨機(jī)分為空白組、針刺組和電針組，每組25只，每組又分為1天、3天、7天、14天、21天5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只大鼠。

1.3 大鼠皮膚壓瘡模型的制備［1］

①20周齡清潔級(jí)雄性 SD大鼠75只，體重250 g～300 g。標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室條件下喂養(yǎng)，每天給予標(biāo)準(zhǔn)食物和隨意進(jìn)水。②10%水合氯醛按350 mg/kg腹腔注射進(jìn)行全身麻醉，背部脫毛處理，備皮區(qū)域面積為7 cm×9 cm，備皮區(qū)域前緣與大鼠前肢齊平，再用0.5%碘伏對(duì)備皮區(qū)進(jìn)行消毒，后以75%酒精脫碘。③在右側(cè)背部近頭端距離備皮區(qū)域前緣1 cm上端距離背部正中線1 cm處割一深至筋膜、長(zhǎng)約3 cm的橫向切口。④鈍性分離組織，將重7 g，體積為4 cm×2.5 cm×0.07 cm的鐵片植入大鼠左背部皮下，縫合切口，用碘伏消毒以防止感染。⑤術(shù)后24 h在鐵片植入處放置磁通量1250高斯，重120 g，體積為4 cm×2.0 cm×2.0 cm的磁鐵，并開(kāi)始皮膚缺血-再灌注損傷循環(huán)。⑥磁鐵對(duì)皮膚下的鐵片產(chǎn)生壓力，造成局部組織缺血，每次缺血2 h后將磁鐵取下，讓局部血流恢復(fù)30 min。如此循環(huán)，每日每只大鼠進(jìn)行5個(gè)連續(xù)的循環(huán)，連續(xù)2天。總計(jì)缺血-再灌注10個(gè)循環(huán)，缺血時(shí)間20 h。⑦缺血再灌注過(guò)程中大鼠自由進(jìn)食、飲水，單籠飼養(yǎng)。以皮膚變黑、糜爛、針刺不出血作為判斷II期及其以上壓瘡形成的標(biāo)準(zhǔn)［2］。

1.4 治療方法

電針組以0.5寸華佗牌針灸針給予常規(guī)傍刺，以瘡面中心為第一進(jìn)針點(diǎn)，方向直刺，深度為0.2寸;距離皮膚創(chuàng)面1 cm處為第二進(jìn)針點(diǎn)，進(jìn)針角度要求平刺，深度也為0.2寸。連接6805-B電針儀，電流強(qiáng)度為1 mA，頻率為1 Hz，留針時(shí)間30 min，1次/天。

針刺組常規(guī)傍刺，連接電針儀，但不通電，留針30 min，1次/天。空白組每日抓取捆綁 1次，時(shí)間30 min，常規(guī)飼養(yǎng)，不予任何治療。3組大鼠每日給予相同的基本護(hù)理措施。

1.5 取材與制備樣品

各組大鼠于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)治療結(jié)束后，以10%水合氯醛按350 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血3～5 ml，放置10 min 后離心(3000 r/min，10 min)。移取血漿1 ml備用樣品。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定大鼠血漿SOD活性和血漿MDA含量，SOD采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，MDA采用硫代巴比妥法測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件包進(jìn)行分析，計(jì)量結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，組間組內(nèi)計(jì)量資料比較均采用單因素方差分析，P＜0.05表示差異具有顯著性意義。

2 SOD和MDA測(cè)定結(jié)果

造模過(guò)程中空白組2只大鼠因室溫較低，體質(zhì)較弱，全身麻醉后未能蘇醒而死亡;另有空白組1只、電針組1只大鼠因局部皮膚大塊壞死脫落后引發(fā)感染死亡。SOD和MDA測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1、表2。

表1 電針傍刺對(duì)大鼠皮膚壓瘡血漿SOD活性和MDA含量的影響

表2 電針組大鼠皮膚壓瘡血漿SOD活性和MDA含量5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)的比較

