多蜂房蛋白BMI－1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義

曹成成，谷麗萍，夏志梅，王俊芳，劉菲菲，劉 影

（吉林大學(xué)第二醫(yī)院 婦產(chǎn)科，吉林 長(zhǎng)春130041）

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma，EC）是一種原發(fā)于子宮內(nèi)膜的上皮性惡性腫瘤，是女性生殖道常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。近年來(lái)，我國(guó)子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，約占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%－30%，且趨于年輕化［1］。B細(xì)胞特異的莫洛尼白血病毒插入位點(diǎn)1基因（B－cell－specif ic mo loneyleukemia virus insert site 1，BMI－1），是一種核蛋白，屬于多梳基基因家族，其在細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和干細(xì)胞自我更新的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，對(duì)于造血干細(xì)胞自我更新及分化潛能的維持至關(guān)重要［2］。已有研究表明，BMI－1在人類(lèi)的多種腫瘤，如白血病、淋巴瘤、乳腺癌、鼻咽癌、胃癌、宮頸癌及卵巢癌等中異常表達(dá)，并且與腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散相關(guān)［3－6］，但目前尚未見(jiàn)到 BMI－1與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的文獻(xiàn)報(bào)道，因此，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化方法研究BMI－1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)，分析其與子宮內(nèi)膜癌的臨床診斷、治療及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象 選取吉林大學(xué)第二醫(yī)院2010年05月—2011年3月婦科住院患者行子宮切除的正常子宮內(nèi)膜及宮腔鏡檢查獲得的正常子宮內(nèi)膜15例（包括增生期8例，分泌期7例）；子宮內(nèi)膜增生癥組20例（包括單純?cè)錾?0例，復(fù)雜增生5例，非典型性增生5例）；子宮內(nèi)膜癌42例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或任何激素治療。其中子宮內(nèi)膜癌患者根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO 2009）手術(shù)－病理分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，Ⅰ期28例，Ⅱ期7例，Ⅲ和Ⅳ期共7例，病理分級(jí)：高分化（G1期）17例，中分化（G2期）14例，低分化（G3期）11例，淋巴轉(zhuǎn)移者6例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者36例。

1.1.2 試劑 兔抗人BMI－1抗體購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司，SP－9710試劑盒和DAB試劑盒購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色 取得臨床標(biāo)本組織立即泡于10%福爾馬林固定液中固定24小時(shí)，予以常規(guī)石蠟包埋、切片，制成4微米切片；先行HE染色，再切片貼附于涂有多聚賴(lài)氨酸的玻片上備用待行下一步的免疫組化染色，RUNX3抗體檢測(cè)采用免疫組化S－P法（鏈霉素抗生物素蛋白一過(guò)氧化物酶），按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。先對(duì)組織切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟、水化，然后去離子水孵育10min，PBS洗3次。正常山羊免疫血清封閉，室溫孵育15分鐘，滴加按1∶100稀釋的BMI－1抗體，過(guò)夜后用PBS沖洗次。滴加生物素標(biāo)記的二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.2.2 結(jié)果判定 光學(xué)顯微鏡下觀察組織標(biāo)本的著色程度。BMI－1蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，細(xì)胞核用蘇木精復(fù)染為藍(lán)色；偶見(jiàn)細(xì)胞核陽(yáng)性表達(dá)，因復(fù)染而顯藍(lán)黑色；圖像分析采用Motic Images Advanced 3.2圖像分析軟件，測(cè)得灰度值越小陽(yáng)性越強(qiáng)，灰度值越大陽(yáng)性越弱。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。采用t檢驗(yàn)對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)檢驗(yàn)。以P＜0.05為有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

BMI－1在子宮內(nèi)膜癌組中的表達(dá)顯著高于子宮內(nèi)膜增生癥組及正常子宮內(nèi)膜組（P＜0.01），在子宮內(nèi)膜增生癥組中的表達(dá)也高于正常子宮內(nèi)膜組（P＜0.05）。子宮內(nèi)膜癌組中，BMI－1隨著手術(shù)—病理分期的增加、肌層浸潤(rùn)深度的增加以及出現(xiàn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而升高，但比較子宮內(nèi)膜癌的不同組織學(xué)分級(jí)、不同病理類(lèi)型及雌、孕激素受體的表達(dá)等方面，結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（見(jiàn)表1）

3 討論

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病因素很多，如細(xì)胞凋亡的抑制、癌基因與抑癌基因的突變、免疫監(jiān)視功能降低、雌、孕激素受體表達(dá)異常以及P53、VEGF、PDGFD等基因表達(dá)異常等，但其具體機(jī)制仍不甚清楚。

