血漿凝固法胸腹水細胞塊技術的臨床應用

陳建華，陳 中，丁 博

(萍鄉市湘東區人民醫院病理科，江西 萍鄉337016)

血漿凝固法胸腹水細胞塊技術的臨床應用

陳建華，陳 中，丁 博

(萍鄉市湘東區人民醫院病理科，江西 萍鄉337016)

胸腹水；細胞塊；血漿凝固法；石蠟切片；免疫組化；特殊染色

脫落細胞病檢是目前各級醫院病理科的1個工作重點與發展方向，其中胸腹水細胞學檢查在制片與診斷技術上都存在很大困難。我院研制的血漿凝固法胸腹水細胞塊技術在制片方面取得了較好的效果，也提高了診斷質量?，F報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本類型 本法適用于各種脫落細胞檢查，對胸腹水尤其適用。

1.2 器材 細胞塊制作儀器采用普通低速離心機，試劑采用枸櫞酸鈉抗凝血漿、凝血酶。石蠟切片采用病理科的組織切片程序。

1.3 操作方法

1.3.1 標本處理 取10ml胸腹水標本液加入試管中，普通離心機3000r/min,離心5min，棄去上層液體，保留沉渣制細胞塊。

1.3.2 細胞塊制作 在保留沉渣的試管中加入200～300μl血漿，用小玻棒將沉渣與血漿攪勻；此時還可加入1小滴伊紅著色，便于制蠟塊時看清細胞塊；然后加入凝血酶試劑200～300μl，立即用小玻棒攪拌3～5s，讓細胞均勻分布；10～20s后凝塊形成;適當增加作用時間凝塊形成得更好。

1.3.3 石蠟切片 搖動試管將上述凝塊倒在小紗布上包好，放入95%乙醇中固定、脫水，當作組織塊按病理組織切片程序進行制片。

1.3.4 讀片診斷 結合細胞塊片、直接涂片、臨床資料、免疫組化等綜合分析診斷。

2 結果

2.1 制片效果 本方法制出的細胞片染色十分清晰，細胞境界、核膜、核染質、核仁清楚，克服了胸腹水沉渣直接細胞涂片經常出現的細胞模糊現象。本院取了連續36例胸腹水用沉渣直接涂片法與血漿凝固細胞塊制片法進行制片效果對照，將片子質量按細胞染色清晰程度分成三個等級：好(細胞清晰)；一般(細胞清晰度一般)；差(細胞不清晰)。兩種方法制片效果對比見表1。

2.2 診斷效果 血漿凝固法細胞塊技術制片效果好，細胞形態與染色清楚，又便于進行免疫組化與特殊染色，給病理診斷帶來了很大幫助。

表1 36例胸腹水血漿凝固細胞塊法與沉渣直接涂片法制片效果對比表

3 討論

血漿凝固法細胞塊技術的基本原理是血漿中的纖維蛋白原在凝血酶作用下形成纖維蛋白，造成血漿凝固，凝固過程一般需要16～18s[1]。血漿呈液態，制片過程中與沉渣可以充分混勻，加入液態的凝血酶試劑后的5s內，混合物仍然呈液態，可以用小玻棒攪勻，使細胞均勻分布；15s后形成完整的凝塊，適當增加作用時間凝塊形成得更好；適度搖動試管后凝塊可以完整的從試管脫落，便于紗布包裹后脫水固定處理；如果凝塊與試管粘得較緊，也可用小玻棒先拔動一下。相比之下，用瓊脂法或蛋清加乙醇法制細胞塊效果沒有本法好，細胞塊破碎不整，細胞分布不均，不易制成完整均勻的細胞塊。本法采用的血漿與凝血酶成本每例不到1元，檢驗科做凝血功能檢查時每天都會用到。

片子上有效細胞量的多少也是片子質量的重要方面，細胞太少容易漏診，細胞太多、片子太厚又影響觀察讀片。本法細胞量的控制要點在于根據沉渣的多少調整血漿與凝血酶的量，如果標本細胞多，沉渣多，就應相應增加血漿與凝血酶用量，凝塊適當做大一點；如果標本細胞較少，沉渣較少，就應減少血漿與凝血酶用量，凝塊做小一點，保證單位體積的細胞含量適當；血漿用量應與沉渣量相等，凝血酶用量按試劑說明書執行。如果標本細胞量很少，可采用更大的試管加入更多的標本液離心收集細胞，或采用多次離心沉渣累加的辦法增加細胞量。

馬正中教授指出“許多診斷困難的涂片，實際上是涂片制作質量不佳造成的”，并提出了質量優良的涂片的標準，強調涂片中細胞結構必須清楚，核膜、染色質、核仁等結構必須清晰[2]。本法制作的細胞片最大的優點是細胞結構十分清楚，滿足馬教授指出的優質片要求，有利于讀片診斷。必須注意的是，本法的細胞與直接涂片的細胞鏡下表現有一定的差異，診斷標準也必須做一定的研究與調整。細胞團的立體結構與平面結構的鑒別在細胞塊片子上困難一些，而在直接涂片上則更容易；細胞的大小也有差異。

本法適用于所有細胞學標本病檢，可將細胞學病檢納入組織學病檢程序中工作，便于細胞學與組織學的統一工作安排。

《阿克曼外科病理學》指出了胸腹水細胞學診斷的兩個最困難的問題，即反應性間皮和腫瘤性間皮的鑒別，惡性間皮與轉移癌的鑒別[3]，并指出了免疫組化與特殊染色在診斷中的一些作用。本法采用石蠟切片，可以連續大量切片與長期保存，可以做免疫組化等進一步鑒別工作。

[1]熊立凡,李樹仁.臨床檢驗基礎[M].北京:人民衛生出版社,2005:92.

[2]劉復生,馬正中.中國腫瘤病理學分類[M].北京.科學技術出版社,2001:619.

[3]Rosaw J.阿克曼外科病理學[M].第8版.沈陽：遼寧教育出版社,1999：2149.

R446.8，R446.19

B

1674-1129(2012)04-0412-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.04.049