DOG-1在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達及其臨床意義

張秀梅 時 磊 王 海 王舒靖 樸正愛

胃腸道間質(zhì)瘤(gastrointestinal stromal tumors，GIST)是消化道常見的間葉源性腫瘤，起源于胃腸道Cajal間質(zhì)細胞(interstitial cells of Cajal,ICC)，遺傳學上存在c-kit或血小板源性生長因子受體A(platelet-derived growth factor receptor A,PDGFRA)基因激活突變，組織學上主要由梭形和(或)上皮樣細胞組成。本研究對61例GIST患者的腫瘤切除標本進行DOG-1檢測，探討其在GIST診斷及預后中的意義。

1 材料與方法

1.1 病例和標本

收集我院2005年1月1日～2012年2月29日經(jīng)外科手術(shù)切除的食管、胃腸道、腸系膜及腹膜后并經(jīng)病理檢查證實為GIST的標本61例，其中男性25例，女性36例，年齡21～80歲，中位年齡52歲。腫瘤位于胃29例，小腸12例，大腸 9 例，腸系膜7 例,腹膜后2例，食管2例。其中復發(fā)及轉(zhuǎn)移13例(復發(fā)8例，肝轉(zhuǎn)移3例，腹膜轉(zhuǎn)移2例)。復發(fā)轉(zhuǎn)移病例經(jīng)病理、CT、B超、X光檢查4項中至少1項證實。同時收集我院外科手術(shù)切除的胃平滑肌瘤5例，神經(jīng)鞘瘤3例。根據(jù)2002年美國國立衛(wèi)生研究院NIH共識方案[1]，將61例GIST分為極低度及低度危險性21例，中度危險性18例，高度危險性22例。

1.2 試劑與方法

采用免疫組織化學EnVision法，兔抗人DOG-1、鼠抗人CD117單克隆抗體及EnVision試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。將入選病例的原發(fā)灶病理蠟塊進行常規(guī)切片， 0．01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓修復，免疫組織化學染色。染色步驟嚴格按照說明書進行，DAB顯色，蘇木精復染細胞核。正常胃腸黏膜組織作為對照，同時用PBS代替一抗做空白對照。DOG-1和CD117均為細胞膜和(或)細胞質(zhì)棕黃色著色。陰性：細胞陽性率<25%或腫瘤細胞不表達；弱陽性：細胞陽性率25%～50%；中度陽性：細胞陽性率51%～75%；強陽性：細胞陽性率>75%。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 11.5進行分析，率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01為差異有顯著統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 CD117及DOG-1在GIST中的表達

21例極低度及低度危險性GIST中，DOG-1陽性19例(90.5%)，CD117陽性20例(95.2%)，其表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。40例中度及高度危險性GIST中，CD117為強陽性(100.0%)，DOG-1陽性39例(97.5%),表達差異亦無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。胃平滑肌瘤及神經(jīng)鞘瘤中DOG-1和CD117均為陰性，正常胃腸道黏膜組織中DOG-1和CD117均為陰性，空白對照組(PBS代替一抗)也均無表達。

2.2 DOG-1在GIST中的表達與臨床病理特征的關(guān)系

DOG-1表達與GIST發(fā)生部位、腫瘤大小、分級和年齡無關(guān)；13例復發(fā)轉(zhuǎn)移GIST中，3例均為DOG-1陰性，與GIST復發(fā)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.01)，見表1。

表1 DOG-1表達與GIST臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 GIST組織病理學形態(tài)

61例GIST中主要由梭形細胞和(或)上皮樣細胞按不同比例混合或單一組成。梭形細胞型細長，類似平滑肌細胞，呈束狀、編織狀或漩渦狀排列，部分呈柵欄狀排列，細胞核呈桿狀，兩端鈍圓或呈長梭形；上皮樣細胞呈圓形、卵圓形或多邊形，呈彌漫狀或巢狀排列，胞質(zhì)豐富，部分出現(xiàn)胞質(zhì)空泡，呈印戒樣細胞。高度危險性中腫瘤細胞多形性，核大，異型性明顯，核分裂象多見。