人類(lèi)BMI－1基因定位第10號(hào)染色體短臂1區(qū)3帶（10p13），編碼含326個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量為36.9kDa，其N(xiāo)H2末端包含一個(gè)保守RF域，中央?yún)^(qū)域有HTHT構(gòu)像中心，是誘導(dǎo)端粒酶活性和細(xì)胞永生化的決定簇。BMI－1在腫瘤的發(fā)生過(guò)程中起重要作用，BMI－1調(diào)控的下游基因包括INK4a－ARF、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT）和Hox基因家族。NK4a－ARF編碼兩種抑癌基因P16NK4a和P19ARF（在人類(lèi)為P14ARF），BMI－1高表達(dá)時(shí)，與c－myc基因共同作用一方面使P16NK4a表達(dá)下調(diào)，對(duì)細(xì)胞周期素（cyclinD）抑制作用減弱，使pRb高磷酸化，從而啟動(dòng)DNA復(fù)制相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，推動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)入S期，從而促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖；同時(shí)另一方面還抑制P19ARF，使后者對(duì)mdm2的抑制作用減弱，致其介導(dǎo)的泛素依賴(lài)的p53降解增多，阻止細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡［7］；hTERT高表達(dá)可激活端粒酶，使細(xì)胞獲得無(wú)限增殖能力而逃避衰亡，在細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用［8］。自1999年研究者發(fā)現(xiàn)BMI－1基因與c－myc基因在小鼠淋巴瘤發(fā)生過(guò)程中起協(xié)同作用，導(dǎo)致淋巴瘤發(fā)生；隨后，在多種人類(lèi)癌癥如急性白血病、非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞（NSCLC）、支氣管鱗癌、結(jié)腸癌、乳腺癌中都檢測(cè)到BMI－1基因過(guò)度表達(dá)，新近研究發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)細(xì)胞瘤、口腔上皮細(xì)胞癌、早期肝癌、鼻咽癌、腎臟透明細(xì)胞癌、胃癌、卵巢癌、宮頸癌中也能檢測(cè)到BMI－1基因過(guò)度表達(dá)［3－6］，提示該基因在腫瘤形成中發(fā)揮了重要作用，并可能與腫瘤惡性程度、侵襲及預(yù)后有關(guān)。

本研究中，BMI－1在不同子宮內(nèi)膜中表達(dá)不同，在正常子宮內(nèi)膜組織中少量表達(dá)，在增生癥組子宮內(nèi)膜中低表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)水平明顯升高，三者的差別具有顯著性，表明BMI－1的表達(dá)增加，使正常子宮內(nèi)膜上皮逐漸向惡性發(fā)展，最終發(fā)展為子宮內(nèi)膜癌；同時(shí)研究表明，子宮內(nèi)膜癌組織中，隨著浸潤(rùn)深度的增加，BMI－1的表達(dá)水平顯著升高；淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移與臨床分期均與子宮內(nèi)膜癌的診治和預(yù)后有密切關(guān)系，臨床分期高和／或出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者大多預(yù)后不良，在此研究中，子宮內(nèi)膜癌組織中BMI－1的高表達(dá)與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，提示BMI－1與子宮內(nèi)膜癌晚期發(fā)生浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移有關(guān)。但是，BMI－1的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌組織學(xué)分級(jí)、病理類(lèi)型及雌、孕激素受體無(wú)明顯相關(guān)。有國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道BMI－1在子宮內(nèi)膜癌組織中高表達(dá)，這與本研究一致［9］，但有最新的研究表明，在mRNA轉(zhuǎn)錄水平上BMI－1的低表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的血管侵襲、激素受體缺少有關(guān)［10］，這與本研究結(jié)果不符，是否與研究方法或樣本量有關(guān)，尚需進(jìn)一步證實(shí)。

綜上可見(jiàn)，BMI－1與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的高表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展有關(guān)，預(yù)示腫瘤具有高度轉(zhuǎn)移潛能，提示BMI－1有望成為子宮內(nèi)膜癌臨床診斷、指導(dǎo)治療及評(píng)估預(yù)后的有效生物學(xué)指標(biāo)。但本研究病例數(shù)有限，且僅限于免疫組化單方面結(jié)果，因此BMI－1能否成為預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌高度轉(zhuǎn)移的新生物學(xué)指標(biāo)，有待進(jìn)一步證實(shí)。

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