全自動電泳分析系統在地中海貧血篩查中的應用價值

莫鳳明,伍德榮,何玉強

(河池市人民醫院,廣西 河池547000)

全自動電泳分析系統在地中海貧血篩查中的應用價值

莫鳳明,伍德榮,何玉強

(河池市人民醫院,廣西 河池547000)

目的探討全自動電泳分析系統在地中海貧血篩查中的應用價值。方法對2080份疑似地貧患者標本應用法國公司HYDRASYS全自動電泳分析系統進行血紅蛋白電泳，檢測血紅蛋白(Hb)各組成分的含量，同時采用HbF堿變性試驗對同一標本進行HbF含量測定，比較兩種方法的檢測結果。結果在送檢2080例中篩出α地中海貧血表型陽性316例，陽性率15.2%；β地中海貧血表型陽性616例，陽性率29.6%。其它血紅蛋白病6例，陽性率0.3%，經基因分析確診α地中海貧血291例，準確度92.3%，β地中海貧血591例，準確度95.9%。結論全自動血紅蛋白電泳分析系統電泳區帶清晰,掃描定量準確,可以定量檢測HbA,HbF,HbA2的含量，將地中海貧血進行初步分類為α地中海貧血或β地中海貧血，準確度高，有效地篩查出高危患者，為進一步進行基因診斷和遺傳咨詢提供基礎。

全自動電泳分析系統；血紅蛋白電泳；地中海貧血；篩查

地中海貧血廣泛分布在我國南方地區，是廣東、廣西及海南等地發病率最高、被世界衛生組織列為危害人類健康的6種常見病之一[1]，目前地貧尚無確切有效的治療方法，重型α地貧多為死胎且孕婦易并發妊娠高血壓綜合征，重型β地中海貧血則需要終身依賴輸血，中間型α、β地中海貧血患者多無勞動能力或勞動能力低下[2]。因此要廣泛開展地貧篩查，特別是孕婦，提高預防意識，以便減少地貧兒的出生。為探討全自動電泳分析系統在地中海貧血篩查中的應用價值，現將測定分析報道如下。

1 資料與方法

1.1 資料 2010年6月至2011年5月來就診的疑似地貧患者 (紅細胞脆性<70%，MCV<80fL或家庭中有地貧攜帶者)共2080例，其中包括新生兒患者92例。

1.2 儀器與試劑 儀器為法國Sebia公司HYDRASYS全自動蛋白電泳系統及掃描儀，試劑用該公司生產的配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 血紅蛋白電泳分析 抽取疑似患者靜脈血約2ml,真空采血管肝素鈉抗凝，制備血紅蛋白液，嚴格按照儀器和試劑盒說明書進行點樣、電泳、染色、脫色、烘干，再通過自動掃描儀系統掃描分析HB各組分含量，打印出圖譜。

1.3.2 參考區間 正常參考值成人2.0%≤HbA2≤3.5%并且不出現異常血紅蛋白帶。 如HbA2≤2.0%，或出現異常血紅蛋白帶(HbH、HbBart’s)判斷為α地中海貧血表型陽性；如HbA2>3.5%或出現異常血紅蛋白帶(HbF>2.0%)判斷為β地中海貧血表型陽性。

1.3.3 堿變性試驗測定HbF含量 同時對每一分標本進行堿變性試驗。

1.3.4 對于電泳分析表型陽性者重抽血進行地貧基因分析診斷。

2 結果

2.1 血紅蛋白電泳法2080例中，檢出HbA2<2.0%212例,檢出HbA2>3.5%420例，出現HbH帶44例，檢出HbBart’s帶60例，同時出現HbH帶和HbBart’s帶 36 例，檢出 HbF>2.0%196 例，HbG2例，HbE4例。按參考區間標準可判斷出：α地中海貧血表型陽性316例，陽性率為15.2%(316/2080)，β地中海貧血表型陽性616例，陽性率29.6%(616/2080)，見表 1。

表1 2080例地中海貧血血紅蛋白電泳分析結果

2.2 HbF堿變性試驗結果 2080份標本中有203例HbF>2.0%。

2.3 全自動電泳法測HbF量和HbF堿變性試驗對照結果 全自動電泳法有196例HbF>2.0%，HbF堿變性試驗有203例HbF>2.0%，符合率達96.6%。 電泳中HbA2區帶清晰集中，如HbF增高大于2.0%時可在HbA2后出現HbF帶，如HbF小于2.0%時在HbA2后不出現HbF帶，無法定量。取10例代表性結果進行比較，見表2。可見HbF掃描與堿變性試驗結果基本相符。

2.4 地貧基因分析結果 α地中海貧血表型陽性316例和β地中海貧血表型陽性616例重新抽血進行地貧基因分析診斷，檢出地貧者888例，其中α-地中海貧血291例，包括標準型157例、靜止型72例、中間型(HbH 病)44例，HbBart’s胎兒水腫綜合征 2 例，HbBart’s+HbG 2 例，HbBart’s+HbE 4例；β地中海貧血591例，αβ復合型地中海貧血6例。