3 討論

GIST是消化道常見的間葉源性腫瘤[2],占消化道腫瘤的0.1%～3%。以往被認為是平滑肌瘤、平滑肌肉瘤或神經(jīng)鞘瘤，直到1983年研究發(fā)現(xiàn)這類腫瘤缺乏平滑肌細胞和施旺細胞的超微結(jié)構(gòu)和免疫表型特征，提出用GIST來命名此類腫瘤。

1998年首次發(fā)現(xiàn)GIST中表達KIT 蛋白和具有KIT基因突變[3],有學者認為GIST可能起源于胃腸道Cajal間質(zhì)細胞(ICC)[4]。目前研究較多的是CD117和CD34、CD117是原癌基因c-kit的產(chǎn)物，是跨膜酪氨酸激酶受體，大約95%的GIST表達CD117[5]。大多數(shù)GIST中KIT高表達的同時伴隨KIT基因外顯子9、11、13或17突變[6,7]，這種突變導致配體不依賴受體激活，在免疫組織化學水平同樣可以檢測出來，這為證實GIST的診斷提供了非常有用的工具。本組研究61例GIST中極低度及低度危險性腫瘤21例，其陽性表達率為95.2%(20/21)，中度及高度危險性腫瘤40例，其陽性表達率為100%(40/40)，與文獻報道結(jié)果一致[8]。

DOG-1基因是2004年West等[9]利用cDNA微陣列篩選出的1個選擇性高表達與GIST有關(guān)的基因，定位于人染色體11q13上的CCD1-EMS1位點。近來被認為是鈣調(diào)控的氯離子通道蛋白[10]。這個基因在許多腫瘤，包括頭頸部、膀胱和乳腺腫瘤中存在擴增。盡管在許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)DOG-1表達，但在GIST中的生物學功能和過表達機制尚不清楚。West等[9]提出ICC對DOG-1與KIT一樣起免疫反應，這提示DOG-1可能在受體激酶Ⅲ信號傳導通路中起作用。又有學者提出DOG-1可能是偶然發(fā)現(xiàn)的GIST表型標記物，與KIT和PDGFRA信號通路無關(guān)[11]。DOG-1在KIT和PDGFRA突變的GIST中高表達[9,12],這些為伊馬替尼的治療提供重要的臨床價值，同時可能是GIST潛在的治療靶點。Espinosa等[13]對DOG-1與CD117進行比較，發(fā)現(xiàn)DOG-1是GIST更加敏感和特異的標記物。而Miettinen等[12]研究了1168例不同部位和病理亞型的GIST及672個其它腫瘤及正常組織中DOG-1的表達，發(fā)現(xiàn)GSIT中DOG-1和KIT的總體敏感性幾乎相同。本組研究中發(fā)現(xiàn)DOG-1無論在哪一級別的GIST都呈特異性的表達，21例極低度及低度危險組GIST，其陽性表達率90.5%(19/21)，40例中度及高度危險組GIST，其陽性表達率97.5%(39/40)。同時將DOG-1與CD117進行比較觀察，發(fā)現(xiàn)在任何級別的GIST中DOG-1和CD117的表達差異均無統(tǒng)計學意義。DOG-1作為診斷GIST的1個新的標記物，目前文獻報道較少，其在GIST中表達的預后意義尚不十分清楚。本研究發(fā)現(xiàn)DOG-1的表達與腫瘤發(fā)生部位、大小、分級和年齡均無關(guān)，而在13例復發(fā)轉(zhuǎn)移病例中DOG-1陰性3例，與復發(fā)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，與文獻報道相一致[13,14]。這表明DOG-1在GIST的發(fā)展中起重要作用，可作為判斷GIST預后的潛在參考指標。

綜上所述，DOG-1在大多數(shù)GIST中高表達，對診斷GIST及判斷預后提供潛在參考價值。

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