uPA、Cath-D蛋白在胃癌中的表達及臨床意義

肖春衛 何 倩 陳望榮 丘錦煌

胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤，死亡率居各種癌癥之首。導致胃癌預后相對較差,5年生存率低的1個重要因素就是胃癌細胞的浸潤和轉移。本研究采用SP法，檢測uPA、Cath-D在原發性胃癌組織中的表達，以探討它們與臨床病理學特點的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

抽取廣東醫學院附屬西鄉人民醫院1995年1月～2010年12月間的原發性胃癌手術標本68例及配對的距癌灶>5 cm經病理檢查證實為正常的胃黏膜組織標本31例。標本均經10%福爾馬林固定、石蠟包埋，4 μm連續切片，常規HE染色，病理確診。68例胃癌患者中，男性49例，女性19例，年齡25～75歲，平均年齡52.4歲。腫瘤直徑1～10 cm。組織學分化Ⅰ級即高分化乳頭狀(或管狀)腺癌15例，Ⅱ級即中分化管狀腺癌20例，Ⅲ級即低分化腺癌、黏液細胞癌和黏液腺癌共33例。此外，淋巴結有無轉移、腫瘤浸潤深度、有無胃外器官轉移等以術中記錄、術后病理證實為準。

1.2 試劑和方法

所有一抗及SP試劑盒均購自福州邁新公司。采用免疫組化SP法進行染色，染色步驟嚴格按照試劑盒說明進行。每批染色均用已知陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判定

uPA和Cath-D蛋白陽性染色均位于細胞質中，合并計算高倍鏡下(×400)隨機選擇的5個視野中陽性細胞占全部計數腫瘤細胞的百分率，平均每個視野細胞質呈陽性反應的細胞數≥10%為陽性，無明顯陽性反應或陽性反應的細胞數<10%為陰性。

1.4 統計學方法

采用χ2檢驗，所有數據均用SAS6.12軟件分析。

2 結果

2.1 uPA和Cath-D在胃組織中的表達

uPA和Cath-D蛋白在胃癌中的陽性率分別為69.1%(47/68)、77.9%(53/68)，在正常胃黏膜組織中的陽性率分別為25.8%(8/31)、32.3%(10/31)，兩者差異有統計學意義(P<0.01)。

2.2 uPA、Cath-D表達與胃癌病理參數的關系

uPA蛋白表達與胃癌浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期呈正相關，與性別、年齡、腫瘤大小、病理分化程度無關。Cath-D蛋白表達與胃癌的病理分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、臨床分期呈正相關，與性別、年齡、腫瘤大小無關，見表1。

表1 胃癌組織中uPA和Cath-D蛋白表達與其臨床病理因素的關系(例 ，%)

2.3 uPA和Cath-D表達的相關性

分別觀察uPA、Cath-D蛋白在同一胃癌組織標本中的表達情況，68例胃癌組織標本中uPA、Cath-D表達共陽性者39例(57.4%)，共陰性者14例(20.6%)，兩者的表達呈正相關(P<0.01)。

3 討論

腫瘤侵襲轉移過程中，細胞外基質的降解和腫瘤內脈管的生成是腫瘤轉移的關鍵環節。uPA是1種絲氨酸蛋白酶，由多種腫瘤細胞或其他細胞分泌。通過與細胞膜上的特異性受體uPAR結合發揮作用，激活纖溶酶原成為纖溶酶。另外，uPA還激活潛在活性的膠原酶，與纖溶酶一起促使細胞外基質(包括層黏連蛋白、纖維連接蛋白、蛋白多糖和Ⅳ型膠原等)和血管基膜的降解，調節或參與腫瘤細胞的浸潤和遷移過程，最終導致腫瘤細胞的浸潤和轉移[1，2]。越來越多研究發現，在胃癌、肝癌、結腸癌、肺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中uPA表達明顯高于正常組織，并與患者不良預后有關[3，4]，證明它們在腫瘤侵襲轉移中起了重要作用。

本研究結果顯示uPA在正常胃黏膜組織中有少量表達，而在胃癌組織中高表達。兩組相比有顯著統計學差異。uPA的陽性表達率與癌組織的浸潤深度、淋巴結轉移及臨床分期呈正相關。這可能是因為高表達uPA基因的癌細胞降解胞外基質和基膜成分的能力增強，使這部分細胞更易向組織深層和淋巴管浸潤，并導致遠處轉移。本研究的結果與國內外其他學者的研究結果基本一致，提示uPA可作為輔助判斷腫瘤侵襲轉移潛能的分子生物學指標。

Cathepsin D是1種天門冬氨酸肽鏈內切酶，是1種蛋白水解酶，廣泛存在于不同的組織細胞和腫瘤細胞中，正常情況下主要分布于胞質中，亦可見于胞膜上，具有刺激癌細胞生長、降解基膜、細胞外基質和結締組織的作用，為癌細胞的浸潤、轉移提供條件。研究報道[5，6]，cathepsin D在乳腺癌、胃癌、食管癌等惡性腫瘤中異常表達，與腫瘤的浸潤轉移密切相關，是預后差的重要標志之一。

本研究顯示Cathepsin D在正常胃黏膜組織中的表達水平低于胃癌組織(P<0.01)，在低未分化癌組織中表達水平高于高/中分化癌，說明cathepsin 可能在胃癌發生發展中具有重要作用。Cathepsin D在伴有淋巴結轉移癌組織中的表達水平明顯高于不伴有淋巴結轉移者，反映了腫瘤侵襲能力及沿淋巴道的轉移能力，提示cathepsin D高表達的胃癌較低表達的癌具有更強的侵襲、轉移能力，預后較差。本研究還發現，cathepsin D的表達水平與胃癌的浸潤深度，臨床分期等臨床病理特征有關，cathepsin D的表達水平越高，腫瘤分期越高、越容易復發及發生局部淋巴結和遠處轉移。本研究結果提示，cathepsin D異常表達可能在胃癌發病中具有重要作用，cathepsin D有可能成為胃癌的分子標志物及潛在的治療靶標。

CathD還可以激活CathepsinB，誘導產生活化的尿激酶型一纖溶酶原激活劑(uPA)，后者也具有與Cath-D相似的功能[7]。本研究表明，uPA表達與CathD表達呈正相關，uPA和CathD的表達與胃癌的浸潤與轉移有相關性，且兩者的表達具有協同性。這提示兩者的聯合檢測有助于判斷胃癌預后，同時兩者亦有可能成為胃癌分子治療的靶位點。

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