2.5 紅蛋白電泳法和地貧基因分析法比較 以基因分析法為標準，血紅蛋白電泳法檢測α地中海貧血準確度為92.3%，β地中海貧血準確度為95.9%。

表2 10例 全自動血紅蛋白電泳與HbF堿變性試驗結果比較

3 討論

血紅蛋白是人體紅細胞的主要蛋白質，由血紅素和珠蛋白組成。珠蛋白肽鏈結構異常和某些肽鏈合成不足常導致血紅蛋白疾病，前者稱異常血紅蛋白病，后者為地中海貧血。地中海貧血分為α地中海貧血和β地中海貧血,在α地中海貧血中，Bart’s水腫胎兒會早產夭折，標準型和靜止型患兒在出生3～6個月后HbBart’s區帶會消失，實際上在出生半年后用電泳法只有檢測出HbH病。HbH病表現為血紅蛋白電泳中出現HbH區帶或HbH和HbBart’s區帶，有些合并有HbCS區帶。β地中海貧主要表現為HbF、HbA2含量增高[3]。因血紅蛋白疾病可以沒有任何臨床癥狀，所以主要依賴于實驗室檢查來診斷。血紅蛋白的分離和鑒定方法很多，國內外普遍采用平均紅細胞參數(MCV、MCH、MCHC)、紅細胞脆性等方法進行地貧篩查，但其敏感性和特異性較低，而且部分地貧患者(特別是α地中海貧血標準型)MCV和紅細胞脆性可以正常，易漏診和誤診，漏診率達13.23%[4]。目前，聚合酶鏈反應(PCR)等分子生物學技術主要用于明確診斷α、β地中海貧血，是地中海貧血檢測的金標準，但是分子生物學技術實驗條件要求高，方法煩瑣，而且檢查費用較高，所以不能被廣泛應用，特別是基層醫療單位無法開展。全自動電泳法其方法簡便，電泳瓊脂糖膠片易保存，區帶顏色不容易脫，區帶清晰，能夠定量檢測出HbA、HbF、HbA2含量，將地中海貧血進行初步分類，同時還可以篩查出各種異常血紅蛋白，如HbH、HbE、HbG等，可見血紅蛋白電泳法是研究和分析異常血紅蛋白的有效方法，是診斷血紅蛋白分子病不可缺少的手段[5]。本研究分析2080例疑似地中海貧血者的血紅蛋白電泳結果，以基因分析法為診斷地中海貧血的金標準，全自動電泳分析統系篩查的α地中海貧血診斷準確性為92.3%，而篩查β地中海貧血準確度為95.9%，與文獻報道基本相同[6]。這些結果表明，血紅蛋白電泳法篩查地貧準確度高，能有效地篩查出高危患者，特別是HbH病和β地中海貧效果最理想，HbH病與基因方法完全符合，β地中海貧準確度達95.9%。同時本次研究還檢出HbG 2例檢出HbE 4例，所以紅蛋白電泳法還可以篩查出異常血紅蛋白病。

血紅蛋白電泳法因支持物的不同而分為濾紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂糖凝膠電泳、毛細管電泳、高效液相色譜法等。濾紙電泳應用最早，但由于其區帶“拖尾”現象較重，吸附作用和電滲作用較強，而且電泳時間長、速度慢、分辨率較低，已經很少使用。醋酸纖維素薄膜電泳中由于HbA、HbF等電點接近，通常不能分開，而且影響因素較多，要完成好的電泳圖譜仍有一定的難度。毛細管電泳法及高效液相色譜法是近年來發展的分離方法，還不能廣泛和深入應用。本研究使用的全自動瓊脂糖凝膠電泳系統的瓊脂糖是由瓊脂分離純化而得，凝膠孔徑較大，對一般蛋白質不起分子篩作用，最大優點是幾乎不吸附蛋白質，因此電泳斑點幾乎無“拖尾”現象，其區帶掃描分辨率高，區帶整齊，重復性好，這與相關報道一致[7]。同時對HbF的分辨率也大有提高，高于一般的醋酸纖維薄膜電泳，對測HbF含量的準確度高達96.6%，可以基本代替HbF堿變性實驗，使Hb分析更簡便、快捷[8]。在HbA2升高的病例中，其HbF堿變性實驗測定的HbF含量稍高于(2.0%

全自動瓊脂糖凝膠電泳分析統系操作簡便快速，電泳、染色、脫色、烘干在1h內即可完成，對HbA2的分辨清晰，區帶集中。而且其從點樣后到打印出檢驗結果都是用計算機控制程序完成，代替了以往的手工操作，也避免了人工操作的某些技術及客觀條件的誤差。

綜上所述，應用全自動瓊脂糖凝膠電泳分析統系進行電泳分析，區帶清晰,掃描定量準確,可以定量檢測HbA,HbF,HbA2的含量，將地中海貧血進行初步分類為α地中海貧血或β地中海貧血，準確度高，有效地篩查出高危患者，為進一步進行基因診斷和遺傳咨詢提供基礎。但是血紅蛋白電泳是一個介于篩查和確診的試驗，有些情況下還應結合其他篩查方法及臨床表現才能作出診斷，有條件的單位應開展基因診斷技術，以減少地貧漏檢的可能。

[1]梁華銘，黎金美.1826例育齡期婦女地中海貧血篩查結果分析[J].中國實用醫藥，2010，5(17)：52-53.

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[5]黃 凌.917例血紅蛋白電泳檢查結果分析[J].實驗與檢驗醫學,2009,27(3):226-227.

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[7]林慶芳，邱 威.血紅蛋白電泳方法的研究進展[J].醫學綜述，2010，16(6)：922-924.

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R556.6+1,R446.11+2

B

1674-1129(2012)05-0472-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.05.020