由表1可以看出，電針組與空白組相比，電針傍刺療法可以提高皮膚壓瘡大鼠血漿SOD活性，并且可以明顯降低血漿MDA含量，與空白組相比較，具有顯著性差異(P＜0.05)，電針組與針刺組相比較，也具有顯著性差異(P＜0.05)，說(shuō)明電針傍刺療法具有較為明顯的提高抗氧化酶活性及抑制自由基反應(yīng)的作用。

從表2可以看出，在電針組內(nèi)部5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)上，SOD活性以3天組水平最高;MDA含量以3天組最低。

3 討論

目前關(guān)于壓瘡病理模型的復(fù)制方法與發(fā)病假說(shuō)主要有缺血再灌注損傷學(xué)說(shuō)與缺血性損傷學(xué)說(shuō)兩種，學(xué)術(shù)界大多數(shù)學(xué)者的觀點(diǎn)傾向于第一種學(xué)說(shuō)。壓瘡的形成往往是多因素共同作用的結(jié)果，缺血-再灌注循環(huán)損傷理論被認(rèn)為是最重要的致病因素之一。近年來(lái)，對(duì)于多器官的缺血-再灌注損傷有了更深一步的認(rèn)識(shí)。已有多項(xiàng)研究表明，缺血-再灌注損傷是慢性皮膚損傷的最主要誘因。實(shí)驗(yàn)方法是以鼠類(lèi)作為最主要的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源，提供壓力的方式由過(guò)去單一的機(jī)械壓迫轉(zhuǎn)變?yōu)榇帕浩龋@種方法具有成模時(shí)間短、組織損傷明顯、技術(shù)容易掌握等優(yōu)點(diǎn)，可廣泛用于壓瘡的發(fā)生機(jī)制和防治措施研究方面。目前此類(lèi)模型中最常見(jiàn)者為在鼠類(lèi)背部皮下埋置鐵片，體外采用磁鐵間歇性施加壓力以造成組織缺血-再灌注損傷來(lái)制作模型［3］。

生理狀態(tài)下，人體吸入的氧98%與細(xì)胞器內(nèi)的葡萄糖和脂肪結(jié)合，轉(zhuǎn)化為細(xì)胞活動(dòng)所需要的能量，另外2%的氧則轉(zhuǎn)化為氧自由基。氧自由基包括超氧陰離子()、羥自由基(OH-)、過(guò)氧化氫(H2O2)以及一氧化氮(NO)等［4］，水平僅為 10-7 ～10-5 mol/L，不會(huì)造成病理?yè)p傷。少量的氧自由基在體內(nèi)會(huì)被具有抗氧化作用的SOD迅速消除，保護(hù)機(jī)體免受損傷。過(guò)剩的氧自由基則攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用，形成脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA。脂質(zhì)過(guò)氧化作用不僅把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑，并且通過(guò)鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng)，放大活性氧的作用，能夠引起細(xì)胞代謝及功能障礙，甚至死亡［5］。

SOD活力的高低直接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力，MDA含量的高低則反映了機(jī)體細(xì)胞受到氧自由基攻擊的嚴(yán)重程度［6］。在正常機(jī)體內(nèi)，自由基的生成與清除處于一種動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，本實(shí)驗(yàn)的造模方法會(huì)對(duì)大鼠皮膚造成缺血再灌注性損傷，在此情況下，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生大量的氧自由基，破壞二者之間的平衡，從而造成了皮膚組織的損傷。電針傍刺療法與針刺、空白組相比，具有顯著性差異，并且在治療第3天時(shí)，分別使SOD活力達(dá)到了最高峰，使MDA含量達(dá)到了最低。由上推測(cè)電針傍刺療法治療大鼠皮膚壓瘡的主要機(jī)理可能是通過(guò)提高大鼠皮膚壓瘡血漿SOD活力、提高機(jī)體清除氧自由基的能力、減少脂質(zhì)代謝物MDA含量方面來(lái)發(fā)揮抗缺血再灌注損傷的，這一發(fā)現(xiàn)與鐘煜朝等得出的電針能降低MDA水平及提高SOD活性，從而降低自由基的損害，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)論基本一致［7］，當(dāng)然對(duì)于壓瘡具體機(jī)理的研究還需在完備實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上進(jìn)一步深入研究。

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